Los autores agradecen las contribuciones artísticas de Hyewon Cooper.

<ol>
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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+and+molting+effects+on+a+proprioceptor+organ+in+the+Dungeness+crab,+Cancer+magister.">Regeneration and molting effects on a proprioceptor organ in the Dungeness crab, Cancer magister.</a> J. Neurobiol. 25 (5), 461-471 (1994).</li><li>Hartman, H. B., Austin, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proprioceptor+organs+in+the+antennae+of+Decapoda+Crustacea.">Proprioceptor organs in the antennae of Decapoda Crustacea.</a> J. Comp. Physiol. 81 (2), 187-202 (1972).</li><li>Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+sensory+processes+during+limb+regeneration+in+adult+crayfish.">Development of sensory processes during limb regeneration in adult crayfish.</a> J. Exp. Biol. 201 (Pt 11), 1745-1752 (1998).</li><li>Chung, Y. -. S., Cooper, R. M., Graff, J., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+acute+and+chronic+effect+of+low+temperature+on+survival,+heart+rate+and+neural+function+in+crayfish+(Procambarus+clarkii)+and+prawn+(Macrobrachium+rosenbergii)+species.">The acute and chronic effect of low temperature on survival, heart rate and neural function in crayfish (Procambarus clarkii) and prawn (Macrobrachium rosenbergii) species.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 2 (3), 75-86 (2012).</li><li>Blundon, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+and+thermal+history+on+neuromuscular+properties+of+two+crustacean+species.">Effects of temperature and thermal history on neuromuscular properties of two crustacean species.</a> J. Comp. Physiol. B. 158 (6), 689-696 (1989).</li><li>Cooper, R. M., Schapker, H., Adami, H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+and+ventilatory+measures+in+crayfish+during+copulation.">Heart and ventilatory measures in crayfish during copulation.</a> Open J. Mol. Int. Physiol. 1 (3), 36-42 (2011).</li><li>Bierbower, S. M., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanistic+action+of+carbon+dioxide+on+a+neural+circuit+and+NMJ+communication.">The mechanistic action of carbon dioxide on a neural circuit and NMJ communication.</a> Journal of Experimental Zoology. , (2013).</li><li>Bierbower, S. M., Shuranova, Z. P., Viele, K., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+systems+and+environmental+change+on+behavior+during+social+interactions.">Sensory systems and environmental change on behavior during social interactions.</a> Brain Behav. 3 (1), 4-13 (2013).</li></ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

