Para comenzar, incide con cuidado la piel del ratón sacrificado, comenzando desde la abertura del cráneo y extendiéndose hacia el área frontal. Con unas tijeras, levante y retire delicadamente el cráneo sin dañar las leptomeninges, recogiendo todo el cerebro. Sumerge todo el cerebro en el tampón de lavado y enjuágalo suavemente para eliminar la sangre de la superficie.
Transfiera el cerebro a una placa de Petri estéril sin picar. Luego, bajo un microscopio, use pinzas de punta fina para extraer las leptomeninges de la superficie del cerebro. Con unas tijeras estériles, corte el tejido de las leptomeninges en fragmentos.
Repare la mezcla de enzimas digestivas utilizando los componentes dados. Agregue 10 mililitros de mezcla a los fragmentos e incube a 37 grados centígrados durante 15 minutos. Agite suavemente para separar los fragmentos del fondo del tubo.
Luego, agregue 10 mililitros de tampón de parada. Centrifugar la suspensión a 300 g durante cinco minutos a cuatro grados centígrados. Y con una pipeta, retire con cuidado el sobrenadante.
Agregue 10 mililitros de PBS frío y filtre los grumos a través de un colador de 70 micrones en un tubo estéril de 50 mililitros. Colocar 10 a la quinta celda por centímetro cuadrado en un matraz T25 recubierto de fibronectina con cinco mililitros de medio de cultivo, e incubar a 37 grados centígrados con dióxido de carbono al 5% durante 24 horas. Después de la incubación, reemplace el medio con un medio nuevo para eliminar las células no adheridas.
