Agradecemos al Sr. Craig D. Slaven (Departamento de Inglés de la Universidad de Kentucky) por su asistencia editorial. Con el apoyo de la Universidad de Kentucky, Departamento de Biología de la Oficina de Estudios de Grado y la Facultad de Artes y Ciencias.

1) Introducción Las neuronas motoras comunicarse con una fibra muscular en las sinapsis que se conocen colectivamente como una unión neuromuscular (UNM). NMJs se puede acceder fácilmente en la mayoría de las preparaciones del músculo del cangrejo de río. Muchos de los cangrejos de río NMJs demostrar la no adición potencial postsináptico excitador (PPSE), similar a las señales eléctricas generadas clasificados en las dendritas postsinápticos en el SNC de los mamíferos o las respuestas debajo del umbral señalado en NMJs vertebrados (Wiersma y Van Harreveld de 1938, Katz &amp; Kuffler, 1946) . El NMJs cangrejos pueden servir como modelos fundamentales sináptica para proporcionar información general en la transmisión sináptica y la diferenciación sináptica. En general, las unidades de motor regular los aspectos de la conducta animal a través del tipo de comunicación sináptica en NMJs y propiedades de los músculos. Desde la primera observación de &quot;rápido&quot; y contracciones &quot;lento&quot; en el músculo del cangrejo y la langosta más músculo (Lucas, 1907, 1917), similar diferenciación muscular contráctil ha sido descrita en otros tipos de cangrejos de río musculares como los flexores de la abdominal (Kennedy y Takeda, 1965 , b) y extensores de la extremidad (Van Harreveld y Wiersma, 1936). &quot;Fast&quot; contracciones de iniciar una respuesta rápida. Por ejemplo, la tapa la cola del cangrejo de río es un comportamiento rápido. &quot;Slow&quot; contracciones mantener los movimientos lentos y ayudar a mantener la postura (Bradacs et al., 1997). Correspondiente al &quot;rápido&quot; y contracciones &quot;lento&quot; músculo &quot;, fásica / alto rendimiento&quot; y &quot;salida tónico / baja&quot; son ampliamente utilizados para describir las neuronas motoras. La diferencia en la tasa y el tiempo de la contracción muscular se debe en parte a diferencias en la estructura sináptica presináptica y la fuerza sináptica (King et al., 1996). Proteína miofibrilar isoforma expresión también es importante en las diferencias de contracción, pero en los preparativos como la de los músculos extensores de la pierna, en la que está inervado una fibra dada por los dos tipos de neuronas motoras, la atención se centra en las diferencias de las terminales sinápticas, ya que los terminales de compartir la célula diana mismo (Mykles et al., 2002). Un estudio anterior examinó los dos axones excitatorios motor del extensor pierna y describe los fenotipos fásica y tónica (Bradacs et al., 1997). En este informe, muestran cómo realizar la disección y la obtención de grabaciones para que los demás aún puede investigar las propiedades de la diferenciación sináptica de las terminales nerviosas. Vistos con microscopio electrónico de transmisión, varias series de secciones obtenidas de la tónica y fásica terminales en el músculo extensor cangrejos pierna reveló que los terminales tónico contienen más vesículas PVP de terminales fásica, las mitocondrias son más frecuentes en las neuronas tónica, y las sinapsis en los terminales fásica más complejas que las de las sinapsis de baja producción, ya que contienen varias zonas activas con un espacio variado (Miller et al, 2002; Johnstone et al, 2008;. King et al, 1996;.. Bradacs et al, 1997). Los terminales de salida de baja tónica también son más susceptibles a la transmisión sináptica mejorar con la serotonina neuromodulador (5-HT) que son los terminales fásica (Cooper et al., 2003). El hecho de que la tónica y fásica MNJ están presentes en la misma fibra muscular hace que sea más fácil de evaluar las diferencias presináptica de una fibra muscular determinado y para abordar las cuestiones de la fatiga muscular, depresión sináptica y la diafonía sináptica. Varias preguntas quedan por abordar en esta preparación, como por ejemplo si hay diferencias en la densidad de los receptores postsinápticos y subtipos de receptores de glutamato postsinápticos en los objetivos de la tónica y fásica terminales, pero una mejor comprensión de las diferencias fundamentales en la anatomía y la fisiología de estos dos unidades de motor ayuda en la construcción de una base de conocimientos más profundos. La esperanza es que los principios fundamentales aprendidos en esta preparación sináptica será aplicable a otras sinapsis en diferentes preparaciones y mejorar las investigaciones futuras en este modelo sináptica de los cangrejos de río. 2) Los métodos <ol><li> Todos los experimentos se llevan a cabo en las piernas el primer o segundo caminar del cangrejo de río de tamaño mediano (Procambarus clarkii). Los animales son alojados individualmente en envases de plástico con agua oxigenada. La temperatura de la habitación de los animales está en el rango de 13 ° C-16 ° C. Los animales son alimentados con comida de pescado seco y el agua cambia una vez por semana. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: Esquema de una pierna cangrejos de río a pie y los seis segmentos distales. </li><li> La porción distal de la pierna caminando en un cangrejo de río es anatómicamente dividido en seis segmentos (Figura 1). El extensor de la pierna se encuentra en el meropodite, y el conjunto de nervios que se está aislada cerca de la articulación meropodite ischiopodite. El axón tónica o fásica puede be selectiva estimulado, según sea necesario para fines fisiológicos después de estar expuestos. </li><li> Cooper y Cooper (2009) describe algunos aspectos de la disección inicial, incluyendo los métodos para exponer la Excitor de la neurona motora primer partido dentro de la región meropodite, pero su descripción no proporciona los cuidados necesarios para proteger el músculo extensor de los daños, como lo fue no es necesario para hacer frente a la preparación muscular abridor. Con el fin de proteger a los extensores de la pierna caminando primera o la segunda se elimina de los cangrejos de río, que mide 10.6 cm de longitud corporal (Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA), mediante la inducción de los animales para automatizar la extremidad con pellizco con fuerza distal al plano de fractura en el segmento de ischiopodite. La pierna se coloca en el plato con la disección lateral (lado exterior) de cara al espectador. El partido de ida se dio la vuelta hasta que el espectador puede estar seguro de la parte externa (lateral) hacia arriba en la placa de la disección, por lo general con la parte arqueada hacia arriba (Figura 2). Colocar la pierna en un pedazo de papel de seda hace que sea más fácil girar la preparación al hacer estos cortes. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: La parte lateral de la meropodite, por lo general el lado que se arquea, se dirige hacia arriba en la placa de disección .. </li><li> Con un interruptor de hoja de bisturí y tenedor, una hoja de afeitar afilada se utiliza para grabar la cutícula hasta que estén atravesando en el modelo que se muestra en la Figura 3 para el segmento de meropodite. Hay que tener cuidado de no cortar demasiado distal en el dorso ventral para cortar por la articulación meropodite-carpopodite. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: El segmento de meropodite con las líneas de un arquetipo de texto para el grabado de la ventana de la cutícula. La preparación se coloca en solución salina. El plato debe tener una disección Sylgard (Dow Corning) revestimiento en la parte inferior (1 cm de grosor). El Sylgard se utiliza de modo que los pasadores de insectos pueden ser atrapados en él para la celebración de la preparación todavía. En este punto, un alfiler se ha quedado atascado en el medio del segmento carpopodite y en la cara dorsal del segmento ischiopodite (Figura 4). Preparados disecados se bañan en una solución salina estándar de cangrejos de río, modificado a partir de solución de Van Harreveld s (1936), que se hace con 205 NaCl; 5.3KCl; 13,5 CaCl2, 2H 2 O, 2,45 de MgCl 2, 6H 2 O, 5 HEPES y se ajusta a pH 7,4 (en mm). