Comience por mantener las moscas a una temperatura de 25 grados centígrados, en frascos estrechos llenos de alimento estándar para drosophila. Abra el baño de agua y ajuste la temperatura según sea necesario. Use una toallita de laboratorio rociada con etanol al 70% para limpiar las juntas de vidrio esmerilado de las cámaras y los tapones de los sensores, y luego use una toallita nueva para eliminar cualquier resto de etanol.
A continuación, coloque un trozo de un centímetro de un rollo de algodón, empapado en agua purificada, en el fondo de la cámara para crear un ambiente estable y húmedo. Agregue suficiente agua para formar un charco modesto en la base del rollo de algodón. Asegúrese de que la junta de la cámara esté seca limpiando el agua derramada.
Transfiera con cuidado las moscas a tubos de polipropileno etiquetados con un embudo y tape los tubos con un rollo de algodón. Ahora, agregue un tubo ventilado que contenga moscas en cada cámara del respirómetro. Llene los cartuchos de cal sodada y colóquelos en la parte superior del tubo que contiene moscas dentro de la cámara.
Luego llene los generadores de oxígeno con una solución saturada de sulfato de cobre, asegurándose de que el nivel permanezca por debajo de los orificios de ventilación. Conecte el generador de oxígeno lleno al conector de dos clavijas ubicado en el enchufe del sensor. Coloque dos pequeñas gotas de grasa de silicona transparente en lados opuestos de la junta de vidrio esmerilado del enchufe del sensor.
Inserte el tapón en la cámara y gírelo suavemente con una presión moderada para distribuir uniformemente la grasa dentro de la junta. Limpie el exceso de grasa con una toallita de laboratorio. A continuación, asegure los tapones de la cámara encajando las abrazaderas de plástico keck.
Coloque las cámaras ensambladas en una rejilla en el baño de agua, asegurándose de que las llaves de paso estén abiertas. Mantenga las llaves de paso en la posición abierta y deje que las cámaras se equilibren durante aproximadamente 30 minutos. Asegúrese de que los interruptores que suministran corriente a los generadores de oxígeno estén apagados.
Conecte los controladores a las cámaras del respirómetro utilizando los seis cables conductores y verifique que las pantallas de diodos emisores de luz orgánica en los controladores muestren activamente los parámetros ambientales. Ahora active los generadores de oxígeno usando el interruptor en el controlador. Una vez que el valor de corriente aumenta de cero a entre 35 y 55 miliamperios, el controlador y la cámara están listos para los experimentos.
Después de apagar los generadores de oxígeno, identifique los puertos de comunicación que están utilizando los controladores. Abra el software PuTTY en el escritorio del escritorio y configure un archivo de registro para cada canal del respirómetro seleccionando el puerto de comunicación para el controlador ingresando el número de ese puerto en el cuadro de línea serie. A continuación, haga clic en registro.
Elija la salida principal en el registro de sesión y, debajo del nombre del archivo de registro, haga clic en examinar. En la carpeta elegida, cree un nombre de archivo que contenga información descriptiva. A continuación, haga clic en Guardar.
Haga clic en abrir y se abrirá una ventana que muestra los datos delimitados comunes que se están registrando. Repita este proceso para todos los demás controladores que se utilicen. Cada entrada de puerto de comunicación se mostrará en una ventana separada.
Después de equilibrar las cámaras durante 30 minutos, séllelas cerrando las llaves de paso. Cubra el baño y las cámaras con una caja de espuma de poliestireno para crear un ambiente estable y mantener el equilibrio durante una hora. Inicie la corriente al generador de oxígeno de cada cámara usando el interruptor ubicado en la caja del controlador.
Una vez activados los generadores de oxígeno, verifique que la presión aumente a la presión de salida predefinida. Después del experimento, apague los generadores de oxígeno de todos los controladores y abra las llaves de paso para abrir las cámaras. Deje que las ventanas PuTTY permanezcan abiertas durante cinco a 15 minutos para establecer una línea de base final y, a continuación, finalice las grabaciones cerrando la ventana PuTTY para cada controlador.
Desconecte los sensores de los cables y transporte las cámaras a la rejilla seca. Uno por uno, retire los tapones de los sensores de las cámaras. Desconecte los generadores de oxígeno y colóquelos con cuidado en la rejilla de tubos.
A continuación, limpie la grasa del tapón del sensor y vuelva a colocarlo en la rejilla. Limpie la grasa de las juntas de la cámara y retire los tubos que contienen moscas y cal sódica. Por último, registra el peso y el número de moscas de cada tubo.
Los datos cuantitativos de consumo de oxígeno para moscas mutantes de tipo salvaje y delta de barril 18 mostraron que el consumo específico de oxígeno de masa no fue significativamente diferente entre los controles de tipo salvaje y los mutantes delta 18 de barril. El consumo de oxígeno analizado por mosca mostró que el consumo de oxígeno se redujo significativamente en el delta de barril 18 en comparación con los controles de tipo salvaje. Sin embargo, la masa media de las moscas delta 18 de barril fue menor que la de los controles de tipo salvaje.
