Verificación por PCR de parásitos transgénicos con la modificación deseada del locus cdpk1 para dilucidar los mecanismos de resistencia a la quinasa Plasmodium falciparum

Para empezar, trate los parásitos Plasmodium falciparum transformados con los medicamentos deseados. Después de dos o tres días de crecimiento del parásito, centrifugar 500 microlitros de cultivo en un tubo de microcentrífuga a 2.400 g durante cinco minutos. Para lisar los glóbulos rojos, incubar un mililitro de los parásitos resuspendidos con 10 microlitros de saponina al 10% a cuatro grados centígrados durante cinco minutos.

Después de centrifugar las células, deseche el sobrenadante para obtener la peleta del parásito. Lave el pellet de parásitos con un mililitro de PBS y vuelva a suspender el pellet en 50 microlitros de agua libre de ADNasa y ARNasa. Calentar el pellet resuspendido a 95 grados centígrados durante cinco minutos y centrifugar a 16, 200 g durante 10 minutos a cuatro grados centígrados.

Transfiera el sobrenadante que contiene el ADN del parásito a un tubo nuevo.