El propósito de esta serie de experimentos es 1) para enseñar y exponer los principios fundamentales de las grabaciones extracelulares de un órgano propioceptivo identificables y nerviosa tensión y 2) hacer hincapié en la importancia de la cartografía anatómica en relación con la función fisiológica de los sistemas sensoriales particulares. Este enfoque experimental y los modelos animales utilizados son baratos y relativamente fácil de llevar a cabo en laboratorios de enseñanza neurofisiología. Las neuronas de los órganos chordotonal son de dos tipos funcionales específicos, los que responden al movimiento y los que responden a las posiciones estáticas. Registros de células individuales de una variedad de órganos chordotonal, no importa cual se examina conjunta, han demostrado que esto es el caso de 3,5. En efecto, los órganos chordotonal asociados con las articulaciones de las antenas de las langostas revelan los mismos dos tipos sensoriales y anatomía básica 27. Además de ser hay dos tipos de neuronas (movimiento y positien), las neuronas comparten la misma disposición anatómica en sus respectivas hebras elásticas. La gran somata situado proximalmente en la cadena tienden a pertenecer a las neuronas sensibles al movimiento dinámico. Las neuronas que indican posiciones estáticas tienen pequeños cuerpos celulares y se localizan distalmente. Estas células son tónicamente activa. La articulación PD sólo contiene un solo órgano chordotonal mientras que hay dos órganos chordotonal en el carpo-propodio (CP) y merus-carpo (MC) articulaciones. La disección para exponer estructuras propioceptivos en los cangrejos azules (C. sapidus) para el registro electrofisiológico se requiere una estrategia que permite a los movimientos de la articulación que tienen lugar en las posiciones naturales durante la grabación de las neuronas sensoriales. El nervio de tensión para el músculo abridor en la pierna para caminar es un muy buen nervio formado por varias neuronas. A menos que se tenga cuidado, el nervio tensión, así como el nervio motor que inerva el músculo a estimular, pueden ser dañados durante la disección. Paragrabaciones óptimas de los electrodos de succión deben adaptarse al tamaño del nervio. Las grabaciones son fácilmente accesibles en un laboratorio de los estudiantes usando un microscopio de disección magnificación 30-40X y micromanipuladores de gama baja. Los futuros experimentos que serían interesantes para perseguir a los órganos chordotonal conjuntas serían para examinar los perfiles estructurales y fisiológicos durante la regeneración de la pierna en varias especies en las diferentes etapas del ciclo de vida como una continuación de un primer estudio que utiliza Cancer magister 19,26 . Preguntas que quedan por abordar son: 1) ¿la distribución y organización de las neuronas regeneradas dependen de la edad del animal cuando regenerar una extremidad, 2) son las proyecciones axonales en el SNC (cordón nervioso ventral) en una extremidad en regeneración funcional o lo hace tomar tiempo y la utilización conjunta de establecer conexiones funcionales, y 3) lo que ocurre con los axones seccionados proximal al plano autotomy cuando la extremidad está AUTOTomized? 28 Los crustáceos se ajustan a las condiciones ambientales y la temperatura de su entorno, pero no está claro cómo mantienen la coordinación dentro de un circuito neural como neuronas alteran su actividad en respuesta a los cambios de temperatura. Una baja tasa de cambio podría permitir que el animal algún tiempo para la aclimatación, mientras que un cambio rápido puede not29, 30. Los cambios fisiológicos en el pH y osmolaridad debido al metabolismo, el comportamiento de 31 años, o de impacto ambiental pueden presentar problemas similares a los circuitos neuronales implicados en la propiocepción. Estas preparaciones de crustáceos son ideales para hacer frente a estos tipos de problemas debido a que su función está bien caracterizado en un único nivel celular. En este protocolo se ha demostrado la importancia fisiológica de las neuronas de la tensión en la vigilancia de la fuerza generada por el músculo abridor. Estos receptores de tensión se pueden remontar a su ubicación dentro del apodema mediante el uso de procedimientos de tinción. Estosneuronas, como en los mamíferos, detectar la fuerza en los distintos niveles y reclutar neuronas adicionales como la fuerza aumenta. La frecuencia de la actividad está relacionada con la frecuencia de estimulación de la neurona del motor hasta que se alcanza la saturación en la recepción. El uso de un protocolo de liberación rápida con la articulación dactylus flexionada, la actividad de la tensión desaparece rápidamente, pero luego vuelve a recuperar la tensión en una articulación totalmente extendida. Este es un procedimiento experimental clásico para ilustrar la fuerza medida por receptores de tensión. Varios neuromoduladores pueden ser aplicados a la preparación para ver cómo afecta el desarrollo de la fuerza y ​​la respuesta neuronal. Uno de los aspectos importantes es cómo se procesan y se integran en el sistema nervioso central y su impacto en la actividad de las neuronas motoras las respuestas neuronales. Las técnicas que hemos mostrados permiten a uno empezar a abordar más información acerca de la tensión de funcionamiento del circuito de la neurona del nervio motor (sensorial), es decir, la señal en una pata intacta al ganglio y la espaldaal músculo. Los procedimientos de tinción demostrado son la clave para la comprensión de la fisiología de las neuronas sensoriales que inervan los órganos propioceptivos. Disposición anatómica de las neuronas basadas en la función y el tamaño del soma son similares en los diversos órganos chordotonal dentro de las patas de cangrejo. No se sabe si también se encuentran arreglos neuronales similares en otras especies de crustáceos o insectos. Combinando grabaciones fisiológicas de las células individuales y la cartografía de la ubicación permite relaciones funcionales estructura directa. La conservación a largo plazo de la disposición anatómica con CoCl2 tinción y fijación permite hacer repetitivamente medidas y evaluar la disposición estructural. La propiocepción y la recepción de tensión de los músculos esqueléticos son modalidades sensoriales que permiten a los comportamientos coordinados y respuestas a entorno externo e interno para los animales articulados en una variedad de configuración de músculo esqueléticos. El órgano receptor de los músculos en el abdomen de los cangrejos de río es otra preparación bien documentada (véase el Proyecto Crawdad; <a href="http://www.crawdad.cornell.edu/">http://www.crawdad.cornell.edu/</a> ) con fines didácticos de propiocepción con sólo dos neuronas por abdominal hemi-segmento 23 . Ser capaz de grabar de neuronas individuales a las ramificaciones nerviosas sensoriales proporciona más detalles que ayudan en la comprensión de los principios básicos de la recepción sensorial. Estas preparaciones crustáceos relativamente sencillas permiten uno para atender los aspectos fundamentales de la propiocepción y la supervisión de tensión, con la posibilidad de determinar los circuitos neuronales que permiten la integración central de insumos propioceptivas y otras sensoriales 9-12, 32, 33.

