Para comenzar el método de la gota colgante, pipetee 20 microlitros de una suspensión de células de la piel preparada previamente en la tapa de una placa de Petri. Ahora, cubre la tapa con la mitad inferior de la placa de Petri y gírala suavemente para crear las gotas colgantes. Agregue agua estéril a la placa de Petri para evitar la evaporación del medio adulto de las gotas.
Incubar las gotitas durante 48 a 72 horas a 37 grados centígrados. A continuación, llene los pocillos de una nueva placa con el medio de crecimiento completo. Con puntas de pipeta cortadas estériles, transfiera las esferas celulares a los pocillos de la placa de pocillos múltiples.
Incubar las esferas transferidas durante un día en la placa de pocillos múltiples a 37 grados centígrados antes de la experimentación. Para el método de adhesión de la célula limitante, primero agregue 100 microlitros de solución de surfactante al 1% en PBS en cada pocillo de una placa de fondo en U. A continuación, incube la placa con la solución a 37 grados centígrados durante 24 horas.
Ahora, prepare la suspensión celular en la densidad celular deseada. Pipetear la solución de surfactante de los pocillos, luego sembrar 50 microlitros de la suspensión celular en cada pocillo. Finalmente, incube la placa a 37 grados centígrados durante 24 horas para alcanzar los agregados celulares.
Las esferas que constaban de 10.000 células eran más fáciles de manipular, ya que eran visibles en los pozos. Las esferas más grandes mostraron una estabilidad disminuida. Diferentes tipos de células formaron esferas de diferentes colores.
Las esferas perfectamente redondeadas eran propensas a perder su forma durante la transferencia en el método de caída colgante. Se requería un manejo preciso para reducir la deformación que daba como resultado agregados de celdas intactos. La imprecisión y la inexperiencia provocaron daños en la esfera.
