Los autores no tienen ninguna agradecimientos para hacer.

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Consejo de Universidad médica de Tongji en el Animal cuidado Comité de Huazhong University of Science y tecnología (Wuhan, China). El manuscrito fue preparado según llegan (investigación Animal: presentación de informes de experimentos In Vivo ) directrices6.
1. cría
<ol><li>Utilizar ratas Sprague-Dawley (SD) (n = 20, 10 hombres, 8 semanas de edad, pesa 261 a 291 g, significan = 272.85 ±9.07 g) de la Universidad Experimental animales centro de Huazhong de la ciencia y la tecnología y mantener ratas según la guía para el cuidado y uso de Animales de laboratorio publicados por nosotros Instituto Nacional de salud (NIH publicación No.85-23, revisada en 1996)</li>
	<li>Casa bajo condiciones estándar con libre acceso a alimentos y agua potable. Manten a las ratas en jaulas de2 530 cm con madera-afeitado ropa de cama. Casa de dos ratas en cada jaula. Mantener jaulas todo abierto para el ambiente (no micro-aislamiento o jaulas ventiladas)</li>
	<li>Asegúrese de que el personal que participa en el protocolo experimental manejar regularmente las ratas.</li>
	<li>Mantener la temperatura entre 21 ° C y 23 ° C. Dar índices de una dieta normal de sal (0.3% NaCl) durante todo el estudio.</li>
</ol>2. procedimiento de recogida de sangre
Nota: El sistema de colección de sangre vacío consiste en una aguja de doble punta [22 G (0,7 x 25 mm)], un soporte de plástico y una serie de tubos de vacío (2 mL) con tapones de goma (figura 1).
<ol><li>Colocar la rata en un soporte plástico de retención y lavar la cola con agua tibia (20-30 ° C) para eliminar la suciedad visible o las heces. Mientras un asistente sostiene la cola en una posición extendida, limpie la cola con etanol al 70% y limpiar con una gasa para aclarar la vena.</li>
	<li>Inserte la punta de la aguja de 22 G mariposa en una de las venas laterales de la cola (alrededor de 5 mm) en una posición aproximadamente 2-3 cm de la punta de la cola en ángulo de aproximadamente 20 ° (figura 2). Recoja la sangre en el tubo de la colección vacío insertando el extremo de la goma de la aguja de la mariposa en el tubo de la colección de la sangre del vacío (figura 3). Nota: El volumen de sangre recogida máxima es 1,2 mL7.</li>
	<li>Después de la recolección de sangre, retire la aguja y suavemente aplique presión en el sitio de punción con una gasa por 15-30 s detener el flujo de sangre. Luego, suelte la rata del soporte de retención plástico y retomar su jaula de la rata.</li>
	<li>Utilizar tubos que contienen EDTA como anticoagulante para recolectar plasma de sangre. Invierta suavemente el tubo varias veces para mezclar el anticoagulante en la sangre y coloque las muestras en hielo vertical.</li>
	<li>Centrifugar los tubos de colección de muestras de sangre en una centrífuga refrigerada a 2.000 x g por 10 min separar el suero o plasma.</li>
	<li>Extraer el plasma/suero, teniendo cuidado de no para molestar a las capas de la célula de sangre roja y blanca. Para recoger el suero de la sangre, se pueden utilizar tubos sin anticoagulante. Ambos tipos de muestra pueden utilizar inmediatamente o almacenadas a-80 ° C por hasta un año. Nota: Colección de sangre exitosa se definió como obtener 1,2 mL de sangre cada vez. Tiempo máximo de punción fue establecido en tres ensayos, si el volumen de sangre total fue inferior a 1,2 mL después de la tercera punción, se definió como una colección de sangre. La duración del muestreo se inicia desde la punción de la vena de la cola a la remoción de la aguja de la mariposa después de la recolección de sangre.</li>
	<li>
Recoger la sangre dos veces en dos semanas7.
	<ol>
<li>Para comprobar y verificar la viabilidad de este método, tren de dos estudiantes de medicina (principiantes) por 2 h antes de realizar este protocolo de extracción de sangre. Utilizar veinte ratas y extraer la sangre de 10 ratas por compañeros experimentados 2 (grupo experimental) y de 10 ratas por los estudiantes de medicina 2 (grupo para principiantes).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. estadístico análisis
<ol><li>Expresar los datos como un valor medio ± desviación estándar y análisis con SPSS estadística 17. Un valor α de 0.05 fue elegido, por lo tanto p < 0.05 se consideró estadísticamente significativo.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar

