Para comenzar el proceso de preparación del inóculo bacteriano, recoja de 2 a 10 microlitros de la cepa bacteriana del vial, utilizando una punta de pipeta estéril, e inocule una placa de agar sangre disponible comercialmente con ella. Con un asa estéril, raye la superficie del agar, diluyéndola con llamas intermitentes. Incubar la placa de agar preparada en posición invertida a 30 grados centígrados durante unas 20 a 24 horas.
A continuación, seleccione una sola colonia del cultivo bacteriano con una aguja estéril e inocule cinco mililitros de caldo BHI estéril con este cultivo. Incubar el caldo inoculado en una incubadora agitadora a 30 grados centígrados a una velocidad de 150 rotaciones por minuto durante unas 20 a 24 horas. A continuación, transfiera un mililitro del cultivo a un tubo de microcentrífuga estéril y centrifugue a 6.000 g y a temperatura ambiente durante 10 minutos.
Después de la centrifugación, deseche el sobrenadante. Agregue un mililitro de solución salina estéril tamponada con fosfato, o PBS, al gránulo y vuelva a suspenderlo con un vórtice. Centrifugar el gránulo resuspendido a 6.000 g durante 10 minutos a temperatura ambiente y desechar el sobrenadante.
Esta vez, vuelva a suspender el gránulo resultante en un caldo BHI estéril y diluido diez veces con vórtice. Asegúrese de lograr una densidad óptica de alrededor de 0,1 a 600 nanómetros.