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: El segmento de meropodite con la ventana de corte siendo levantado. Anote la ubicación de los pasadores de la disección. </li><li> La cutícula se levanta suavemente en la región distal y las fibras musculares se cortan lejos de la cutícula, haciendo movimientos hacia la base de la pierna. La cutícula se puede quitar. </li><li> El apodema (tendón) se corta en la articulación meropodite-carpopodite. Un perno se coloca en la superficie interna del tendón flexor de mostrar que el corte se debe hacer (Figura 5). El tendón se luego se pellizcó en el que se cortó con unas pinzas y el músculo flexor arrancó levantando en dirección caudal (Figura 6), dejando al descubierto el nervio principal de la pierna y el músculo extensor. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5: El apodema del músculo flexor se destaca por el desplazamiento desde el flexor con un alfiler. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig6.jpg" alt="Figura 6" /> Figura 6: El apodema del músculo flexor se corta y se retira con cuidado para no dañar el nervio principal de la pierna. </li><li> El nervio principal de la pierna se corta en la articulación meropodite-carpopodite y cuidadosamente hacia atrás sobre el músculo extensor. La superficie medial del músculo se utiliza en este estudio. La separación de los nervios a los músculos extensores de la pierna el nervio principal se puede mejorar, tirando suavemente el muñón distal del nervio principal pierna a un lado de la preparación. Al pelar el nervio principal de la pierna de nuevo sobre el músculo extensor, pequeñas ramas del axón puede ser necesario cortar. Estas son las ramas de las neuronas motoras inhibitorias del músculo extensor. El paquete más grande ramificación del nervio pierna principal, cerca del extremo proximal de la meropodite es el conjunto de nervios pequeños de interés. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig7.jpg" alt="Figura 7" /> Figura 7: El nervio principal de la pierna se corta y se retiró en dirección proximal. Este conjunto de nervios que se puede ver con la tinción de azul de metileno (Figura 8) o con 4-Di-2-ASP tinción fluorescente (Figura 9). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig8.jpg" alt="Figura 8" /> Figura 8: El músculo extensor manchada con azul de metileno. Tenga en cuenta las ramificaciones del axón y lados axones fácilmente visibles en el nervio. Flechas rojas demarcar la pista de los nervios. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig9.jpg" alt="Figura 9" /> Figura 9: Los axones de las manchas del nervio motor de 4-Di-2-ASP. El axón tónica es más brillante visible debido a la mayor contenido mitocondrial. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10a.jpg" alt="Figura 10A" /> Figura 10A: terminales de las neuronas individuales fásica y tónica teñidas con 4-Di-2-ASP. Tenga en cuenta las varices en las terminales de tónica y la naturaleza fina de los terminales fásica. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10b.jpg" alt="Figura 10B" /> Figura 10B-Tonic señaló <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig10c.jpg" alt="Figura 10C" /> Figura 10C-fásica señaló </li></ol> 3) perfiles fisiológicos <ol><li> Para observar el potencial postsináptico excitador (PPSE) de las neuronas tónica o fásica, uno de los axones aislados en el conjunto de nervios que es estimulado por un electrodo de succión (Figura 11) conectado a un estimulador Grass, mientras que el potencial intracelular en el músculo son monitoreados (Johnstone et al., 2008). La estimulación a 70 Hz se aplica a la tónica del axón con el fin de promover una respuesta facilitada por el NMJs bajo rendimiento, o un solo pulso (1 Hz) se aplica a los axones fásica con el fin de obtener grandes PPSE de la salida de alta NMJs como se muestra en la Figura 12. El PPSE se registran en una computadora a través de una interfaz PowerLab/4s. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig11.jpg" alt="Figura 11" /> Figura 11: electrodo de estimulación se coloca sobre un solo axón en el conjunto de nervios. Tenga en cuenta la línea verde sobre los dos principales axones. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig12.jpg" alt="Figura 12" /> Figura 12: los potenciales postsinápticos (EPSPS) de las neuronas o tónico fásica como las obtenidas por registros intracelulares. </li><li> Investigación en la naturaleza de facilitación sináptica y la depresión sináptica puede ser abordado por varios paradigmas experimentales con el NMJs de salida de alta y baja. La facilitación de la NMJs baja producción depende de la frecuencia, como se muestra para los pulsos de 20, 40 y 60 Hz de aproximadamente 20 estímulos (Figura 13). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig13.jpg" alt="Figura 13" /> Figura 13: PPSE en respuesta a un tren de pulsos de estimulación dado con tres frecuencias diferentes de 20, 40 y 60 Hz en solución salina normal, cangrejos de río. </li><li> La tasa de depresión sináptica a la frecuencia de estimulación se relaciona también con la NMJs de alto rendimiento. La figura 14 muestra un continuo de 5 Hz de estimulación presionando la UNM más de 30 min. Con mayor frecuencia de estimulación, la preparación se deprimen con mayor rapidez (Bradacs et al., 1997). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig14.jpg" alt="Figura 14" /> Figura 14: Amplitud de EPSP de la respuesta fásica durante 5 Hz estimulación para inducir a la depresión. </li></ol> 4) Las respuestas cuántica <ol><li> Un procedimiento similar al descrito para el músculo del primer partido de los cangrejos de río (Cooper y Cooper, 2009) se utiliza en esta preparación. El PPSE cuántico directamente sobre las regiones de identificación de las terminales nerviosas se registran mediante la colocación de la luz de un electrodo de grabación de la macro-parche en varices sináptica visualiza con el colorante vital 4-Di-2-Asp (5 M, 5 min de tratamiento, Cooper et al, 1995;. Magrassi et al, 1987).. El espontáneo, así como las respuestas evocadas cuántica se puede grabar a lo largo de las terminaciones nerviosas. El evocada y espontánea potenciales sinápticos se registran con el electrodo de macro-parche (Dudel, 1981; Wojtowicz et al, 1991;. Mallart, 1993). Kimax de vidrio (diámetro exterior: 1,5 mm) fue detenido y pulido al fuego para producir puntas de parche con un diámetro interior de 10 a 20 micras (Figura 15). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig15.jpg" alt="Figura 15" /> Figura 15: La luz de un electrodo de grabación de la macro-parche .. La luz del electrodo se llena con el medio baño. El amplificador es el mismo que el utilizado para las grabaciones intracelular antes mencionados. Electrodo y la resistencia del sello puede ser determinada por los impulsos de prueba que pasa corriente a través del electrodo. En nuestros experimentos, las resistencias de cierre varió desde 0,3 hasta 1,0 MOhm y la resistencia del electrodo varió desde 0,5 hasta 1,0 MOhm. Resistencia del sello pueden ser monitoreados a lo largo de la grabación. </li><li> Recuento directo de eventos cuantal es posible con frecuencias baja estimulación. Para cada respuesta evocada, el número de eventos cuánticos pueden ser fácilmente determinadas por los terminales de salida bajo (Figure 16). Estos conteos directos pueden ayudar a estimar el contenido medio cuántica (Del Castillo y Katz, 1954;. Cooper et al, 1995). Desde el NMJs evocados de alto rendimiento producen varios acontecimientos evocados cuántica, la amplitud media o la zona de las deflexiones, junto con la amplitud de pico o área promedio de los eventos espontáneos, se puede utilizar para aproximar el contenido medio cuántica (Cooper et al. , 1995). <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig16.jpg" alt="Figura 16" /> Figura 16 rastros registrados focal de un fásica y tónica MNJ. <img src="/files/ftp_upload/2319/2319fig17.jpg" alt="Figura 17" /> Figura 17 </li></ol>