La propiocepción es la sensación de la posición de las extremidades y el movimiento que permite la conducta motora coordinada. Propioceptores constan de receptores (cinestésicas) posición (estática) y el movimiento. En los insectos y los crustáceos, los órganos chordotonal son las estructuras que proporcionan dicha información al sistema nervioso central 1. No todos los órganos chordotonal abarcan una articulación, pero aún así pueden controlar los movimientos de las articulaciones debido a su apego a las apodemas (tendón como las estructuras), que abarcan todo el conjunto y se mueven en asociación con el músculo esquelético y la articulación conjunta. Patas de cangrejo tienen seis articulaciones, cada uno con uno o dos órganos chordotonal 2. Normalmente, un chordotonal órgano tiene 60-100 o más neuronas sensoriales incrustados dentro de una hebra elástica, las neuronas que señal de posición conjunta estática, dirección y velocidad de movimiento 3-6. La entrada de los órganos chordotonal en cada junta y la pierna es procesada centralmente permitiendo movimientos coordinados por el animal. <p class="jove_content"&gt; Las fuerzas que producen músculos de las piernas durante las contracciones isométricas e isotónicas son detectados por receptores de tensión asociados con las fibras musculares y de sus anexos a apodemes7-9. En los protocolos de las piernas para caminar crustáceos que siguen se presenta la metodología para las grabaciones de las neuronas sensoriales primarias que monitorean la propiocepción y las neuronas que responden a las fuerzas generadas por las fibras musculares. También se presenta una técnica para la activación de movimientos de las piernas y la cuantificación de la generación de fuerza, así como las técnicas anatómicas que pueden ser utilizados para caracterizar la disposición de estas estructuras del sistema nervioso periférico. Los procedimientos están explicadas más abajo permiten el análisis estructural y funcional de las neuronas que inervan los dos tipos de receptores en relación con su ubicación, en una hebra elástica chordotonal y apodema. Para ilustrar esto, usamos el propodite-dactylopodite (PD) chordotonal órgano, el órgano que se extiende por el segmento más distal de la pierna de cangrejo 3.Aunque los estudios electrofisiológicos detallados se iniciaron en la década de 1930 y todavía se están llevando a cabo hoy en día, algunos aspectos han dado a conocer acerca de las conexiones segmentarias de propioceptores en las distintas articulaciones y su papel en el control coordinado de muscles10-16. El establecimiento de la relación estructura-función entre los órganos de propiocepción, músculos y el sistema nervioso le ayudará aún más a definir estos roles. Por ejemplo, el etiquetado de los cuerpos celulares y terminaciones distales de las neuronas de tensión insertados en el apodema revelará su ubicación con respecto a las fibras musculares 8,17-21. Se presentan tres técnicas de tinción para las piernas de los crustáceos que se pueden utilizar en la investigación o laboratorios académicos. La tinción con azul de metileno proporciona un contraste adecuado para los músculos y los nervios y se recomienda como una técnica sencilla para que los estudiantes aprendan la anatomía. Laboratorios que tienen configuraciones de microscopía de fluorescencia pueden lograr tinción neuronal más selectivo por la exposición breve de la nervios a colorante vital 4-di-2-ASP. La tercera alternativa es CoCl2 relleno, que se tiñe y fija las neuronas, y no requiere de imágenes de fluorescencia. A pesar de que es la mano de obra y el tiempo de obra, este proceso de tinción da un alto contraste y especificidad para los nervios que están llenos. En conjunto, estas técnicas se pueden utilizar para la comparación de diversos órganos chordotonal, no sólo dentro de una extremidad o entre extremidades, sino también entre otras especies de crustáceos e insectos 20-22. Los cangrejos azules (C. sapidus) utilizados en las grabaciones fisiológicas y para la tinción anatómica están disponibles por todas partes de la frontera sur y el sureste de los Estados Unidos. Esta especie sirve como un representante de los arreglos nerviosas chordotonal y tensión se encuentran en la mayoría de los cangrejos. Laboratorios de la costa oeste preferirán utilizar el cangrejo Dungeness mucho más grande (Cancer magister) para estos experimentos.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="686">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sylgard</td>
			<td style="width:184px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:119px;">182 silicone kit</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S7653</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9333</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">C5670</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES acid</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">3375</td>
			<td style="width:167px;">Free acid, crystalline</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HEPES base</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">D-Glucose</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">G7021</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">MgSO4&#8226;7H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">M2643</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Na2SO4&#8226;10H2O</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">246980</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bouin&#8217;s solution fixative</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">HT10-1-32</td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material (Special shipping cost required)</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:216px;">CoCl2</td>
			<td style="width:184px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Caution: Hazardous material. Please follow proper disposal according to local and federal regulations.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Methylene blue chloride</td>
			<td style="width:184px;">Matheson Co., Inc</td>
			<td style="width:119px;">Basic Blue 9, C.I. 52015</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">4-Di-2-ASP</td>
			<td style="width:184px;">Molecular Probes</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">4-(4-diethylaminostyryl)-N-methylpyridinium iodide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bleach</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To chloride silver wire</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaOH</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">221465</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HCl</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H1758</td>
			<td style="width:167px;">To adjust pH</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Materials</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dissecting tools</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">assortment</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Intracellular electrode probe</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Faraday cage</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Insect Pins</td>
			<td style="width:184px;">Fine Science Tools, Inc</td>
			<td style="width:119px;">26001-60</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dissecting microscope (100X)</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Fiber optic lamp</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Small adjustable mirror</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">To direct light beam toward the preparation.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Glass electrodes</td>
			<td style="width:184px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">CLS7095B5X</td>
			<td style="width:167px;">Box of 200, suction electrodes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:184px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:119px;">MD4-M3-R</td>
			<td style="width:167px;">Can fix for base or on a metal rod</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Raised preparation stand</td>
			<td style="width:184px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Silver wire (10/1,000 inch)</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">782500</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Computer</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">AC/DC differential amplifier</td>
			<td style="width:184px;">A-M Systems</td>
			<td style="width:119px;">Model 3000</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PowerLab 26T</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">27T</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Force transducer</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;">0-50g</td>
			<td style="width:167px;">MLTF050/ST</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Head stage</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Comes with AC/DC amplifier</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LabChart7</td>
			<td style="width:184px;">AD Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Electrical leads</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Glass tools</td>
			<td style="width:184px;">Make yourself</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">For manipulating nerves</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cable and connectors</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pipettes with bulbs</td>
			<td style="width:184px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">13-711-7</td>
			<td style="width:167px;">Box of 500</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Beakers</td>
			<td style="width:184px;">Any company</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Wax or modeling clay</td>
			<td style="width:184px;">Any company or local stores</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stimulator</td>
			<td style="width:184px;">Grass Instruments</td>
			<td style="width:119px;">SD9 or S88</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="84" rowspan="2" style="height:84px;width:216px;">Plastic tip for suction electrode</td>
			<td rowspan="2" style="width:184px;">Local hardware store (Watt&#8217;s brand)</td>
			<td rowspan="2" style="width:119px;">&#188; inch OD x 0.170 inch ID</td>
			<td style="width:167px;">Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proprioception and tension receptors in crab limbs: student laboratory exercises

