Inicio de linajes independientes de cultivos de Sulfolobus acidocaldarius para la experimentación de la evolución de la temperatura

Para empezar, utilice un espectrofotómetro para medir la densidad óptica de un cultivo de Sulfolobus acidocaldarius. A continuación, cree diluciones en serie del cultivo inicial del 10 al 1 del 10 al 6. Pipetear 100 microlitros de cada una de las diluciones de 10 a 5 y de 10 a 6, luego transfiéralos a los pocillos de una placa de seis pocillos que contiene BBM plus sólido.

Coloque la placa en una caja con un paño húmedo en una incubadora estática a 75 grados centígrados durante cinco a siete días hasta que emerjan colonias individuales. Para establecer el número deseado de linajes en evolución a partir de colonias individuales, con un circuito de inoculación, elija una colonia al azar. Resuspenda la colonia en 1,5 mililitros de BBM precalentado más contenido en un tubo perforado de dos mililitros.

Etiquete el tubo de manera adecuada. Después de repetir la resuspensión durante varias colonias, llene un tubo con 1,5 mililitros del medio como control negativo. Selle la parte superior de los tubos con una membrana transpirable, luego incube en una termomezcladora hasta que los cultivos se vuelvan turbios.

Centrifugar los cultivos clonales a 5.000 g durante un minuto a temperatura ambiente. Después de desechar el sobrenadante, pipetee 200 microlitros de BBM plus en el tubo y vuelva a suspender el pellet. Agregue 200 microlitros de glicerol al 50% a cada tubo para crear tallos de glicerol.

Luego, almacene los tallos a 80 grados centígrados hasta que se siga experimentando.