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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+structure+and+transmitter+release+in+crustacean+phasic+and+tonic+motor+neurons.">Synaptic structure and transmitter release in crustacean phasic and tonic motor neurons.</a> J. Neurosci. 18, 1374-1382 (1998).</li><li>Msghina, M., Millar, A. G., Charlton, M. P., Govind, C. K., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+entry+related+to+active+zones+and+differences+in+transmitter+release+at+phasic+and+tonic+synapses.">Calcium entry related to active zones and differences in transmitter release at phasic and tonic synapses.</a> J. Neurosci. 19, 8419-8434 (1999).</li><li>Mykles, D. L., Medler, S. A., Koenders, A., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofibrillar+protein+isoform+expression+is+correlated+with+synaptic+efficacy+in+slow+fibres+of+the+claw+and+leg+opener+muscles+of+crayfish+and.">Myofibrillar protein isoform expression is correlated with synaptic efficacy in slow fibres of the claw and leg opener muscles of crayfish and.</a> 205 (4), 513-522 (2002).</li><li>Sparks, G., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=5-HT+offsets+homeostasis+of+synaptic+transmission+during+short-term+facilitation.">5-HT offsets homeostasis of synaptic transmission during short-term facilitation.</a> J. Applied Physiol. 96, 1681-1690 (2004).</li><li>Sohn, J., Mykles, D. L., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anatomical,+physiological+and+biochemical+characterization+of+muscles+associated+with+the+articulating+membrane+in+the+dorsal+surface+of+the+crayfish+abdomen.">The anatomical, physiological and biochemical characterization of muscles associated with the articulating membrane in the dorsal surface of the crayfish abdomen.</a> J. Exp. Zool. 287, 353-377 (2004).</li><li>Tsien, R. W., Harata, N. C., Choi, S. W. P. y. l. e., Aravanis, A. M., AM, G. C. h. e. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vesicles,+quanta+and+synaptic+plasticity.+Molecular+Mechanisms+of+synaptic+function.">Vesicles, quanta and synaptic plasticity. Molecular Mechanisms of synaptic function.</a> , (2001).</li><li>Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiological+solution+for+freshwater+crustaceans.">A physiological solution for freshwater crustaceans.</a> Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 34, 428-432 (1936).</li><li>Van Harreveld, A., Wiersma, C. A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+triple+innervation+of+the+crayfish+muscle.">The triple innervation of the crayfish muscle.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 22, 667-667 (1936).</li><li>Wiersma, C. A. G., Van Harreveld, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+frequency+of+stimulation+on+the+slow+and+fast+contraction+in+crustacean+muscle.">The influence of the frequency of stimulation on the slow and fast contraction in crustacean muscle.</a> Physiol. Zool. 11, 75-81 (1938).</li><li>Wojtowicz, J. M., Smith, B. R., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+recruitment+of+silent+synapses.">Activity-dependent recruitment of silent synapses.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 627, 169-179 (1991).</li></ol>