El principal propósito de estos procedimientos es demostrar con fines docentes y de investigación como grabar la actividad de vivir neuronas sensoriales primarias responsables de la propiocepción, ya que son la detección de posición de las articulaciones y el movimiento, y la tensión muscular. La actividad eléctrica de los propioceptores de los crustáceos y los receptores de tensión se registra por la instrumentación neurofisiológica básica, y un transductor se utiliza para medir simultáneamente la fuerza que se genera mediante la estimulación de un nervio motor. Además, demostramos cómo manchar las neuronas para una evaluación rápida de la disposición anatómica o para la fijación permanente. La tinción revela organización anatómica que sea representativo de los órganos chordotonal en la mayoría de los crustáceos. La comparación de las respuestas nerviosas tensión a las respuestas propioceptivas es una herramienta de enseñanza eficaz en la determinación de cómo estas neuronas sensoriales se definen funcionalmente y cómo la anatomía se correlaciona con la función. Tres técnicas de tinciónse presentan permitiendo a los investigadores e instructores para elegir un método que sea ideal para su laboratorio.

Cuando el órgano PD se estira por la completa extensión de la articulación, la actividad en el nervio PD es robusto durante el movimiento como se muestra para la primera segunda en la Figura 10. Algunos actividad permanece mientras que se mantiene todavía en la posición abierta. Esta actividad es de las neuronas sensibles a la posición estática (segundo medio de la grabación se muestra en la Figura 10). Movimiento evoca una respuesta durante el desplazamiento, y la cocción es principalmente presente durante el estiramiento de la cadena chordotonal (Figura 11). Un análisis más detallado de los picos se puede abordar fácilmente por la clasificación de las amplitudes relativas. Este es un enfoque para demostrar las diferentes poblaciones de neuronas sensoriales están contratados para puestos o tipos de movimientos 5. Amplitudes típicas varían desde 0,25 hasta 1,5 mV, pero estos valores son dependientes de la resistencia (es decir, la estanqueidad) de la junta de electrodo de succión. La frecuencia de los picos en tque varios intervalos de tamaño también se puede representar gráficamente para el análisis. Fuerzas generadas por el músculo abridor con respecto a la frecuencia de estimulación se pueden comparar por superposición de los respectivos trazas de tensión-tiempo en la parte superior de cada otra (figuras 13A y B). Esto también se puede realizar para cada posición de la articulación en cada frecuencia de estimulación dada. Actividad del nervio tensión puede entonces ser correlacionada con la cantidad de fuerza relativa generada en cada frecuencia de estimulación, y para cada posición de la articulación. Como en el nervio PD, una variedad de amplitudes de pico se ven en respuesta a la contracción del músculo abridor (Figura 13C). Disposición anatómica de las neuronas en la pierna para caminar se observó claramente con la tinción de azul de metileno (Figura 14). Tenga en cuenta la elasticidad chordotonal hebra y la tensión de la neurona que está cerca de la apodema. Varios cuerpos celulares con diferentes diámetros de und localizaciones específicas también son visibles en esta figura. Todo el curso del nervio tensión y nervio motor camilla se muestra en la Figura 15. Las neuronas individuales del nervio PD se muestran con mayor contraste usando 4-Di-2-ASP (Figura 16) y CoCl2 (Figura 17) relleno técnicas. A mayor aumento de las terminaciones sensoriales se pueden ver en el interior de los scolopales de apoyo (Figuras 16B) 21,22,26. <img alt="Figura 10" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig10.jpg" width="500px" /> Figura 10. Mueva y mantenga a 0 °. Las neuronas dinámicas son robustos en el tiro durante el movimiento y los picos de las neuronas sensibles a la estática están presentes, mientras que la articulación se mantiene abierta. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig10highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande &lt;</a>/ A&gt;. <img alt="Figura 11" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig11.jpg" width="500px" /> Figura 11. Rápido abrir y cerrar de flexión completa a la posición extendida (90-0 º). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig11highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande</a> . <img alt="Figura 12" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig12.jpg" width="500px" /> Figura 12. Extracelulares picos registrados a partir del nervio PD. La articulación está totalmente extendido y luego se trasladó rápidamente a una posición flexionada ½ y luego se quedó quieto. Observe la actividad durante el movimiento y la disminución de la actividad en condiciones estáticas. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig12highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver más grande ima</a>ge. <img alt="Figura 13" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig13.jpg" width="500px" /> Figura 13. Las fuerzas relativas que se desarrollan con la articulación totalmente flexionadas y estimulados en las distintas frecuencias. (A) Voltaje rastros de tiempo desde el transductor de fuerza se muestran con cada frecuencia de estimulación. (B) Las huellas en el panel A se superponen en diferentes colores para facilitar la comparación. (C) en tiempo de tensión rastros de actividad eléctrica registrado desde el nervio tensión cuando el nervio motor se estimuló a 80 Hz. Tenga en cuenta el patrón regular de los artefactos de estímulo en comparación con la actividad neuronal. Además, tenga en cuenta las diferentes amplitudes de las respuestas neuronales. