Para comenzar, vaya a la interfaz del sitio web de la base de datos TIMER2.0. Seleccione la pestaña Exploración del cáncer. Introduzca el ID del gen en el cuadro de búsqueda y haga clic en Enviar para producir las imágenes de expresión diferencial de TMEM200A en varios tipos de tumores.
Para la transfección, etiquete tres tubos de microcentrífuga como siRNA-1, 2 y 3. A continuación, agregue el reactivo de transfección seguido del medio basal en cada tubo. agregue cuatro microgramos de siRNA a los tubos respectivos y mezcle bien.
Ahora distribuya la mezcla en los tres pocillos de la placa de seis pocillos que contiene las células de adenocarcinoma. Agite suavemente el plato para asegurar una distribución uniforme de la mezcla. Etiquete los tres pocillos donde se agregó la mezcla como siRNA 1, siRNA dos y siRNA tres.
Después de incubar las células durante cuatro a seis horas, reemplace la mitad del medio en los pocillos marcados con medio completo fresco. Incubar las células durante 24 a 48 horas antes de usarlas para RTPCR cuantitativa y Western blot.
