Para comenzar, prepare una aguja de mariposa de 23G cortando su protección de manga de plástico, de modo que el extremo de la aguja desnuda quede expuesto 7 milímetros. Luego, conecte la aguja de mariposa con un tubo de polímero a una jeringa de 1 mililitro. Coloque una rata anestesiada en un marco estereotáxico y mantenga la anestesia a través de una máscara facial.
A continuación, retira el pelaje de la parte trasera de la cabeza y el cuello de la rata. Fija la cabeza de la rata con barras en las orejas. Mueva la barra de la nariz del marco estereotáxico para bajar la cabeza del animal aproximadamente 45 grados verticalmente.
Encuentre una superficie ligeramente deprimida en la parte posterior de la cabeza con el aspecto de un rombo entre la protuberancia occipital y la espina del atlas. Frote la superficie con etanol al 70%. Para la recolección de LCR, inserte la aguja de mariposa verticalmente en el centro de la superficie deprimida en forma de rombo en la cisterna magna hasta que el movimiento sea bloqueado por la protección de la funda de plástico de la aguja.
Tire suavemente del pistón de la jeringa para dejar que el líquido cefalorraquídeo fluya lentamente a través de la aguja. Recoja alrededor de 100 microlitros de líquido cefalorraquídeo en un tubo de polímero. Pellizca el tubo de polímero muy cerca de la aguja de mariposa y corta el tubo en este punto.
Extrae la muestra transparente en la jeringa. Expulse la muestra en el microtubo estéril de 0,2 mililitros y guárdela en hielo durante un máximo de una hora. Desinfecte el sitio de extracción del líquido cefalorraquídeo en la cabeza del animal.
Retira a la rata del marco estereotáxico y vuelve a colocarla en su jaula. Reserve 2 microlitros de la muestra para el control de calidad y almacene el resto a 80 grados centígrados para su posterior análisis. Se realizó una retirada repetida del LCR a lo largo de cinco días en tres grupos experimentales de ratas y se expresó como un porcentaje de extracciones exitosas que dieron lugar a un LCR claro.
En las ratas dotadas de implantes de doble cabeza canuladas para la extracción del LCR, la tasa de éxito fue del 71,1%, lo que indica que la cánula en la cabeza del animal puede interferir con la toma repetida de muestras de LCR. Por el contrario, cuando la recolección de LCR se llevó a cabo mediante punción de cisterna magna en animales solo con electrodos anclados o de telemetría, la tasa de éxito fue del 86,7% y del 88,9%.
