Extracción de ADN de muestras de esputo humano para la detección rápida de patógenos bacterianos mediante un chip microfluídico

Para empezar, limpie la cavidad bucal y los dientes con agua limpia. Pida a los pacientes con dentaduras postizas que se las quiten. Indique al paciente que tosa con fuerza para expulsar el esputo respiratorio profundo en un recipiente de esputo.

Para extraer el ADN, agregue un volumen apropiado de hidróxido de sodio al 10% a la muestra en función de su viscosidad. Agite la suspensión durante 15 segundos, luego incube a 37 grados centígrados durante 30 minutos para licuar la muestra. A continuación, pipetee un mililitro de la muestra licuada en un tubo de centrífuga de 1,5 mililitros.

Centrifugar la muestra a 15.777 g durante cinco minutos a una temperatura de dos a seis grados centígrados. A continuación, pipetea el sobrenadante para desecharlo. Ahora, agregue un mililitro de la solución de lavado al tubo y vértice para levantar el precipitado del fondo del tubo.

Después de centrifusionar y desechar el sobrenadante como antes, pipetear 100 microlitros de solución de extracción de ácido nucleico en la paleta. Con una pipeta, aspire y mezcle bien el precipitado con la solución. Transfiera el líquido y el precipitado juntos a un tubo de extracción de ácido nucleico.

Coloque el tubo en un mezclador de vórtice a velocidad media durante cinco minutos. Luego, transfiera el tubo a un baño de metal a una temperatura constante de 100 grados centígrados durante cinco minutos. Finalmente, centrifugue las muestras a 15.777 g durante cinco minutos a dos a seis grados centígrados antes de seguir experimentando.