Name: repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system
Uploaded: 2017-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
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Los autores no tienen ninguna agradecimientos para hacer.

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Consejo de Universidad médica de Tongji en el Animal cuidado Comité de Huazhong University of Science y tecnología (Wuhan, China). El manuscrito fue preparado según llegan (investigación Animal: presentación de informes de experimentos In Vivo ) directrices6.
1. cría
<ol><li>Utilizar ratas Sprague-Dawley (SD) (n = 20, 10 hombres, 8 semanas de edad, pesa 261 a 291 g, significan = 272.85 ±9.07 g) de la Universidad Experimental animales centro de Huazhong de la ciencia y la tecnología y mantener ratas según la guía para el cuidado y uso de Animales de laboratorio publicados por nosotros Instituto Nacional de salud (NIH publicación No.85-23, revisada en 1996)</li>
	<li>Casa bajo condiciones estándar con libre acceso a alimentos y agua potable. Manten a las ratas en jaulas de2 530 cm con madera-afeitado ropa de cama. Casa de dos ratas en cada jaula. Mantener jaulas todo abierto para el ambiente (no micro-aislamiento o jaulas ventiladas)</li>
	<li>Asegúrese de que el personal que participa en el protocolo experimental manejar regularmente las ratas.</li>
	<li>Mantener la temperatura entre 21 ° C y 23 ° C. Dar índices de una dieta normal de sal (0.3% NaCl) durante todo el estudio.</li>
</ol>2. procedimiento de recogida de sangre
Nota: El sistema de colección de sangre vacío consiste en una aguja de doble punta [22 G (0,7 x 25 mm)], un soporte de plástico y una serie de tubos de vacío (2 mL) con tapones de goma (figura 1).
<ol><li>Colocar la rata en un soporte plástico de retención y lavar la cola con agua tibia (20-30 ° C) para eliminar la suciedad visible o las heces. Mientras un asistente sostiene la cola en una posición extendida, limpie la cola con etanol al 70% y limpiar con una gasa para aclarar la vena.</li>
	<li>Inserte la punta de la aguja de 22 G mariposa en una de las venas laterales de la cola (alrededor de 5 mm) en una posición aproximadamente 2-3 cm de la punta de la cola en ángulo de aproximadamente 20 ° (figura 2). Recoja la sangre en el tubo de la colección vacío insertando el extremo de la goma de la aguja de la mariposa en el tubo de la colección de la sangre del vacío (figura 3). Nota: El volumen de sangre recogida máxima es 1,2 mL7.</li>
	<li>Después de la recolección de sangre, retire la aguja y suavemente aplique presión en el sitio de punción con una gasa por 15-30 s detener el flujo de sangre. Luego, suelte la rata del soporte de retención plástico y retomar su jaula de la rata.</li>
	<li>Utilizar tubos que contienen EDTA como anticoagulante para recolectar plasma de sangre. Invierta suavemente el tubo varias veces para mezclar el anticoagulante en la sangre y coloque las muestras en hielo vertical.</li>
	<li>Centrifugar los tubos de colección de muestras de sangre en una centrífuga refrigerada a 2.000 x g por 10 min separar el suero o plasma.</li>
	<li>Extraer el plasma/suero, teniendo cuidado de no para molestar a las capas de la célula de sangre roja y blanca. Para recoger el suero de la sangre, se pueden utilizar tubos sin anticoagulante. Ambos tipos de muestra pueden utilizar inmediatamente o almacenadas a-80 ° C por hasta un año. Nota: Colección de sangre exitosa se definió como obtener 1,2 mL de sangre cada vez. Tiempo máximo de punción fue establecido en tres ensayos, si el volumen de sangre total fue inferior a 1,2 mL después de la tercera punción, se definió como una colección de sangre. La duración del muestreo se inicia desde la punción de la vena de la cola a la remoción de la aguja de la mariposa después de la recolección de sangre.</li>
	<li>
Recoger la sangre dos veces en dos semanas7.
	<ol>
<li>Para comprobar y verificar la viabilidad de este método, tren de dos estudiantes de medicina (principiantes) por 2 h antes de realizar este protocolo de extracción de sangre. Utilizar veinte ratas y extraer la sangre de 10 ratas por compañeros experimentados 2 (grupo experimental) y de 10 ratas por los estudiantes de medicina 2 (grupo para principiantes).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. estadístico análisis
<ol><li>Expresar los datos como un valor medio ± desviación estándar y análisis con SPSS estadística 17. Un valor α de 0.05 fue elegido, por lo tanto p < 0.05 se consideró estadísticamente significativo.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat.">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+of+the+rat+tail:+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods.">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li><li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat.">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee. , (2010).</li><li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+ARRIVE-ing+at+a+solution.">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li><li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li><li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+device+for+collecting+cord+blood.">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li><li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry,+haematology+and+practical+usage+assessment.">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li><li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes.">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li><li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter.">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar

