Para comenzar, registre el peso de cada ratón, luego coloque al ratón sacrificado en decúbito supino y asegure sus extremidades con cinta adhesiva. Use alcohol isopropílico al 70% para esterilizar el área quirúrgica. A continuación, cree una incisión en la línea media de la piel comenzando desde la parte media del abdomen hasta la región cervical anterior.
Para acceder a la tráquea, retraiga con cuidado las almohadillas de grasa, mueva lateralmente los músculos de la correa y separe la tráquea del tejido conectivo circundante. Con fórceps, cree un espacio entre la tráquea y el esófago. A continuación, levante el xifoides y corte el diafragma.
Inserte un hemostático para elevar el esternón y obtener un camino sin obstrucciones desde el esternón hasta la región del cuello. Sujete la caja torácica por ambos lados y corte a través del esternón que se extiende a través de los músculos del cuello. Ahora retire el timo y cualquier grasa o músculo que obstruya la tráquea para exponer la bifurcación traqueal.
Corta los bronquios principales y separa cuidadosamente las vías respiratorias del esófago. Después, corta la laringe y retírala. Rocíe la tráquea disecada con una solución salina estéril o una solución de conservación.
Use una gasa estéril empapada en solución salina estéril o de conservación y colóquela sobre hielo para mantener la viabilidad. Después de anestesiar ligeramente al ratón y una cámara de inducción, inyectar intraperitonealmente un cóctel compuesto por xilacina y ketamina. Devolver el ratón a la cámara de inducción con 2 a 3% de isoflurano mantenido.
A continuación, afeita el pelaje en el sitio quirúrgico. Confirmar la ausencia de respuesta refleja a un pinzamiento del dedo del pie antes de la intubación orotraqueal. Con un catéter intravenoso de calibre 20, intuble al ratón por vía orotraqueal y conéctelo a un ventilador con 50% de oxígeno y 2% de isoflurano.
Ahora, active una almohadilla térmica y coloque el mouse en una posición lateral derecha en la almohadilla con la cabeza alejada del cirujano y la cola hacia el cirujano. A continuación, asegure las extremidades con cinta adhesiva. Aplique ungüento veterinario en los ojos para evitar la sequedad mientras está bajo anestesia.
Frote el área quirúrgica primero con yodo de povidona al 7,5, luego con alcohol isopropílico al 70% y, finalmente, con yodo de povidona al 10%. Durante este tiempo, cargue la tráquea del donante en un catéter intravenoso de calibre 16. Después de hacer una incisión en la piel del receptor, cauterice el músculo y el tejido conectivo.
Con dos retractores, abra el quinto o sexto espacio intercostal y mantenga abierta la caja torácica. A continuación, utilice bastoncillos de algodón y tijeras para diseccionar el ligamento pulmonar inferior. Simular la creación de la vía para la tráquea del donante.
Para asegurar el tubo de salida del ventilador, ocúbalo parcialmente con una llave de paso de tres vías para facilitar el inflado del pulmón izquierdo. Perfore el pulmón izquierdo con una aguja de calibre 20 para crear una vía. A continuación, inserte el catéter intravenoso de calibre 16 en el pulmón izquierdo y extruya la tráquea del donante en él.
Después de la inserción del aloinjerto traqueal, suelte la llave de paso de tres vías para permitir un flujo espiratorio sin obstrucciones a través del tubo de salida. Para cerrar el sitio de inyección pleural, coloque el clip con precisión en el sitio de punción con su borde alineado con el contorno del borde del pulmón. Luego llene la cavidad torácica con solución salina y absorba la solución salina con una gasa.
Vuelva a inflar el pulmón izquierdo y cierre las costillas con una sutura corrida. Cierre el músculo y la piel con suturas interrumpidas. Ahora, apague el isoflurano y administre el analgésico meloxicam por vía subcutánea al final de la cirugía.
Observe al ratón receptor hasta que esté despierto. A continuación, retire el tubo traqueal y coloque al ratón receptor en una jaula. Un aloinjerto traqueal mostró una obstrucción completa con el tejido fibroblástico y las células epiteliales estaban visiblemente destruidas.
Por el contrario, un isoinjerto traqueal permaneció permeable y las células epiteliales se conservaron. Se observaron agregados linfoides en el pulmón con el aloinjerto traqueal trasplantado.
