Para empezar, centrifuga la sangre humana a 120 g durante 20 minutos a temperatura ambiente para eliminar las células sanguíneas. A continuación, transfiera la mitad superior del sobrenadante a un nuevo tubo. A continuación, centrifuga el plasma rico en plaquetas para eliminar las plaquetas y transfiere la mitad superior del sobrenadante a un nuevo tubo.
A continuación, eliminamos los restos celulares centrifugando la plaqueta a nuestro plasma a 13.000 G durante dos minutos. Transfiera la mitad superior del sobrenadante a un tubo nuevo. Encienda el analizador de coágulos para detectar vesículas extracelulares o tiempo de coagulación activado por EV y precaliente el instrumento a 37 grados Celsius.
Instale la sonda desechable y el vaso de prueba. Luego inicie el procedimiento de control de calidad de la máquina. Después de la ejecución del control de calidad, introduzca la información de la muestra en el sistema.
Luego agregue 200 microlitros de plasma rico en EV al vaso de prueba, seguido de 20 milimolares y 170 microlitros de cloruro de calcio. Haga clic en el botón de inicio, cierre la tapa y permita que la sonda detecte el cambio en la resistencia de la muestra. Las muestras de EV no calificadas exhiben un grupo distinto con un tamaño de partícula ligeramente mayor cerca de la puerta de EV.In contraste, las muestras calificadas ricas en EV mostraron la mayoría de las señales dentro de la puerta de EV como un solo grupo.
Un aumento en la concentración de EV acortó el tiempo de coagulación activado por EV, mientras que una disminución en la concentración de EV prolongó el tiempo de coagulación activado por EV. Las muestras de plasma ricas en EV de pacientes con preeclampsia, fracturas de cadera y cáncer de pulmón tuvieron un tiempo de coagulación activado por EV significativamente más corto en comparación con las voluntarias sanas.
