Para empezar, obtenga embriones de ratones hembra recién apareados. Prepare 12 microgotas de medio optimizado de potasio simple en el fondo de una placa de Petri de 35 milímetros. Cubra las microgotas con tres a cinco mililitros de aceite mineral y coloque las placas de Petri en una incubadora a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono para equilibrarlas.
Con una pipeta de transferencia, transfiera los embriones de ratón del medio M2 al medio KSOM. Coloque los embriones lavados en las microgotas KSOM preparadas e incube a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono durante cuatro días. Seleccione los blastocistos ventajosos de acuerdo con su tamaño, masa celular interna, número de células trofoblásticas y grado de expansión.
Agregue un mililitro de gelatina al 2% a una placa de cultivo de 12 pocillos e incube a 37 grados centígrados durante 30 minutos. A continuación, aspira el exceso de gelatina y deja que el fondo del plato se seque por completo. Siembra células de adenocarcinoma de endometrio humano o células de Ishikawa en la placa de 12 pocillos recubierta de gelatina e incuba la placa durante 24 horas.
Coloque suavemente de cinco a 15 blastocistos frescos en cada pocillo de la placa de 12 pocillos que contiene las células. Después de 48 horas, observe los embriones bajo un microscopio para evaluar su estado de unión después de mover la placa tres veces. Los embriones sueltos flotarán o rodarán sobre la superficie de las células.
Por último, calcule la tasa de implantación embrionaria en presencia de varias concentraciones de estrógenos. Los resultados demostraron que las concentraciones casi fisiológicas de 17-beta-estradiol aumentaron las tasas de implantación embrionaria en comparación con el control sin 17-beta-estradiol. Sin embargo, las concentraciones ultra altas de 17 beta-estradiol alrededor de 100 nanomolares redujeron significativamente las tasas de implantación embrionaria.