El actual informe describe un método de colección de sangre fácil de aprender en ratas. Nuestros resultados mostraron que este método es viable para recoger repetidamente un volumen grande de sangre de las ratas. Además, este método podría ser dominado fácilmente con una curva de aprendizaje a corto plazo. Este procedimiento se puede realizar en las ratas no anestesiados y sólo produce mínimo estrés a los animales.
Sangre se puede recoger de ratas en varios lugares. La vena de la cola es una ubicación superior para toma de muestras de sangre4. Sin embargo, no siempre es fácil obtener suficiente volumen de sangre de la vena de la cola de flujo de sangre delgada y baja de las ratas. El sistema de colección de sangre vacío generalmente se utiliza para recoger muestras de sangre de pacientes en la práctica clínica diaria. Este sistema de colección de sangre vacío se ha utilizado en pacientes y animales de investigación por un tiempo8,9,10. Este sistema consiste en un tubo de colección de sangre vacío con aguja de pared y mariposa de tubo interior recubierto de silicona. Se basa en el principio de presión negativa del vacío y permite la elaboración continua de sangre sin el riesgo de la recogida de sangre, que también reduce la posibilidad de contaminación y hemólisis11. El volumen de muestra de sangre en el catéter es de unos 0,3 mL. Después de retirar la aguja de la vena de la cola, fluirá a la sangre en el catéter en el tubo colector de vacío por el vacío. Este método también es aplicable para la recogida de sangre de ratas que pesen menos de 100 g con el uso de una aguja de punción más pequeños.
Este método de colección de sangre tiene varias ventajas. Este procedimiento sólo provoca lesiones mínimas a las ratas y de muestras de sangre se pueden realizar sin el uso de anestésicos, así se puede evitar la influencia de la respuesta de estrés y anestésicos en la muestra de sangre. Nuestras observaciones demostraron que las ratas estaban en silenciosa en el soporte plástico de restricción durante el procedimiento y no había muertes durante estos experimentos. En segundo lugar, repetida de muestras de sangre cada uno o dos días es posible, que permite el muestreo frecuente de la sangre con un volumen adecuado para diversos fines de investigación. Por último, este método es fácil de aprender y domina fácilmente por los principiantes después de un período de aprendizaje corto (2 h), según lo indicado por las tasas de éxito similares y los tiempos de la punción entre los grupos experimentales y principiante en este informe. En un informe anterior, Lee et al demostraron un método similar de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata4. Nuestro método es más simple que el reportado por Lee et al. 4 en que directamente insertamos de la aguja de punción en la vena de la cola y el otro extremo del tubo está conectado directamente con el tubo de vacío para la recolección de la sangre, sin el uso de una jeringa extra y aspiración manual de la sangre y sin la necesidad de ' leche Ing' la vena para facilitar el flujo de sangre. Recolección de sangre con este sistema cerrado reduce el riesgo de contaminación de la sangre. Uso del soporte de retención plástico también reduce el estrés en la rata y facilita la fijación de la cola.
Los siguientes dos pasos son fundamentales para la aplicación exitosa de este método. 1) extender la cola y evitar el movimiento de la cola; 2) suavemente punción en la vena en un ángulo de 20 º para evitar la punción en la vena y mantener la aguja de punción en la vena.
En conclusión, el método de colección de sangre vacío adoptado en ratas es segura, factible y fácil de practicar. Este método permite frecuentes muestras de sangre con un volumen adecuado de sangre Obtenido de ratas no anestesiados.