Hemos demostrado en este informe la manera de analizar, registrar y cuantificar las respuestas sinápticas en una preparación de cangrejo de río único neuromuscular en la que dos terminales de alta y baja producción-inervan la misma fibra muscular. Los preparativos neuromuscular en el cangrejo de río ofrecen muchas ventajas sobre los vertebrados uniones neuromusculares, ya que sólo unas pocas neuronas motoras excitatorias son necesarios para inervar el músculo, y desde las neuronas son identificables desde la preparación hasta la preparación (Atwood, 1976). Además, el neurotransmisor excitatorio es el glutamato, y el potencial postsináptico excitador (PPSE) se clasifican, por lo que las propiedades biofísicas de los hechos calificados son análogas a las dendritas de las neuronas en el SNC de los vertebrados. Las corrientes cuántica, sin embargo, se puede controlar directamente en los sitios postsinápticos (Cooper et al., 1995). 5 Hz estimulación repetitiva del nervio fásica da lugar a grandes PPSE que se convierten en muy deprimido después de varios minutos. Este tipo de depresión es común en los artrópodos fásica las uniones neuromusculares (Atwood y Cooper, 1996). La presencia de los terminales tónico junto a los terminales fásico permite evaluar si el objetivo postsináptica es modificado en gran medida durante y después de la depresión de las neuronas motoras fásicas. Además, los terminales de salida de baja proporcionar una preparación buena para investigar los mecanismos que subyacen a la facilitación sináptica (Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah y Cooper, 2009) Los terminales de salida de alta proporcionan un campo de juegos para investigar la modulación de la tasa de depresión sináptica y el proceso de recuperación. Preparaciones accesible y viable debe ayudar a descifrar los mecanismos detrás de la depresión sináptica. En esta preparación cangrejos extensor en las piernas, la aplicación exógena de la serotonina es otra herramienta para investigar la recuperación de la depresión sináptica y, potencialmente, un medio de fomentar la investigación en la movilización de grupos de vesículas sinápticas. Esta preparación proporciona varias ventajas experimentales, ya que las fibras musculares individuales están inervadas por neuronas motoras, tanto fásica y tónica. Dado que la serotonina aumenta el número de vesículas que se liberan con el estímulo provocado, y puesto que favorece la recuperación durante la depresión, es evidente que hay una cierta modulación de las piscinas de la vesícula para aumentar la probabilidad de que la fusión con la presencia de la serotonina (Johnstone et al., 2008 ; Logsdon et al, 2006;. Sparks et al, 2004).. Modelos que explican la dinámica de los grupos de vesículas dentro de la terminal nerviosa presináptica durante la estimulación de baja frecuencia, en oposición a un estado de depresión, también tienen que ser considerados entre los distintos protocolos experimentales que son posibles con esta preparación. Se ha observado en otros sistemas que alrededor del 30% del fondo de la vesícula se somete a un reciclaje rápido, mientras que el resto de las vesículas reciclada a través de un camino lento de reciclaje tradicionales a través del retículo endoplásmico (Harata et al, 2001;. Tsien et al. , 2001). Como caminos de doble también puede estar presente en este sistema. Si se carece de ATP en el estado depresivo de la terminal presináptica, luego de atraque y desatraque, no podría ser capaz de producir, por lo que muchas vesículas más descargado que permanecen en la superficie sináptica. Desde hace más vesículas se libera rápidamente cuando los terminales están expuestos a 5-HT, es factible que más están contenidas dentro de la piscina fácilmente liberable (RRV). Sin embargo, en el estado de depresión, con una reducción de la ATP, el acoplamiento y desacoplamiento puede ser bloqueado, incluso en presencia de 5-HT, que a su vez deja vesículas descargan en la superficie sináptica. Dado que los datos preliminares sugieren que más vesículas se liberan en el tiempo con la exposición prolongada 5 HT y la estimulación, la distribución de la piscina de la vesícula de los caminos de reciclaje rápido y lento puede ser sesgada a tener vesículas para un nuevo lanzamiento (de Johnstone et al. , 2008; reseñas-Desai-Shah et al, 2008;. Desai-Shah y Cooper, 2009) Con las técnicas de las grabaciones macropatch focal de las corrientes postsinápticas y las medidas de los cuantos de una sola de las regiones definidas de la terminal del nervio motor, uno puede hacer preguntas para determinar si la depresión sináptica se está produciendo como consecuencia del menor número de vesículas de ser liberado o por alteraciones de la función de los receptores postsinápticos. Se ha demostrado que las vesículas son más sensibles a la fusión en la UNM fásico de esta preparación para una exposición de calcio equivalente (Miller et al. 2005), lo que explica probablemente por el mayor contenido medio cuántica de los terminales fásica (Msghina et al. , 1998, 1999). Además, las diferencias en el frequenin calcio de unión a proteínas (Jeromin et al., 1999) y la ultraestructura (King et al., 1996) contribuye a la eficacia sináptica diferencial (Cooperet al., 2003). Algunos estudios previos han explorado el fenotipo muscular de las fibras de los músculos extensores (Bradacs et al, 1997;. Cooper et al, 2003).. Al comparar la regulación de la diferenciación muscular de los tipos de fibras puramente tónica y fásica en el cangrejo de río para los tipos de fibras mixtas, al igual que para el extensor pierna que está debidamente inervadas, podría proporcionar pistas sobre la expresión muscular fenotipo y la regulación (LaFramboise et al, 2000;. Sohn et al, 2000;. Griffis et al, 2001;. Mykles et al, 2002).. Muchas de las preguntas fundamentales quedan por resolver en la neurobiología, y esta preparación puede ayudar a hacer frente a algunos de ellos. Algunos temas de interés en el campo hoy en día que pueden ser abordados con el extensor en la pierna son: 1) Determinar los mecanismos celulares que subyacen a la depresión sináptica de alta terminales de salida (es la depresión debido a la reducción de Ca2 + de entrada, la falta de una autoridad competente fácilmente liberable de vesículas (RRV) de tenis, y / o post-sináptica alterada receptividad?) 2) Determinar la función mecánica de 5-HT cuando se aplica después de la inducción de la depresión sináptica para promover una recuperación más rápida, y 3) Determinar si las formas de la cuántica corrientes que surgen de la estimulación de las terminales fásica se alteran durante la inducción de la depresión a la dirección de los componentes pre-y post-sináptica de la depresión sináptica. Este MNJ es importante para la investigación en curso y futuros investigadores, ya que nos permite obtener la información pertinente que se ocupa de los mecanismos de subalterno de rendimiento sináptica medido directamente en los sitios de liberación. La investigación actual en esta área es proporcionar información sobre la modulación de la depresión sináptica de 5-HT y la dinámica de las piscinas de la vesícula. Dichos temas se refieren a los fundamentos básicos de la transmisión sináptica relevante para todos los sistemas neuronales.

