Para comenzar, transfiera de 500 a 1.000 gusanos Caenorhabditis elegans sincronizados en etapa L1 en una placa de agar NGM e incube a 20 grados centígrados hasta el día de la prueba. Diseñar el cronograma de ensayos para dos grupos experimentales. Usando el tampón M9, recoja los gusanos L4 y los gusanos de la edad adulta en el día respectivo.
Transfiera las lombrices recolectadas a microtubos de 1,5 mililitros y espere a que las lombrices se sedimenten por gravedad. Lave las lombrices tres veces con un mililitro de tampón M9, dejando aproximadamente 500 microlitros en el tubo después del último lavado. Con una pipeta automática, agregue 10 microlitros de la suspensión de gusano a un portaobjetos de microscopio y calcule el volumen requerido para obtener 100 gusanos por microlitro.
En un nuevo microtubo, agregue el volumen requerido para 100 lombrices y 100 microlitros de solución de sal disódica de erioglaucina al 25%. A continuación, añada 200 microlitros de cultivo de E. coli OP50 y aumente el volumen a 500 microlitros utilizando un tampón M9. Incubar el tubo durante tres horas con agitación en una batidora, protegiéndolo de la luz.
Tras la incubación, deje que las lombrices se sedimenten por gravedad antes de lavarlas con un mililitro de tampón M9 hasta que la solución de tinción se elimine por completo. Después del último lavado, vuelva a suspender las lombrices en 250 microlitros de tampón M9 y transfiera aproximadamente 50 microlitros al portaobjetos. Coloque el cubreobjetos e incube el portaobjetos a 20 grados centígrados durante 10 minutos para paralizar los gusanos.
Usando un microscopio estereoscópico, en el modo de campo claro, cuente el número total de gusanos y el total de gusanos teñidos. El ensayo de permeabilidad intestinal mostró una fuerte barrera intestinal en gusanos jóvenes, evitando la fuga de colorante. Por el contrario, los gusanos envejecidos exhibieron extravasación de tinte en todo su cuerpo, lo que indica daño en la membrana intestinal.