El actual informe describe un método de colección de sangre fácil de aprender en ratas. Nuestros resultados mostraron que este método es viable para recoger repetidamente un volumen grande de sangre de las ratas. Además, este método podría ser dominado fácilmente con una curva de aprendizaje a corto plazo. Este procedimiento se puede realizar en las ratas no anestesiados y sólo produce mínimo estrés a los animales.
Sangre se puede recoger de ratas en varios lugares. La vena de la cola es una ubicación superior para toma de muestras de sangre4. Sin embargo, no siempre es fácil obtener suficiente volumen de sangre de la vena de la cola de flujo de sangre delgada y baja de las ratas. El sistema de colección de sangre vacío generalmente se utiliza para recoger muestras de sangre de pacientes en la práctica clínica diaria. Este sistema de colección de sangre vacío se ha utilizado en pacientes y animales de investigación por un tiempo8,9,10. Este sistema consiste en un tubo de colección de sangre vacío con aguja de pared y mariposa de tubo interior recubierto de silicona. Se basa en el principio de presión negativa del vacío y permite la elaboración continua de sangre sin el riesgo de la recogida de sangre, que también reduce la posibilidad de contaminación y hemólisis11. El volumen de muestra de sangre en el catéter es de unos 0,3 mL. Después de retirar la aguja de la vena de la cola, fluirá a la sangre en el catéter en el tubo colector de vacío por el vacío. Este método también es aplicable para la recogida de sangre de ratas que pesen menos de 100 g con el uso de una aguja de punción más pequeños.
Este método de colección de sangre tiene varias ventajas. Este procedimiento sólo provoca lesiones mínimas a las ratas y de muestras de sangre se pueden realizar sin el uso de anestésicos, así se puede evitar la influencia de la respuesta de estrés y anestésicos en la muestra de sangre. Nuestras observaciones demostraron que las ratas estaban en silenciosa en el soporte plástico de restricción durante el procedimiento y no había muertes durante estos experimentos. En segundo lugar, repetida de muestras de sangre cada uno o dos días es posible, que permite el muestreo frecuente de la sangre con un volumen adecuado para diversos fines de investigación. Por último, este método es fácil de aprender y domina fácilmente por los principiantes después de un período de aprendizaje corto (2 h), según lo indicado por las tasas de éxito similares y los tiempos de la punción entre los grupos experimentales y principiante en este informe. En un informe anterior, Lee et al demostraron un método similar de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata4. Nuestro método es más simple que el reportado por Lee et al. 4 en que directamente insertamos de la aguja de punción en la vena de la cola y el otro extremo del tubo está conectado directamente con el tubo de vacío para la recolección de la sangre, sin el uso de una jeringa extra y aspiración manual de la sangre y sin la necesidad de ' leche Ing' la vena para facilitar el flujo de sangre. Recolección de sangre con este sistema cerrado reduce el riesgo de contaminación de la sangre. Uso del soporte de retención plástico también reduce el estrés en la rata y facilita la fijación de la cola.
Los siguientes dos pasos son fundamentales para la aplicación exitosa de este método. 1) extender la cola y evitar el movimiento de la cola; 2) suavemente punción en la vena en un ángulo de 20 º para evitar la punción en la vena y mantener la aguja de punción en la vena.
En conclusión, el método de colección de sangre vacío adoptado en ratas es segura, factible y fácil de practicar. Este método permite frecuentes muestras de sangre con un volumen adecuado de sangre Obtenido de ratas no anestesiados.