<ol><li> Cangrejo de río (Procambarus clarkii). Atchafalaya Biological Supply Co., Raceland, LA., EE.UU.. </li><li> Estándar cangrejos salinos: <ul><li> Modificado de la solución de Van Harreveld (1936). (En mM) 205 NaCl, 5,3 KCl, CaCl2 13,5 2H 2 O, 2,45 de MgCl 2 6H 2 O, 5 HEPES y ajustado a pH 7,4 </li></ul></li><li> Herramientas de disección: Bellas # 5 pinzas, tijeras finas, titular de la hoja del cuchillo, clavos # 26002-20 insectos (todos obtenidos de herramientas de Ciencias Artes (EE.UU.), Inc., 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404 a 1139) </li><li> Plato Sylgard disección recubierto, un plato de grabación ya sea construida con electrodos de succión o de utilizar un electrodo de succión y manipulador de las anteras de mantener un electrodo de succión. </li><li> Microscopio de disección con función de zoom para las grabaciones intracelular. Para la grabación de coordinación en los terminales de visualizar un microscopio compuesto con los objetivos de pie (4 x y 20x) se utiliza. Se necesita una fuente de luz Hg. </li><li> Amplificador estándar intracelular y A / D para el consejo sobre la grabación de la línea a una computadora. Las señales eléctricas se registran en la línea a una interfaz de PowerLab/4s (ADInstruments, Australia). Utilizamos el software estándar de ADInstruments llamado Gráfico o ámbito de aplicación. </li><li> Productos químicos: <ul><li> Usamos un colorante vital fluorescentes, 4 [4 (dietilamino) estirilo] N yoduro metilpiridinio (4 Di dos Asp, Molecular Probes, Eugene, OR), para visualizar las varices (Marigassi et al, 1987;. Cooper et al, 1995a. ). Todos los productos químicos de solución salina se obtuvieron de Sigma Chemical Company (St. Louis, MO). </li></ul></li><li> De registros intracelulares que utilizan tubos capilares de vidrio (Catálogo # 30-31-0 de FHC, Brunswick, ME, 04011, EE.UU.) y para los electrodos de macropatch focal que usamos Kimax-51, Kimble productos del arte. N º 34502, ID 0.8-1.1mm, longitud 100 mm. El electrodo intracelular debe tener una resistencia de 20 a 30 Mohm. El electrodo macropatch se construye mediante la ruptura de la punta de la copa después de una punta fina se realizó a partir de un extractor de electrodos. La punta de rota tiene que ser una rotura limpia perpendicular sobre 20μM de diámetro. La punta es entonces el calor pulido de 10μM diámetro interior. El eje del electrodo se ejecute más de un elemento de calefacción para hacer que se doble alrededor de 45 grados con una curva gradual. Esto produce una luz de electrodos plana o perpendicular sobre las terminales nerviosas como el ángulo con el micromanipulador se producen alrededor de otros 45 grados a la preparación. </li></ol>

physiological recordings of high and low output nmjs on the crayfish leg extensor muscle