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig13highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande</a> . Figura 14. Metileno mancha azul de la preparación de la pierna para caminar. Somas individuales se muestran con sus terminaciones sensoriales que se proyecta en la hebra elástica. Cerca de la apodema una neurona tensión se muestra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig14highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande</a> . <img alt="Figura 15" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig15.jpg" width="500px" /> Figura 15. El nervio tensión derivada del extremo distal (flechas rojas) y unirse al nervio motor (flecha verde). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig15highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande</a> . Figura 16. (A) Una copia de llenado del nervio PD en Cancer magister con 4-Di-2-ASP. (B) Un mayor aumento de las terminaciones sensoriales. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig16highres.jpg" target="_blank">Haz clic aquí para ver la imagen más grande</a> . <img alt="Figura 17" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51050/51050fig17.jpg" width="500px" /> Figura 17. Las neuronas que estaban llenos de CoCl2 y procesados ​​(A). Contorno trazado de la preparación teñida muestra (B). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51050/51050fig17highres.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver la imagen más grande</a> . <table border="0" cellpadding="0" cellspacing = &quot;0&quot; width = &quot;392&quot;&gt; <colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:235px;"> Salina </td><td style="width:157px;"> g / L </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> NaCl </td><td style="width:157px;"> 27.29 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> KCl </td><td style="width:157px;"> 0.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> MgSO4 • 7H 2 O </td><td style="width:157px;"> 4.81 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> CaCl2 • 2H 2 O </td><td style="width:157px;"> 1.85 </td></tr><tr height="26"><td height="26" style="height:26px;width:235px;"> Na 2 SO 4 • 10H 2 O </td><td style="width:157px;"> 0.97 </td></tr><tr height=&quot;20&quot;&gt; <td height="20" style="height:20px;width:235px;"> La dextrosa (D-glucosa) </td><td style="width:157px;"> 1.982 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> Ácido HEPES </td><td style="width:157px;"> 0.476 </td></tr><tr height="20"><td height="20" style="height:20px;width:235px;"> HEPES sal </td><td style="width:157px;"> 2.08 </td></tr><tr height="40"><td height="40" style="height:40px;width:235px;"> Ajustar el pH a 8,1 con NaOH o HCl </td><td style="width:157px;"></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Recetas para solución salina cangrejo.

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Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs | Biology | Video

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Técnicas fisiológicas y anatómicas se demuestran para abordar la función y la estructura de los propioceptores articulares y los receptores de la tensión muscular en las extremidades para caminar crustáceos.

Propiocepción y la tensión en los receptores de cangrejo Limbs: Ejercicios de Laboratorio Estudiante

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

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25.0K vistas.  University of Kentucky.  Técnicas fisiológicas y anatómicas se demuestran para abordar la función y la estructura de los propioceptores articulares y los receptores de la tensión muscular en las extremidades para caminar crustáceos. 

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Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in rodents have shown a direct link between testosterone and aggressive behavior1 and folk wisdom adapts these findings to humans, suggesting that testosterone induces antisocial, egoistic or even aggressive behavior2. However, many researchers doubt a direct testosterone-aggression link in humans, arguing instead that testosterone is primarily involved in status-related behavior3,4. As a high status can also be achieved by aggressive and antisocial means it can be difficult to distinguish between anti-social and status seeking behavior.
We therefore set up an experimental environment, in which status can only be achieved by prosocial means. In a double-blind and placebo-controlled experiment, we administered a single sublingual dose of 0.5 mg of testosterone (with a hydroxypropyl-&beta;-cyclodextrin carrier) to 121 women and investigated their social interaction behavior in an economic bargaining paradigm. Real monetary incentives are at stake in this paradigm; every player A receives a certain amount of money and has to make an offer to another player B on how to share the money. If B accepts, she gets what was offered and player A keeps the rest. If B refuses the offer, nobody gets anything. A status seeking player A is expected to avoid being rejected by behaving in a prosocial way, i.e. by making higher offers.
The results show that if expectations about the hormone are controlled for, testosterone administration leads to a significant increase in fair bargaining offers compared to placebo. The role of expectations is reflected in the fact that subjects who report that they believe to have received testosterone make lower offers than those who say they believe that they were treated with a placebo. These findings suggest that the experimental economics approach is sensitive for detecting neurobiological effects as subtle as those achieved by administration of hormones. Moreover, the findings point towards the importance of both psychosocial as well as neuroendocrine factors in determining the influence of testosterone on human social behavior.

