Para comenzar, obtenga el caldo de lisogenia o medio LB y agregue los antibióticos al medio. Alícuota cinco mililitros del medio en tubos de ensayo estériles con tapones. Inocular el medio con cepas de Escherichia coli que expresen plásmidos tomados de existencias congeladas e incubar el cultivo en un agitador durante la noche.
A continuación, prepare una solución de tiofeno sulfonamida de 10 milimolares en DMSO y vórtice para mezclar bien. Diluir los cultivos de 1 a 100 veces en 10 mililitros de medios tomados en tubos cónicos de 15 mililitros. Vórtice brevemente para mezclar.
Agregue cultivos a los pocillos apropiados de una placa de 96 pocillos. Después de mezclar, prepare una serie de diluciones de las filas A a E, transfiriendo 50 microlitros de la solución cada vez. Cubra la placa con cinta microporosa e incubela.
Después de quitar la cinta, usando un lector de placas, lea la densidad óptica a 600 nanómetros GFP y mCherry. Por último, registre y represente los datos como fluorescencia normalizada por célula. Los datos de los compuestos de 3-tiofeno sulfonamida sugirieron que los compuestos 1A y 3B eran inhibidores de LuxR/HapR en diferentes grados, mientras que 2B no tenía ninguna actividad.
