Preparación de una suspensión celular a partir de los cultivos celulares de piel adherentes

Para comenzar, retire el medio respectivo de los matraces de cultivo que contienen los queratinocitos, fibroblastos y melanocitos. Lave suavemente las células con cinco a 10 mililitros de PBS. Ahora añada de 0,5 a dos mililitros de solución de tripsina-EDTA al matraz, dependiendo de su tamaño.

Incubar el matraz a 37 grados centígrados. Use un microscopio para controlar el desprendimiento de células de la superficie. Suspender las células desprendidas en el doble del volumen de Tripsina Neutralizador para desactivar la Tripsina.

Luego transfiera la suspensión a un tubo de 15 mililitros. Ahora pipetea unos 20 microlitros de la suspensión de células de la piel en un tubo de 1,5 mililitros. Con la ayuda de un hemocitómetro, cuente las células A continuación, centrifuga el tubo a 300 g durante cinco minutos a temperatura ambiente.

A continuación, pipetee la mayor parte del sobrenadante y vuelva a suspender el pellet de célula en la pequeña cantidad de líquido restante. Agregue un volumen igual de medio fresco a las células resuspendidas. En un tubo separado de 15 mililitros, prepare la suspensión de celdas.

Las células primarias de queratinocitos, melanocitos, fibroblastos y mastocitos presentaron su morfología típica cuando crecieron en sus respectivos medios.