Quantificazione dei genomi virali adeno-associati in campioni di vettori purificati mediante reazione a catena della polimerasi a goccioline digitali

La DD PCR è una tecnica ampiamente utilizzata per determinare il titolo del genoma AAV, ma attualmente manca un protocollo di consenso. Il nostro protocollo è una guida passo-passo convalidata su come preparare i campioni ed eseguire la DD PCR per una titolazione accurata del genoma. Rispetto alla QPCR, LA DD PCR offre diversi vantaggi, tra cui una maggiore precisione, una maggiore robustezza e una quantificazione più assoluta e diretta delle sequenze target senza la necessità di curve standard.

Inoltre, con un set di sonde primer ben progettato, la DD PCR consente una tragedia specifica nel rilevamento, al contrario di altre tecniche che rilevano tutto il DNA. Lo sviluppo di un protocollo di consenso standardizzato per la quantificazione del genoma vettoriale migliorerà l'affidabilità e l'uniformità nel controllo di qualità dell'AAV ricombinante in diversi laboratori. Ciò faciliterà sia la ricerca che le applicazioni cliniche dei vettori AAV ricombinanti per la comunità più ampia.