La muestra de sangre de las ratas es necesaria para una gran variedad de estudios experimentales. Técnicas para recolección de sangre de la rata, como punción del corazón, del plexo orbital retro, vena yugular, vena safena, vasos de cola, la arteria carótida, aorta abdominal y vena cava. Mayoría de las técnicas (excepto la vena safena y punción de vasos sanguíneos de la cola) requiere anestesia1,2. Rutinariamente se pinchan las venas de la cola de rata para tomar muestras de sangre y de la inyección vascular. Después de tratar la cola con agua caliente, los vasos sanguíneos son dilatados y adecuado para la manipulación, incluso cuando las ratas son anestesiados3.
A pesar del desarrollo de nuevas y mejores técnicas para obtener muestras de sangre en el laboratorio pequeños animales2, no siempre es fácil obtener suficiente sangre al muestreo de pequeños animales. La vena de la cola de las ratas es una excelente ubicación para el muestreo de sangre4. Sin embargo, la vena de la cola es delgada, así es a veces difícil de pinchar y tomaría un largo tiempo para conseguir suficiente sangre debido a la reducción del flujo sanguíneo. Colección de la sangre a través de un sistema de tubo de aspiración es un método típico en la práctica clínica diaria. Este sistema cerrado para recoger la sangre reduce el riesgo de exposición directa a sangre y ha hecho más fácil tomar muestras múltiples de una sola venopunción5. El actual informe describe un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante el sistema de tubo de aspiración. Este método es fácil de dominar y puede utilizarse para obtener un gran volumen de sangre repetidamente en las ratas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="634">
	<tbody>
		<tr height="71">
			<td height="71" style="height:71px;width:192px;">a double-pointed needle</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">22G&#160;</td>
			<td style="width:79px;">(0.7&#215;25mm)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">vacuum tubes</td>
			<td style="width:244px;">Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">2 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:192px;">rat restraining holder&#160;</td>
			<td style="width:244px;">Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td>
			<td style="width:120px;">250g rat hoder model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="140">
			<td height="140" style="height:140px;width:192px;">normal salt diet for rats</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:79px;">Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:192px;">SPSS software for statistical analysis</td>
			<td>SPSS Inc,&#160; Chicago; USA&#160;</td>
			<td style="width:120px;">Version 17.0.&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Sangre se puede recoger de ratas en un número de localizaciones de muestreo. Por ejemplo, la vena de la cola es una ubicación superior para tomar muestras de sangre. Sin embargo, la vena de la cola es delgada por lo que a veces es difícil de pinchar. Además, la vena de la cola tiene reducción del flujo sanguíneo y requiere un tiempo de muestreo largo para obtener suficiente sangre. El actual informe describe un método de muestreo de sangre simple, el método de recogida de la sangre del vacío, que generalmente se utiliza para obtener muestras de sangre de los pacientes, que aquí se utiliza para las ratas no anestesiados. La punta de la aguja de 22 G mariposa fue insertada en una de las venas laterales de la cola aproximadamente 2-3 cm de la punta de la cola en un ángulo de aproximadamente 20° y la sangre fue recogido en el tubo de la colección vacío insertando el extremo de la goma de la aguja de la mariposa en el va tubo de colección de sangre cuum. Los resultados experimentales muestran que la tasa de éxito fue 95% en el grupo experimental y el 90% en el grupo de principiantes. La tasa de éxito y tiempos de punción fueron similares entre los dos grupos. La duración del muestreo fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con el grupo de principiantes. En conclusión, este método de colección de sangre vacío para muestreo secuencial de la sangre de la vena de la cola de no - anestesiadas ratas es factible y fácil de aprender, que podría servir como una alternativa fiable al otro convencionalmente utiliza técnicas de muestreo de sangre para ratas.