The procedure described in this protocol shows that testosterone administration and folk beliefs about testosterone may be associated with directly opposed social behaviors.

La combinación del comportamiento de Endocrinología Experimental y Economía: Decisión de la testosterona y sociales que

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

Investigación

Neurociencias

A Procedure for Studying the Footshock-Induced Reinstatement of Cocaine Seeking in Laboratory Rats

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse. Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the neurobiology and phenomenology of relapse to drug use. Although procedural variations have emerged over the past several decades, the most conventional reinstatement procedures are based on the drug self-administration (SA) model. In this model, an animal is trained to perform an operant response to obtain drug. Subsequently, the behavior is extinguished by withholding response-contingent reinforcement. Reinstatement of drug seeking is then triggered by a discrete event, such as an injection of the training drug, re-exposure to drug-associated cues, or exposure to a stressor 1.
Reinstatement procedures were originally developed to study the ability of acute non-contingent exposure to the training drug to reinstate drug seeking in rats and monkeys 1, 2. Reinstatement procedures have since been modified to study the role of environmental stimuli, including drug-associated cues and exposure to various forms of stress, in relapse to drug seeking 1, 3, 4.
Over the past 15 years, a major focus of the reinstatement literature has been on the role of stress in drug relapse. One of the most commonly used forms of stress for studying this relationship is acute exposures to mild, intermittent, electric footshocks. The ability of footshock stress to induce reinstatement of drug seeking was originally demonstrated by Shaham and colleagues (1995) in rats with a history of intravenous heroin SA5. Subsequently, the effect was generalized to rats with histories of intravenous cocaine, methamphetamine, and nicotine SA, as well as oral ethanol SA 3, 6.
Although footshock-induced reinstatement of drug seeking can be achieved reliably and robustly, it is an effect that tends to be sensitive to certain parametrical variables. These include the arrangement of extinction and reinstatement test sessions, the intensity and duration of footshock stress, and the presence of drug-associated cues during extinction and testing for reinstatement. Here we present a protocol for footshock-induced reinstatement of cocaine seeking that we have used with consistent success to study the relationship between stress and cocaine seeking.

Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been used extensively to study the role of stress in relapse to drug seeking. Here, we report on a method for inducing the reinstatement of cocaine seeking in laboratory rats via acute exposures to mild, intermittent electric footshock.

Un procedimiento para el estudio de la reposición de estímulo eléctrico plantar inducido por la cocaína Buscando en ratas de laboratorio

The most insidious aspect of drug addiction is the high propensity for relapse.  Animal models of relapse, known as reinstatement procedures, have been ...

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that influence a cell's membrane potential and which we address in these experiments are: (1) Ion concentration of K+ on the outside of the membrane, and (2) the permeability of the membrane to specific ions. The crayfish abdominal extensor muscles are in groupings with some being tonic (slow) and others phasic (fast) in their biochemical and physiological phenotypes, as well as in their structure; the motor neurons that innervate these muscles are correspondingly different in functional characteristics. We use these muscles as well as the superficial, tonic abdominal flexor muscle to demonstrate properties in synaptic transmission. In addition, we introduce a sensory-CNS-motor neuron-muscle circuit to demonstrate the effect of cuticular sensory stimulation as well as the influence of neuromodulators on certain aspects of the circuit. With the techniques obtained in this exercise, one can begin to answer many questions remaining in other experimental preparations as well as in physiological applications related to medicine and health. We have demonstrated the usefulness of model invertebrate preparations to address fundamental questions pertinent to all animals.

The experiments demonstrate an easy approach for students to gain experience in examining muscle structure, synaptic responses, the effects of ion gradients and permeability on membrane potentials. Also, a sensory-CNS-motor-muscle circuit is presented to show a means to test effects of compounds on a neuronal circuit.

Los potenciales de membrana, las respuestas sinápticas, circuitos neuronales, neuromodulación y la histología muscular utilizando el cangrejo de río: Los ejercicios de laboratorio para estudiantes

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Muscle Receptor Organs in the Crayfish Abdomen: A Student Laboratory Exercise in Proprioception

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this experiment is to learn anatomy of the preparation by staining, dissection and viewing of neurons and sensory structures under a dissecting microscope. This is performed by using basic neurophysiological equipment to record the electrical activity from a joint receptor organ and staining techniques. The muscle receptor organ (MRO) system in the crayfish is analogous to the intrafusal muscle spindle in mammals, which aids in serving as a comparative model that is more readily accessible for electrophysiological recordings. In addition, these are identifiable sensory neurons among preparations. The preparation is viable in a minimal saline for hours which is amenable for student laboratory exercises. The MRO is also susceptible to neuromodulation which encourages intriguing questions in the sites of modulatory action and integration of dynamic signals of movements and static position along with a gain that can be changed in the system.

