Este trabajo fue financiado por el Consejo Sueco de Investigación, Universidad de Uppsala y Fredrik y Ingrid Thurings Fundación. ZJ celebró una beca postdoctoral de EXODIAB y Svenska för Sällskapet Medicinsk Forskning. Damos las gracias a Frank Lee para la asistencia técnica.

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	<li>Pavlov, I., Savtchenko, L. P., Kullmann, D. M., Semyanov, A., Walker, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outwardly+rectifying+tonically+active+GABAA+receptors+in+pyramidal+cells+modulate+neuronal+offset,+not+gain.">Outwardly rectifying tonically active GABAA receptors in pyramidal cells modulate neuronal offset, not gain.</a> J Neurosci. 29, 15341-15350 (2009).</li><li>Chao, H. T., Chen, H., Samaco, R. C., Xue, M., Chahrour, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+in+GABA+signalling+mediates+autism-like+stereotypies+and+Rett+syndrome+phenotypes.">Dysfunction in GABA signalling mediates autism-like stereotypies and Rett syndrome phenotypes.</a> Nature. 468, 263-269 (2010).</li><li>Clarkson, A. N., Huang, B. S., Macisaac, S. E., Mody, I., Carmichael, S. 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P., Birnir, B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+GABA(A)+channel+conductance+increased+by+diazepam.">Hippocampal GABA(A) channel conductance increased by diazepam.</a> Nature. 388, 71-75 (1997).</li><li>Lindquist, C. E., Birnir, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+response+to+GABA+by+native+extrasynaptic+GABA+receptors.">Graded response to GABA by native extrasynaptic GABA receptors.</a> J Neurochem. 97, 1349-1356 (2006).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Cox, G. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABA+concentration+sets+the+conductance+of+delayed+GABAA+channels+in+outside-out+patches+from+rat+hippocampal+neurons.">GABA concentration sets the conductance of delayed GABAA channels in outside-out patches from rat hippocampal neurons.</a> J Membr Biol. 181, 171-183 (2001).</li><li>Birnir, B., Eghbali, M., Everitt, A. B., Gage, P. W. B. i. c. u. c. u. l. l. i. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pentobarbital+and+diazepam+modulate+spontaneous+GABA(A)+channels+in+rat+hippocampal+neurons.">pentobarbital and diazepam modulate spontaneous GABA(A) channels in rat hippocampal neurons.</a> Br J Pharmacol. 131, 695-704 (2000).</li><li>Birnir, B., Everitt, A. B., Gage, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+GABAA+channels+in+rat+dentate+gyrus.">Characteristics of GABAA channels in rat dentate gyrus.</a> J Membr Biol. 142, 93-102 (1994).</li></ol>

La corriente de célula entera representa el conjunto de las corrientes generadas por los canales activos en la célula. La farmacología específica y la permeabilidad de los canales de cloruro de GABAA permite identificar las corrientes asociadas a estos canales. La naturaleza transitoria de activación de los canales sinápticos y la activación tónica de los canales de extrasinápticos permite diferenciar fácilmente entre estas dos poblaciones de los canales GABAA expresado en una neurona. Sin embargo, sólo con un solo canal de grabaciones se puede estudiar las propiedades cinéticas de las moléculas de los canales que generan las corrientes tónico. A diferencia de los canales sinápticos que se activan a menos de 100 ms, los canales GABAA tónica se activan con una latencia en el rango de minutos desde el momento GABA se aplica 4,7,15,16,17,18. Esta activación retardada de los resultados de los canales en que las propiedades de los canales que muchos no pueden ser estudiados usando células enteras grabaciones. En el ámbito de un solo canal de los diferentes sub-poblaciones de los canales GABAA pueden ser identificados en base a diferentes propiedades funcionales y farmacológicas. Por lo tanto, tomando una ventaja de lo que las diferentes configuraciones de patch-clamp tienen que ofrecer, es posible estudiar en detalle la función molecular y la farmacología de los canales activados por GABA que generan las corrientes tónico y sináptica de las neuronas.

Varios de patch-clamp sistemas hardware y software están disponibles y todos ellos funcionan con los mismos principios básicos. En nuestro laboratorio utilizamos los amplificadores Axoclamp y el software pCLAMP (Molecular Devices, EE.UU.) para registrar y analizar los experimentos. Otra marca popular es HEKA amplificadores y software (HEKA Elektronik, Alemania) Microforge: Narishige MF-830 (Japón); Vibrotome: por ejemplo, Leica VT1200S (Alemania) o Campden Instrumentos vibrotome (Reino Unido); microscopio: Nikon Eclipse E600FN, Baño de agua; Micromanipuladores: hecho a medida y micromanipuladores Narishige (Japón); Extractor: DMZ- universal (Alemania) o Narishige PC-10 (Japón). Electrodo de vidrio: GC150F-15 (Harvard Apparatus, Reino Unido).

gaba-activated single-channel and tonic currents in rat brain slices

El GABA A los canales están presentes en todas las neuronas y se encuentran tanto en las sinapsis y fuera de la sinapsis donde se generan las corrientes fásica y tónica, respectivamente 4,5,6,7 El GABA Un canal es un pentamérica GABA-gated canal de cloro. Las subunidades de los canales se agrupan en 8 familias (α1-6, β1-3, γ1-3, δ, ε, θ, π y ρ). Dos alfas, betas dos y tres subunidades ª formar el canal funcional 8. Mediante la combinación de estudios de la sub-tipo específico GABA activado por un solo canal con las moléculas de estudios con todas las poblaciones de GABA A los canales en la neurona es posible entender el mecanismo básico de la inhibición neuronal y cómo se modula por agentes farmacológicos. Utilizamos la técnica de patch-clamp 9,10 para estudiar las propiedades funcionales de los canales GABA en las neuronas vivas en rodajas de hipocampo del cerebro y el registro de un solo canal y las corrientes de células enteras. Hemos de seguir examinando la forma de los canales se ven afectados por diferentes concentraciones de GABA, otras drogas y los factores intra y extracelulares. Para una descripción detallada teórica y práctica del método de patch-clamp consulte la de un canal de grabaciones editadas por Sakman B y E Neher 10.

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GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

Utilizamos la técnica de patch-clamp para medir GABA-activa de un solo canal corrientes (GABAA canales, los receptores GABA A) y las corrientes sinápticas y tónico que generan en las neuronas. La activación de los canales disminuye la excitabilidad neuronal en la salud y la enfermedad<sup&gt; 1,2,3,4</sup&gt;.

GABA corrientes activadas de un solo canal y Tonic en rodajas de cerebro de rata

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

25.0K vistas.  Uppsala University, Sweden. Utilizamos la técnica de patch-clamp para medir GABA-activa de un solo canal corrientes (GABAA canales, los receptores GABA A) y las corrientes sinápticas y tónico que generan en las neuronas. La activación de los canales disminuye la excitabilidad neuronal en la salud y la enfermedad 1,2,3,4.