Duración del muestreo, masa corporal y volumen de la colección de la sangre de los dos grupos Se extrajo sangre de 10 ratas (5 varones) dos veces dentro de dos semanas en cada grupo. La masa corporal promedio en ambos grupos fue similar (272,00 g ±9.66 y g ±8.87 273.70). Duración de muestreo fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con el grupo de principiante (2,77 ±0.53 min vs 3.28 ±0.83 min, p < 0.05) (tabla 1).
Éxito la tarifa y de la puntura veces de dos grupos La tasa de éxito fue 95% (19/20) en el grupo experimental y el 90% (18/20) en el grupo de principiante (p > 0.05). Tiempos de punción no fueron significativamente diferentes entre los dos grupos (1.50 min ±0.61 vs 1.85 ±0.75 min, p > 0.05) (tabla 2). Estos resultados indican que este método es fácil de aprender, y la técnica podría ser dominada después de un entrenamiento de 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Figura 1 : tubo de colección de sangre vacío 2 mL (izquierda), aguja de la mariposa de 22 G (centro), el soporte de retención plástico (derecha). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Figura 2 : Punta de la aguja fue insertada en la vena lateral de la cola (alrededor de 5 mm) en la posición de la punta de la cola en ángulo de aproximadamente 20 ° aproximadamente 2-3 cm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Figura 3 : Venopunción exitosa. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Grupo experimental</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Grupo principiante</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Género</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volumen de recogida de sangre (mL)</td>
			<td>duración del muestreo (min)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Género</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volumen de recogida de sangre (mL)</td>
			<td>duración del muestreo (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>274</td>
			<td>0,9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Promedio</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2.77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-1: número de serie de ratas en el grupo experimental de la primera colección de la sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-2: número de serie de ratas en el grupo experimental para la segunda colecta de sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: número de serie de ratas en el grupo de principiantes para la primera colección de la sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: número de serie de ratas en el grupo de principiantes para la segunda colecta de sangre.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 1: Resultados de sangre recogidos en el grupo experimental y el grupo de principiantes.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Tiempos de recogida de sangre</td>
			<td>Tiempos promedio de punción</td>
			<td>Una punción de tiempo</td>
			<td>Pinchar dos veces</td>
			<td>Tres veces de la puntura</td>
			<td>No se pudo</td>
			<td>Tasa de éxito</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo experimental</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.61 1.50</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo principiante</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.75 1.85</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Una punción de tiempo: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la primera punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Dos veces la punción: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la segunda punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
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<tr>
<td colspan="6">Tres veces la punción: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la tercera punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
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<tr>
<td colspan="5">Error: número de ratas con no recolección de la sangre después de la tercera punción</td>
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</tbody></table>Tabla 2: Comparación de los tiempos de punción y las tasas de éxito del grupo experimental y el grupo de principiantes.

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Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Aquí, describimos un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante un sistema de tubo de aspiración. Este método reduce el riesgo de exposición directa a sangre y simplifica la toma de muestras múltiples de una sola venopunción.

Repetidos de muestras de sangre de vena de la cola de las ratas no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

35.4K vistas.  Jianghan University. Aquí, describimos un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante un sistema de tubo de aspiración. Este método reduce el riesgo de exposición directa a sangre y simplifica la toma de muestras múltiples de una sola venopunción.

Video: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Colección Protocolo de páncreas humano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Investigación

Medicina

Dried Blood Spot Collection of Health Biomarkers to Maximize Participation in Population Studies

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spots meet this need, and can be collected in the field with high response rates. These elements are particularly important in longitudinal study designs including interventions where attrition is critical to avoid, and high response rates improve the interpretation of results. Dried Blood Spot sample collection is simple, quick, relatively painless, less invasive then venipuncture, and requires minimal field storage requirements (i.e.&#160;samples do not need to be immediately frozen and can be stored for a long period of time in a stable freezer environment before assay). The samples can be analyzed for a variety of different analytes, including cholesterol, C-reactive protein, glycosylated hemoglobin, numerous cytokines, and other analytes, as well as provide genetic material. DBS collection is depicted as employed in several recent studies.