The primary purpose of this experiment is to understand how primary sensory neurons convey information of joint movements and positions as proprioceptive information for an animal. An additional objective of this report is present the anatomy of the preparation by dissection and viewing of neurons under a dissecting microscope.

Los órganos receptores de los músculos en el abdomen del cangrejo de río: Un ejercicio de laboratorio los estudiantes en la propiocepción

The primary purpose of this experiment is to demonstrate primary sensory neurons conveying information of joint movements and positions as proprioceptive ...

Physiological Experimentation with the Crayfish Hindgut: A Student Laboratory Exercise

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings with a force transducer to monitor the strength of contraction. In addition, we demonstrate how to visually monitor peristaltic activity, which can be used as a bioassay for various peptides, biogenic amines and neurotransmitters. This preparation is amenable to student laboratories in physiology and for demonstrating pharmacological concepts to students. This preparation has been in use for over 100 years, and it still offers much as a model for investigating the generation and regulation of peristaltic rhythms and for describing the mechanisms underlying their modulation. The pharmacological assays and receptor sub-typing that were started over 50 years ago on the hindgut still contribute to research today. This robust preparation is well suited to training students in physiology and pharmacology.

In this report we demonstrate techniques that can be used to investigate the biology of the crayfish hindgut. We show how to dissect a crayfish abdomen and study the associated anatomy, physiology and modulation of activity. The peristaltic activity and strength of contractions are measured using a force transducer.

La experimentación fisiológica con el intestino grueso cangrejo de río: Un ejercicio de laboratorio los estudiantes

The purpose of the report is to describe dissection techniques for preparing the crayfish hindgut and to demonstrate how to make physiological recordings ...

Assaying Surface Expression of Chemosensory Receptors in Heterologous Cells

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors (GPCRs) 1 that are postulated to bind volatile odorant molecules and converting the extracellular signal into an intracellular signal by coupling with G protein G&alpha;olf. Binding of the odorants to the receptors is thought to follow a combinatorial rule, that is, one odorant may bind several receptors and one receptor may bind several odorants to varying degrees 2. Biochemical, signaling and ligand binding studies have been conveniently carried out for most GPCRs using heterologous cells. However use of heterologous cells for study of odorant receptors, was precluded for a long time since on transfection they failed to export to the surface. Saito et al have demonstrated single membrane pass Receptor Transporting Protein (RTP) family chaperones show enhanced expression in the olfactory sensory neurons and act as chaperones to traffic odorant receptors to the surface in heterologous cells, when co transfected together 3. To carry out biochemical assays for receptors using heterologous cells, one must first determine if the receptor shows robust surface expression in the cell line. This can be assayed by overexpressing the receptors with the chaperone RTP1S followed by live cell staining to fluorescently label the extracellular domain or a tag in the extracellular domain exclusively. Here we demonstrate a protocol to carry out live cell staining that can be used to detect odorant receptors on the surface of HEK293T cells conveniently. In addition, it may also be used to assay for surface expression of other chemosensory receptors or GPCRs.

Here we demonstrate a protocol to carry out live cell staining that can be used to detect odorant receptors on the surface of HEK293T cells conveniently. In addition, it may also be used to assay for surface expression of other chemosensory receptors or GPCRs.

Analizando la expresión de superficie de los receptores Quimiosensoriales en células heterólogas

The vivid world of odors is recognized by the sense of olfaction. Olfaction in mice is mediated by a repertoire of about 1200 G Protein Coupled Receptors ...

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous activity of participating neurons leads to the emergence of the integral functionality of the network. Here we present the methodology of application of this technique to identified pattern generating neurons in the crab stomatogastric ganglion. We demonstrate the loading of these neurons with the fluorescent voltage-sensitive dye Di-8-ANEPPQ and we show how to image the activity of dye loaded neurons using the MiCAM02 high speed and high resolution CCD camera imaging system. We demonstrate the analysis of the recorded imaging data using the BVAna imaging software associated with the MiCAM02 imaging system. The simultaneous voltage-sensitive dye imaging of the detailed activity of multiple neurons in the crab stomatogastric ganglion applied together with traditional electrophysiology techniques (intracellular and extracellular recordings) opens radically new opportunities for the understanding of how central pattern generator neural networks work.

Here we present the methodology for fast and high resolution fluorescent voltage-sensitive dye imaging of detailed activity of neurons in the crab stomatogastric ganglion.

Imagen óptica de neuronas en el ganglio Cangrejo Stomatogastric con tintes sensibles al voltaje

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous ...