La muestra de sangre de las ratas es necesaria para una gran variedad de estudios experimentales. Técnicas para recolección de sangre de la rata, como punción del corazón, del plexo orbital retro, vena yugular, vena safena, vasos de cola, la arteria carótida, aorta abdominal y vena cava. Mayoría de las técnicas (excepto la vena safena y punción de vasos sanguíneos de la cola) requiere anestesia1,2. Rutinariamente se pinchan las venas de la cola de rata para tomar muestras de sangre y de la inyección vascular. Después de tratar la cola con agua caliente, los vasos sanguíneos son dilatados y adecuado para la manipulación, incluso cuando las ratas son anestesiados3.
A pesar del desarrollo de nuevas y mejores técnicas para obtener muestras de sangre en el laboratorio pequeños animales2, no siempre es fácil obtener suficiente sangre al muestreo de pequeños animales. La vena de la cola de las ratas es una excelente ubicación para el muestreo de sangre4. Sin embargo, la vena de la cola es delgada, así es a veces difícil de pinchar y tomaría un largo tiempo para conseguir suficiente sangre debido a la reducción del flujo sanguíneo. Colección de la sangre a través de un sistema de tubo de aspiración es un método típico en la práctica clínica diaria. Este sistema cerrado para recoger la sangre reduce el riesgo de exposición directa a sangre y ha hecho más fácil tomar muestras múltiples de una sola venopunción5. El actual informe describe un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante el sistema de tubo de aspiración. Este método es fácil de dominar y puede utilizarse para obtener un gran volumen de sangre repetidamente en las ratas.

<table><tbody><tr><td>a double-pointed needle</td><td>Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td><td>22G&amp;nbsp;</td><td>(0.7&amp;times;25mm)</td></tr><tr><td>vacuum tubes</td><td>Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China</td><td>2 ml</td><td></td></tr><tr><td>rat restraining holder&amp;nbsp;</td><td>Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China</td><td>250g rat hoder model</td><td></td></tr><tr><td>normal salt diet for rats</td><td></td><td></td><td>Rats received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study</td></tr><tr><td>SPSS software for statistical analysis</td><td>SPSS Inc,&amp;nbsp; Chicago; USA&amp;nbsp;</td><td>Version 17.0.&amp;nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

repeated blood collection from tail vein of non-anesthetized rats with a vacuum blood collection system

Sangre se puede recoger de ratas en un número de localizaciones de muestreo. Por ejemplo, la vena de la cola es una ubicación superior para tomar muestras de sangre. Sin embargo, la vena de la cola es delgada por lo que a veces es difícil de pinchar. Además, la vena de la cola tiene reducción del flujo sanguíneo y requiere un tiempo de muestreo largo para obtener suficiente sangre. El actual informe describe un método de muestreo de sangre simple, el método de recogida de la sangre del vacío, que generalmente se utiliza para obtener muestras de sangre de los pacientes, que aquí se utiliza para las ratas no anestesiados. La punta de la aguja de 22 G mariposa fue insertada en una de las venas laterales de la cola aproximadamente 2-3 cm de la punta de la cola en un ángulo de aproximadamente 20° y la sangre fue recogido en el tubo de la colección vacío insertando el extremo de la goma de la aguja de la mariposa en el va tubo de colección de sangre cuum. Los resultados experimentales muestran que la tasa de éxito fue 95% en el grupo experimental y el 90% en el grupo de principiantes. La tasa de éxito y tiempos de punción fueron similares entre los dos grupos. La duración del muestreo fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con el grupo de principiantes. En conclusión, este método de colección de sangre vacío para muestreo secuencial de la sangre de la vena de la cola de no - anestesiadas ratas es factible y fácil de aprender, que podría servir como una alternativa fiable al otro convencionalmente utiliza técnicas de muestreo de sangre para ratas.