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease or health. In population and social sciences, biomarkers need to be easy to obtain, transport, and analyze. Dried Blood Spot (DBS) collection meets this need, can be collected in the field with high response rates&#160;and analyzed for a variety of biomarkers.

Sangre Seca Colección de Biomarcadores de salud para maximizar la participación en estudios de población

Biomarkers are directly-measured biological indicators of disease, health, exposures, or other biological information. In population and social sciences, ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female genital tract (FGT). Because heterosexual transmission now represents the dominant mechanism of HIV transmission, and given the continual spread of sexually transmitted infections (STIs), it is critical to understand the interplay between host and pathogen at the genital mucosa. The substantial gaps in knowledge around FGT immunity are partially due to the difficulty in successfully collecting and processing mucosal samples. In order to facilitate studies with sufficient sample size, collection techniques must be minimally invasive and efficient. To this end, a protocol for the collection of cervical cytobrush samples and subsequent isolation of cervical mononuclear cells (CMC) has been optimized. Using ex vivo flow cytometry-based immunophenotyping, it is possible to accurately and reliably quantify CMC lymphocyte/monocyte population frequencies and phenotypes. This technique can be coupled with the collection of cervical-vaginal lavage (CVL), which contains soluble immune mediators including cytokines, chemokines and anti-proteases, all of which can be used to determine the anti- or pro-inflammatory environment in the vagina.

The use of cytobrush sampling to collect lymphocytes and monocytes from the endocervix is a minimally invasive technique that provides samples for analysis of female genital tract immunity. In this protocol, we describe the collection of cytobrush samples and immune cell isolation for flow cytometry assays.

Colección, Aislamiento, y citometría de flujo análisis de las muestras endocervicales Humano

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Arteria embólico cerebral media oclusión (MCAO) para el ictus isquémico con homólogas coágulos de sangre en las ratas

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood banks. Cells fragment off microparticles (MP) when they are stressed. Blood and blood components may contain cellular fragments from a variety of cells, most notably from activated platelets. When performing their roles as innate immune cells and major players in coagulation and hemostasis, platelets change shape and generate microparticles. With dynamic light scattering (DLS)-based microparticle detection, it is possible to differentiate activated (high microparticle) from non-activated (low microparticle) platelets in transfusions, and optimize the use of this scarce blood product. Previous research suggests that providing non-activated platelets for prophylactic use in hematology-oncology patients could reduce their risk of becoming refractory and improve patient care. The goal of this screening method is to routinely differentiate activated from non-activated platelets. The method described here outlines the steps to be performed for routine platelet inventory management in a hospital blood bank: obtaining a sample from a platelet transfusion, loading the sample into the capillary for DLS measurement, performing the DLS test to identify microparticles, and using the reported microparticle content to identify activated platelets.

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative in hospital blood banks. The goal is to differentiate activated from non-activated platelets to optimize the use of platelets. Providing non-activated platelets to hematology-oncology patients might reduce their high risk to become refractory.

Rutina de detección del método de micropartículas en las transfusiones de plaquetas

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Punción de la vena subclavia como método alternativo de recogida de muestras de sangre en las ratas

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. Research focusing on cardiovascular disease models, potential cardiovascular therapeutic targets or pharmaceutical agents requires assessment of systemic arterial pressure and heart rhythm changes. In situations where radio telemetry systems are not available or affordable, the technique of femoral artery cannulation is an alternative way to obtain intra-arterial pressure waveform recordings and systemic BP measurements. This technique is economical and can be performed with standard equipment in animal facilities. However, invasive arterial pressure recording requires cannulation of small arteries, which can be a challenging surgical skill. Here, we present step-by-step protocols for femoral artery cannulation procedures. Key procedures include the calibration of the data acquisition system, tissue dissection and femoral artery cannulation, and setup of the arterial cannulation system for pressure recording. Surface electrocardiography recording procedures are also included. We also present examples of BP recordings from normotensive and hypertensive rats. This protocol allows reliable direct recordings of systemic BP with simultaneous electrocardiography.