Se explica en detalle cómo exponer y llevar a cabo los registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas de alta (fásico) y baja (tónica) las neuronas motoras que inervan la salida del músculo extensor de la pierna a pie de un cangrejo de río. Claras diferencias están presentes en la fisiología y la morfología de las terminaciones nerviosas fásica y tónica. El axón tónica contiene muchas más mitocondrias, lo que le permite tomar una tinción vital con más intensidad que el axón fásica. Los terminales tienen varices tónico, y la terminal fásica es filiforme. Los terminales de tónica son bajos en la eficacia sináptica, pero muestran dramáticas respuestas facilitadas. Por el contrario, los terminales fásicas son altos en eficacia cuántica, pero muestran la depresión sináptica con la estimulación de alta frecuencia. La salida cuántica se mide con un electrodo de macropatch focal se colocan directamente sobre las terminales nerviosas visualizado. Ambos terminales fásica y tónica inervan las fibras musculares mismo, lo que sugiere que las diferencias inherentes a las neuronas, en vez de retroalimentación diferencial retrógrada de los músculos, dan cuenta de la diferenciación morfológica y fisiológica.

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Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

Este artículo demuestra cómo llevar a cabo los registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas en el músculo extensor de la pierna a pie de un cangrejo de río y cómo las terminales nerviosas se visualizan para mostrar las diferencias morfológicas de alto y bajo rendimiento terminales nerviosas.

Las grabaciones fisiológicas de NMJs de salida de alta y baja en el músculo extensor de piernas cangrejo de río

We explain in detail how to expose and conduct electrophysiological recordings of synaptic responses for high (phasic) and low (tonic) output motor ...

physiological-recordings-high-low-output-nmjs-on-crayfish-leg

Research

JoVE Journal

Neuroscience

11.6K vistas.  University of Kentucky. Este artículo demuestra cómo llevar a cabo los registros electrofisiológicos de las respuestas sinápticas en el músculo extensor de la pierna a pie de un cangrejo de río y cómo las terminales nerviosas se visualizan para mostrar las diferencias morfológicas de alto y bajo rendimiento terminales nerviosas.

Video: Physiological Recordings of High and Low Output NMJs on the Crayfish Leg Extensor Muscle

State-Dependency Effects on TMS:  A Look at Motive Phosphene Behavior

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability (either increasing or decreasing it) via the application of localized magnetic field pulses.1,2 Within the field of TMS, the term state dependency refers to the initial, baseline condition of the particular neural region targeted for stimulation. As can be inferred, the effects of TMS can (and do) vary according to this primary susceptibility and responsiveness of the targeted cortical area.3,4,5

In this experiment, we will examine this concept of state dependency through the elicitation and subjective experience of motive phosphenes. Phosphenes are visually perceived flashes of small lights triggered by electromagnetic pulses to the visual cortex. These small lights can assume varied characteristics depending upon which type of visual cortex is being stimulated. In this particular study, we will be targeting motive phosphenes as elicited through the stimulation of V1/V2 and the V5/MT+ complex visual regions.6

In this article, we examine the effects of visually relevant state dependency on TMS induced motive phosphenic presentations.

La dependencia estatal Efectos sobre la EMT: Una mirada a la conducta motriz fosfeno

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive neurostimulatory and neuromodulatory technique that can transiently or lastingly modulate ...

Investigación

Neurociencias

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that influence a cell's membrane potential and which we address in these experiments are: (1) Ion concentration of K+ on the outside of the membrane, and (2) the permeability of the membrane to specific ions. The crayfish abdominal extensor muscles are in groupings with some being tonic (slow) and others phasic (fast) in their biochemical and physiological phenotypes, as well as in their structure; the motor neurons that innervate these muscles are correspondingly different in functional characteristics. We use these muscles as well as the superficial, tonic abdominal flexor muscle to demonstrate properties in synaptic transmission. In addition, we introduce a sensory-CNS-motor neuron-muscle circuit to demonstrate the effect of cuticular sensory stimulation as well as the influence of neuromodulators on certain aspects of the circuit. With the techniques obtained in this exercise, one can begin to answer many questions remaining in other experimental preparations as well as in physiological applications related to medicine and health. We have demonstrated the usefulness of model invertebrate preparations to address fundamental questions pertinent to all animals.

The experiments demonstrate an easy approach for students to gain experience in examining muscle structure, synaptic responses, the effects of ion gradients and permeability on membrane potentials. Also, a sensory-CNS-motor-muscle circuit is presented to show a means to test effects of compounds on a neuronal circuit.

Los potenciales de membrana, las respuestas sinápticas, circuitos neuronales, neuromodulación y la histología muscular utilizando el cangrejo de río: Los ejercicios de laboratorio para estudiantes

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

Los órganos receptores de los músculos en el abdomen del cangrejo de río: Un ejercicio de laboratorio los estudiantes en la propiocepción

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings with a force transducer to monitor the strength of contraction. In addition, we demonstrate how to visually monitor peristaltic activity, which can be used as a bioassay for various peptides, biogenic amines and neurotransmitters. This preparation is amenable to student laboratories in physiology and for demonstrating pharmacological concepts to students. This preparation has been in use for over 100 years, and it still offers much as a model for investigating the generation and regulation of peristaltic rhythms and for describing the mechanisms underlying their modulation. The pharmacological assays and receptor sub-typing that were started over 50 years ago on the hindgut still contribute to research today. This robust preparation is well suited to training students in physiology and pharmacology.