Duración del muestreo, masa corporal y volumen de la colección de la sangre de los dos grupos Se extrajo sangre de 10 ratas (5 varones) dos veces dentro de dos semanas en cada grupo. La masa corporal promedio en ambos grupos fue similar (272,00 g ±9.66 y g ±8.87 273.70). Duración de muestreo fue significativamente menor en el grupo experimental en comparación con el grupo de principiante (2,77 ±0.53 min vs 3.28 ±0.83 min, p < 0.05) (tabla 1).
Éxito la tarifa y de la puntura veces de dos grupos La tasa de éxito fue 95% (19/20) en el grupo experimental y el 90% (18/20) en el grupo de principiante (p > 0.05). Tiempos de punción no fueron significativamente diferentes entre los dos grupos (1.50 min ±0.61 vs 1.85 ±0.75 min, p > 0.05) (tabla 2). Estos resultados indican que este método es fácil de aprender, y la técnica podría ser dominada después de un entrenamiento de 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Figura 1 : tubo de colección de sangre vacío 2 mL (izquierda), aguja de la mariposa de 22 G (centro), el soporte de retención plástico (derecha). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Figura 2 : Punta de la aguja fue insertada en la vena lateral de la cola (alrededor de 5 mm) en la posición de la punta de la cola en ángulo de aproximadamente 20 ° aproximadamente 2-3 cm. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Figura 3 : Venopunción exitosa. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Grupo experimental</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Grupo principiante</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Género</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volumen de recogida de sangre (mL)</td>
			<td>duración del muestreo (min)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Género</td>
			<td>Peso (g)</td>
			<td>Volumen de recogida de sangre (mL)</td>
			<td>duración del muestreo (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>hombre</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>hombre</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>274</td>
			<td>0,9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>285</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3.93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>mujer</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>mujer</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Promedio</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2.77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-1: número de serie de ratas en el grupo experimental de la primera colección de la sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">En-2: número de serie de ratas en el grupo experimental para la segunda colecta de sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: número de serie de ratas en el grupo de principiantes para la primera colección de la sangre.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: número de serie de ratas en el grupo de principiantes para la segunda colecta de sangre.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 1: Resultados de sangre recogidos en el grupo experimental y el grupo de principiantes.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Tiempos de recogida de sangre</td>
			<td>Tiempos promedio de punción</td>
			<td>Una punción de tiempo</td>
			<td>Pinchar dos veces</td>
			<td>Tres veces de la puntura</td>
			<td>No se pudo</td>
			<td>Tasa de éxito</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo experimental</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.61 1.50</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Grupo principiante</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.75 1.85</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Una punción de tiempo: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la primera punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Dos veces la punción: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la segunda punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Tres veces la punción: número de ratas con la colección de sangre exitosa después de la tercera punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">Error: número de ratas con no recolección de la sangre después de la tercera punción</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabla 2: Comparación de los tiempos de punción y las tasas de éxito del grupo experimental y el grupo de principiantes.

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Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Aquí, describimos un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante un sistema de tubo de aspiración. Este método reduce el riesgo de exposición directa a sangre y simplifica la toma de muestras múltiples de una sola venopunción.

Repetidos de muestras de sangre de vena de la cola de las ratas no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

35.6K vistas.  Jianghan University. Aquí, describimos un método de tomar muestras de sangre de la vena de cola simple en ratas no anestesiados mediante un sistema de tubo de aspiración. Este método reduce el riesgo de exposición directa a sangre y simplifica la toma de muestras múltiples de una sola venopunción.

Video: Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

Colección Protocolo de páncreas humano

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Investigación

Medicina

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. The tail veins of mice are small, and it is sometimes difficult to obtain the required blood volume by conventional puncture methods. This study investigates the superiority of repeated blood sample collection from tail veins of mice through use of a vacuum blood collection system and eyeglass magnifier (experimental group) compared to conventional blood sampling methods (conventional group), performed by beginners and experts, respectively. With the help of an eyeglass magnifier, a butterfly needle tip is inserted into the tail vein of each mouse in the experimental group. When the vein is penetrated successfully, a blood sample is collected in the vacuum collection tube by insertion of the rubber end of a butterfly needle into the vacuum blood collection tube. The plunger is then used to collect blood without the help of the eyeglass magnifier in the conventional group. Success rates of blood sample collection by the beginners and experts were shown to be 70% vs. 100% (p &#60; 0.01) in the experimental group and 35% vs. 85% (p &#60; 0.01) in the conventional group. For both beginners and experts, puncture times required for obtaining required blood sample were significantly lower in the experimental group compared to the conventional group (2.40 &#177; 0.75 vs. 2.90 &#177; 0.31, p &#60; 0.05; 1.15 &#177; 0.37 vs. 1.55 &#177; 0.76, p &#60; 0.05). In conclusion, the presented blood sampling technique is feasible and easy to practice and enables frequent sampling of adequate blood volumes from non-anesthetized mice.&#160;

This study reports blood sampling from tail vein in mice using a vacuum extraction tube system with eyeglass magnifier. Our method is easy to practice and could be used for repeat blood sampling in mice.