Here, we describe a setup for simultaneous recording of electrocardiography and intra-arterial blood pressure (BP) in experimental rats, which can be done with standard equipment in animal facilities and can be applied to physiological or pharmacological studies to investigate pathogenic or therapeutic mechanisms in cardiovascular medicine.

Grabación simultánea de electrocardiografía y sangre invasiva presión medida en ratas

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

A New Best Practice for Validating Tail Vein Injections in Rat with Near-infrared-Labeled Agents

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part of many experimental procedures where reagents need to be introduced directly into the bloodstream. Unwittingly, the injection can be subcutaneous, possibly altering the scientific outcomes. Utilizing a nanoemulsion-based biological probe with an incorporated near-infrared fluorescent (NIRF) dye, this method offers the capability of imaging a successful tail vein injection in vivo. With the use of a NIRF imager, images are taken before and after the injection of the agent. An acceptable IV injection is then qualitatively or quantitatively determined based on the intensity of the NIRF signal at the site of injection.

Here we present a method to validate tail vein injections in rats by utilizing near-infrared fluorescence imaging data from dyes incorporated into agents or biological probes. The tail is imaged before and after the injection, the fluorescent signal is quantified, and an assessment of the injection quality is made.

Una mejor práctica para la validación de las inyecciones de vena de cola en rata con agentes cerca infrarrojo-marcado con

Intravenous (IV) administration of agents into the tail vein of rats can be both difficult and inconsistent. Optimizing tail vein injections is a key part ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in research work. Tail blood collection is a popular method when a small amount of blood sample is needed. Orbital artery could be considered if a large amount of blood is needed but this blood collection method has ethical issues. Formerly, we demonstrated the feasibility and safety of blood sample collection through subclavian vein puncture in rats, and here we investigate whether this method could be used in mice. We report that this method is safe and practical for blood collection in mice. Blood collection through the subclavian vein puncture in mice can be a convenient method in daily research works.

Here, we present a protocol to take blood samples from the subclavian vein of mice.

Recolección de sangre a través de punción venosa Subclaviana en ratones

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central nervous system (CNS). However, further optimization of these technologies would benefit from methods allowing rapid and streamline determination of the extent of CNS and cell-specific targeting upon administration of viral vectors or nanoparticles in the body. Here, we present a protocol that takes advantage of the high throughput and multiplexing capabilities of flow cytometry to allow a straightforward quantification of different cell subtypes isolated from mouse brain or spinal cord, namely microglia/macrophages, lymphocytes, astrocytes, oligodendrocytes, neurons and endothelial cells. We apply this approach to highlight critical differences between two tissue homogenization methods in terms of cell yield, viability and composition. This could instruct the user to choose the best method depending on the cell type(s) of interest and the specific application. This method is not suited for analysis of anatomical distribution, since the tissue is homogenized to generate a single-cell suspension. However, it allows to work with viable cells and it can be combined with cell-sorting, opening the way for several applications that could expand the repertoire of tools in the hands of the neuroscientist, ranging from establishment of primary cultures derived from pure cell populations, to gene-expression analyses and biochemical or functional assays on well-defined cell subtypes in the context of neurodegenerative diseases, upon pharmacological treatment or gene therapy.

We present a flow cytometry method to identify simultaneously different cell types retrieved from mouse brain or spinal cord. This method could be exploited to isolate or characterize pure cell populations in neurodegenerative diseases or to quantify the extent of cell targeting upon in vivo administration of viral vectors or nanoparticles.

Caracterización citométrica de flujo simultáneo de múltiples tipos de células recuperadas del cerebro del ratón/cordón espinal a través de diferentes métodos de homogeneización

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...