Use of pHluorin to Assess the Dynamics of Axon Guidance Receptors in Cell Culture and in the Chick Embryo

During development, axon guidance receptors play a crucial role in regulating axons sensitivity to both attractive and repulsive cues. Indeed, activation of the guidance receptors is the first step of the signaling mechanisms allowing axon tips, the growth cones, to respond to the ligands. As such, the modulation of their availability at the cell surface is one of the mechanisms that participate in setting the growth cone sensitivity. We describe here a method to precisely visualize the spatio-temporal cell surface dynamics of an axon guidance receptor both in vitro and in vivo in the developing chick spinal cord. We took advantage of the pH-dependent fluorescence property of a green fluorescent protein (GFP) variant to specifically detect the fraction of the axon guidance receptor that is addressed to the plasma membrane. We first describe the in vitro validation of such pH-dependent constructs and we further detail their use in vivo, in the chick spinal chord, to assess the spatio-temporal dynamics of the axon guidance receptor of interest.

We describe here the use of a pH-sensitive green fluorescent protein variant, pHluorin, to study the spatio-temporal dynamics of axon guidance receptors trafficking at the cell surface.&#160;The pHluorin-tagged receptor is expressed both in cell culture and in vivo, using electroporation of the chick embryo.

Uso De pHluorin Para Evaluar La Dinámica De Los Receptores De Orientación Axón En El Cultivo Celular Y En El Embrión De Polluelo

During development, axon guidance receptors play a crucial role in regulating axons sensitivity to both attractive and repulsive cues. Indeed, activation ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be stimulated by neuronally-released transmitter. However, the ability of astrocytic receptors to exhibit plasticity in response to changes in neuronal activity has received little attention. Here we describe a model system that can be used to globally scale up or down astrocytic group I metabotropic glutamate receptors (mGluRs) in acute brain slices. Included are methods on how to prepare parasagittal hippocampal slices, construct chambers suitable for long-term slice incubation, bidirectionally manipulate neuronal action potential frequency, load astrocytes and astrocyte processes with fluorescent Ca2+ indicator, and measure changes in astrocytic Gq GPCR activity by recording spontaneous and evoked astrocyte Ca2+ events using confocal microscopy. In essence, a &#8220;calcium roadmap&#8221; is provided for how to measure plasticity of astrocytic Gq GPCRs. Applications of the technique for study of astrocytes are discussed. Having an understanding of how astrocytic receptor signaling is affected by changes in neuronal activity has important implications for both normal synaptic function as well as processes underlying neurological disorders and neurodegenerative disease.

Here we describe an adaptation of protocols used to induce homeostatic plasticity in neurons for the study of plasticity of astrocytic G protein-coupled receptors. Recently used to examine changes in astrocytic group I mGluRs in juvenile mice, the method can be applied to measure scaling of various astrocytic GPCRs, in tissue from adult mice in situ and in vivo, and to gain a better appreciation of the sensitivity of astrocytic receptors to changes in neuronal activity.

La inducción de la plasticidad de astrocítico Receptores por manipulación de Neuronales cocción Precios

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Receptor Autoradiography Protocol for the Localized Visualization of Angiotensin II Receptors

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to perform receptor autoradiographic mapping.
Tissue specimens are harvested and stored at -80 &#176;C. A cryostat is used to coronally section the tissue (brain) and thaw-mount the sections onto charged slides. The slide-mounted tissue sections are incubated in 125I-SI-Ang II to radiolabel Ang II receptors. Adjacent slides are separated into two sets: &#39;non-specific binding&#39; (NSP) in the presence of a receptor saturating concentration of non-radiolabeled Ang II, or an AT1 Ang II receptor subtype (AT1R) selective Ang II receptor antagonist, and &#39;total binding&#39; with no AT1R antagonist. A saturating concentration of AT2 Ang II receptor subtype (AT2R) antagonist (PD123319, 10 &#181;M) is also present in the incubation buffer to limit 125I-SI-Ang II binding to the AT1R subtype. During a 30 min pre-incubation at ~22 &#176;C, NSP slides are exposed to 10 &#181;M PD123319 and losartan, while &#39;total binding&#39; slides are exposed to 10 &#181;M PD123319. Slides are then incubated with 125I-SI-Ang II in the presence of PD123319 for &#39;total binding&#39;, and PD123319 and losartan for NSP in assay buffer, followed by several &#39;washes&#39; in buffer, and water to remove salt and non-specifically bound radioligand. The slides are dried using blow-dryers, then exposed to autoradiography film using a specialized film and cassette. The film is developed and the images are scanned into a computer for visual and quantitative densitometry using a proprietary imaging system and a spreadsheet. An additional set of slides are thionin-stained for histological comparisons.
The advantage of using receptor autoradiography is the ability to visualize Ang II receptors in situ, within a section of a tissue specimen, and anatomically identify the region of the tissue by comparing it to an adjacent histological reference section.

Here we present a protocol to describe the localization of angiotensin II Type 1 receptors in the rat brain by quantitative, densitometric, in vitro receptor autoradiography using an iodine-125 labeled analog of angiotensin II.

Protocolo La autorradiografía de receptores para la visualización localizada de Receptores de la Angiotensina II

This protocol describes receptor binding patterns for Angiotensin II (Ang II) in the rat brain using a radioligand specific for Ang II receptors to ...