Colección de sangre modificada de las venas de la cola de los ratones no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío y gafas lupa

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

Comportamiento

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Punción de la vena subclavia como método alternativo de recogida de muestras de sangre en las ratas

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

Sampling Blood from the Lateral Tail Vein of the Rat

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, proteins, and glucose, yet the composition of the blood is dynamically regulated and easily perturbed. One factor that can change the blood composition is the stress response triggered by the sampling procedure, which can contribute to variability in the measures of interest. Here we describe a procedure for blood sampling from the lateral tail vein in the rat. This procedure offers significant advantages over other more commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, without anesthesia or analgesia. Additionally, it can be used to obtain large volume samples (upwards of 1 ml in some rats), and it may be used repeatedly across experimental days. By minimizing the stress response and pain resulting from blood sampling, measures can more accurately reflect the true basal state of the animal, with minimal influence from the sampling procedure itself.

Blood samples are useful for assessing biomarkers of physiological states or disease in vivo. Here we describe the methodology to sample blood from the lateral tail vein in the rat. This method provides rapid samples with minimal pain and invasiveness.

Toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata

Blood samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure targets of interest, including hormones, immune factors, growth factors, ...

Biología

Extracción de líquido cefalorraquídeo y sangre de ratas con registro de EEG concurrente

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Autor destacado: Obtención de muestras de sangre y LCR de alta calidad para el descubrimiento de biomarcadores de epilepsia 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Neurociencias

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Muestreo repetitivo de sangre de la vena subclavia de rata consciente

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

Estudio comparativo de las técnicas de extracción de sangre en ratas

Modified Tail Vein and Penile Vein Puncture for Blood Sampling in the Rat Model

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood collection in rats: the lateral tail vein puncture and the dorsal penile vein puncture, which offer significant advantages over other previously described techniques. This study shows that these two procedures allow for fast sampling (under 10 min) and yield sufficient blood volumes for most assays (202 &#956;L &#177; 67.7 &#956;L). The dorsal penile vein puncture must be done under anesthesia, whereas the lateral tail vein puncture can be done on a conscious, restrained animal.
Alternating these two techniques, therefore, enables blood draw in any situation. While it is always recommended for an operator to be assisted during a procedure to ensure animal welfare, these techniques require only a single operator, unlike most blood sampling methods that require two. Moreover, whereas these previously described methods (e.g., jugular stick, subclavian vein blood draw) require extensive prior training to avoid harm to or death of the animal, tail vein and dorsal penile vein puncture are rarely fatal. For all these reasons, and according to the context (e.g., for studies including male rats, during the perioperative or immediate postoperative period, for animals with thin tail veins), both techniques can be used alternately to enable repeated blood draws.

Autor destacado: Métodos de recolección de sangre dependientes del contexto en ratas 

Here, we present a protocol to offer rapid, easy, and reliable blood collection alternatives for the rat model. We describe three different blood sampling methods according to the context: tail vein puncture under anesthesia or on a conscious animal, and dorsal penile vein puncture under anesthesia.

Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata

Blood samples are required in most experimental animal designs to assess various hematological parameters. This paper presents two procedures for blood ...

Repetidos de muestras de sangre de vena de la cola de las ratas no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío

Resumen

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Capítulos en este video

Colección Protocolo de páncreas humano

Colección de sangre modificada de las venas de la cola de los ratones no anestesiados con un sistema de colección de sangre vacío y gafas lupa

Punción de la vena subclavia como método alternativo de recogida de muestras de sangre en las ratas

Toma de muestras de sangre de la vena lateral de la cola de la rata

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Muestreo repetitivo de sangre de la vena subclavia de rata consciente

Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata

Punción modificada de la vena de la cola y la vena del pene para el muestreo de sangre en el modelo de rata