Para comenzar el vórtice, la muestra de virus adenoasociado o AAV y centrifuga para asegurarse de que todo el líquido permanezca en el fondo del tubo. Agregue 45 microlitros de solución que contenga DNasa I a un tubo de tira de ocho tubos de PCR de 0,2 mililitros. Transfiera cinco microlitros de la muestra de AAV al tubo que contiene la solución de DNasa.
Después del vórtice, centrifugar la muestra brevemente para asegurarse de que todo el líquido permanezca en el fondo. Con un termociclador, incube las muestras durante una hora a 37 grados centígrados y luego enfríelas a cuatro grados centígrados. A continuación, prepare la dilución adecuada de la muestra tratada con DNasa en tampón de dilución AAV en una tira de ocho tubos PCR fresca de 0,2 mililitros.
Después de la dilución en serie, agite las muestras y centrifugue para asegurarse de que todo el líquido permanezca en el fondo. Combine los cebadores directos e inversos, la sonda ddPCR, Supermix y el agua sin DNasa en los volúmenes requeridos. Agite la mezcla maestra y centrifugue brevemente el tubo.
A continuación, transfiera 19,8 microlitros de la mezcla maestra a cada tubo en una nueva tira de ocho tubos PCR de 0,2 mililitros.