In this report we demonstrate techniques that can be used to investigate the biology of the crayfish hindgut. We show how to dissect a crayfish abdomen and study the associated anatomy, physiology and modulation of activity. The peristaltic activity and strength of contractions are measured using a force transducer.

La experimentación fisiológica con el intestino grueso cangrejo de río: Un ejercicio de laboratorio los estudiantes

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings ...

Paired Patch Clamp Recordings from Motor-neuron and Target Skeletal Muscle in Zebrafish

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle. This is a direct consequence of the accessibility to both cell types and ability to visually distinguish the single segmental CaP motor-neuron on the basis of morphology and location. This video demonstrates the microscopic methods used to identify a CaP motor-neuron and target muscle cells as well as the methodologies for recording from each cell type. Identification of the CaP motor-neuron type is confirmed by either dye filling or by the biophysical features such as action potential waveform and cell input resistance. Motor-neuron recordings routinely last for one hour permitting long-term recordings from multiple different target muscle cells. Control over the motor-neuron firing pattern enables measurements of the frequency-dependence of synaptic transmission at the neuromuscular junction. Owing to a large quantal size and the low noise provided by whole cell voltage clamp, all of the unitary events can be resolved in muscle. This feature permits study of basic synaptic properties such as release properties, vesicle recycling, as well as synaptic depression and facilitation. The advantages offered by this in vivo preparation eclipse previous neuromuscular model systems studied wherein the motor-neurons are usually stimulated by extracellular electrodes and the muscles are too large for whole cell patch clamp. The zebrafish preparation is amenable to combining electrophysiological analysis with a wide range of approaches including transgenic lines, morpholino knockdown, pharmacological intervention and in vivo imaging. These approaches, coupled with the growing number of neuromuscular disease models provided by mutant lines of zebrafish, open the door for new understanding of human neuromuscular disorders.

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target skeletal muscle. This video demonstrates the microscopic methods used to identify a segmental CaP motor-neuron and target muscle cells as well as the methodologies for recording from each cell type.

Emparejados grabaciones patch clamp de neurona motora y el músculo esquelético de destino en el pez cebra

Larval zebrafish represent the first vertebrate model system to allow simultaneous patch clamp recording from a spinal motor-neuron and target muscle.  ...

High-density EEG Recordings of the Freely Moving Mice using Polyimide-based Microelectrode

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a noninvasive brain monitoring tool in cognitive neuroscience as well as a diagnostic tool for epilepsy and sleep disorders in neurology. However, the underlying mechanism of EEG rhythm generation is still under the veil. Recently introduced polyimide-based microelectrode (PBM-array) for high resolution mouse EEG1 is one of the trials to answer the neurophysiological questions on EEG signals based on a rich genetic resource that the mouse model contains for the analysis of complex EEG generation process. This application of nanofabricated PBM-array to mouse skull is an efficient tool for collecting large-scale brain activity of transgenic mice and accommodates to identify the neural correlates to certain EEG rhythms in conjunction with behavior. However its ultra-thin thickness and bifurcated structure cause a trouble in handling and implantation of PBM-array. In the presented video, the preparation and surgery steps for the implantation of PBM-array on a mouse skull are described step by step. Handling and surgery tips to help researchers succeed in implantation are also provided.

In this article, we described the surgery procedure and handling tips for implantation of ultra-thin polyimide-based microelectrode array (PBM-array) on the mouse skull for acquisition of high-density encephalography (EEG) in a mouse model.

Alta densidad de registros de EEG de los ratones se mueven libremente con poliamida basado microelectrodos

Electroencephalogram (EEG) indicates the averaged electrical activity of the neuronal populations on a large-scale level. It is widely utilized as a ...

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output. During development, this activity is important for the migration and differentiation of cortex cell types and the formation of neuronal connections1. In the mature animal, ongoing activity reflects the past and the present state of an animal into which sensory stimuli are seamlessly integrated to compute future actions. Thus, a clear understanding of the organization of ongoing i.e. spontaneous activity is a prerequisite to understand cortex function. 
Numerous recording techniques revealed that ongoing activity in cortex is comprised of many neurons whose individual activities transiently sum to larger events that can be detected in the local field potential (LFP) with extracellular microelectrodes, or in the electroencephalogram (EEG), the magnetoencephalogram (MEG), and the BOLD signal from functional magnetic resonance imaging (fMRI). The LFP is currently the method of choice when studying neuronal population activity with high temporal and spatial resolution at the mesoscopic scale (several thousands of neurons). At the extracellular microelectrode, locally synchronized activities of spatially neighbored neurons result in rapid deflections in the LFP up to several hundreds of microvolts. When using an array of microelectrodes, the organizations of such deflections can be conveniently monitored in space and time. 
Neuronal avalanches describe the scale-invariant spatiotemporal organization of ongoing neuronal activity in the brain2,3. They are specific to the superficial layers of cortex as established in vitro4,5, in vivo in the anesthetized rat 6, and in the awake monkey7. Importantly, both theoretical and empirical studies2,8-10 suggest that neuronal avalanches indicate an exquisitely balanced critical state dynamics of cortex that optimizes information transfer and information processing.
In order to study the mechanisms of neuronal avalanche development, maintenance, and regulation, in vitro preparations are highly beneficial, as they allow for stable recordings of avalanche activity under precisely controlled conditions. The current protocol describes how to study neuronal avalanches in vitro by taking advantage of superficial layer development in organotypic cortex cultures, i.e. slice cultures, grown on planar, integrated microelectrode arrays (MEA; see also 11-14).

A robust way to study neuronal avalanches, i.e. scale-invariant spatio-temporal activity bursts, indicative of critical state dynamics in cortex. Avalanches emerge spontaneously in developing superficial layers of cultured cortex which allows for long-term measurements of the activity with planar integrated multi-electrode arrays (MEA) under precisely controlled conditions.

Electrodos múltiples grabaciones matriz de avalanchas neuronal en cultivos organotípicos

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output.  During development, this activity is important for the ...

A Procedure for Implanting Organized Arrays of Microwires for Single-unit Recordings in Awake, Behaving Animals

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell level. The technique allows experimenters to examine temporally and regionally specific firing patterns in order to correlate recorded action potentials with ongoing behavior. Moreover, single-unit recordings can be combined with a plethora of other techniques in order to produce comprehensive explanations of neural function. In this article, we describe the anesthesia and preparation for microwire implantation. Subsequently, we enumerate the necessary equipment and surgical steps to accurately insert a microwire array into a target structure. Lastly, we briefly describe the equipment used to record from each individual electrode in the array. The fixed microwire arrays described are well-suited for chronic implantation and allow for longitudinal recordings of neural data in almost any behavioral preparation. We discuss tracing electrode tracks to triangulate microwire positions as well as ways to combine microwire implantation with immunohistochemical techniques in order to increase the anatomical specificity of recorded results.

Implanting organized arrays of microwires for use in single-unit electrophysiological recordings presents a number of technical challenges.&#160;Methods for performing this technique and the equipment necessary are described.&#160;Also, the beneficial use of organized microwire arrays to record from distinct neural subregions with high spatial selectivity is discussed.

Un procedimiento para la implantación de matrices Organizados de Microhilos para grabaciones de una sola unidad en Awake, Comportarse Animales

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell ...

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of critical importance during the development of the circuit. Using the functional output of the circuit, feeding, changes in the neuronal architecture of the stomatogastric system can be visualized. Feeding behavior can be recorded by observing the rate of retraction of the mouth hooks, which receive innervation from the brain. Locomotor behavior is used as a physiological control for feeding, since larvae use their mouth hooks to traverse across an agar substrate. Changes in feeding behavior can be correlated with the axonal architecture of the neurites innervating the gut. Using immunohistochemistry it is possible to visualize and quantitate these changes. Improper handling of the larvae during behavior paradigms can alter data as they are very sensitive to manipulations. Proper imaging of the neurite architecture innervating the gut is critical for precise quantitation of number and size of varicosities as well as the extent of branch nodes. Analysis of most circuits allow only for visualization of neurite architecture or behavioral effects; however, this model allows one to correlate the functional output of the circuit with the impairments in neuronal architecture.

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

The feeding circuit in Drosophila melanogaster larvae serves a simple yet powerful model that allows changes in feeding rate to be correlated with alterations in the stomatogastric neural circuitry. This circuit is composed of central serotonergic neurons that send projections to the mouth hooks as well as the foregut.

Análisis funcional del circuito de alimentación de las larvas en Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

The Swimmeret System of Crayfish: A Practical Guide for the Dissection of the Nerve Cord and Extracellular Recordings of the Motor Pattern

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of abdominal ganglia (A1 to A6). This chain of ganglia includes the part of the central nervous system (CNS) that drives coordinated locomotion of the pleopods (swimmerets): the swimmeret system. It is known for over five decades that in crayfish each swimmeret is driven by its own independent pattern generating kernel that generates rhythmic alternating activity 1-3. The motor neurons innervating the musculature of each swimmeret comprise two anatomically and functionally distinct populations 4. One is responsible for the retraction (power stroke, PS) of the swimmeret. The other drives the protraction (return stroke, RS) of the swimmeret. Motor neurons of the swimmeret system are able to produce spontaneously a fictive motor pattern, which is identical to the pattern recorded in vivo 1.
The aim of this report is to introduce an interesting and convenient model system for studying rhythm generating networks and coordination of independent microcircuits for students&#8217; practical laboratory courses. The protocol provided includes step-by-step instructions for the dissection of the crayfish&#8217;s abdominal nerve cord, pinning of the isolated chain of ganglia, desheathing the ganglia and recording the swimmerets fictive motor pattern extracellularly from the isolated nervous system.
Additionally, we can monitor the activity of swimmeret neurons recorded intracellularly from dendrites. Here we also describe briefly these techniques and provide some examples. Furthermore, the morphology of swimmeret neurons can be assessed using various staining techniques. Here we provide examples of intracellular (by iontophoresis) dye filled neurons and backfills of pools of swimmeret motor neurons. In our lab we use this preparation to study basic functions of fictive locomotion, the effect of sensory feedback on the activity of the CNS, and coordination between microcircuits on a cellular level.

Here we describe the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. We also demonstrate an electrophysiological technique to record fictive locomotion from swimmeret motor neurons.

El Sistema Swimmeret de cangrejo de río: Una guía práctica para la disección del cordón nervioso y extracelulares Grabaciones del patrón motor

Here we demonstrate the dissection of the crayfish abdominal nerve cord. The preparation comprises the last two thoracic ganglia (T4, T5) and the chain of ...