NIH concede R01 HL085369, HL067322, HL082729, EB008999

1. Preparación <ol><li> Prepare una solución fresca Tyrodes hecho &quot;(en mM, NaCl 128,2, 1,3 CaCl 2, 4,7 KCl, 1,19 NaH 2 PO 4, 1,05 MgCl 2, 20,0 NaHCO3, y la glucosa 11.1). Para acelerar la preparación diaria de soluciones, preparar dos soluciones madre de antelación y almacenarlas a 4 ° C refrigerador: (1) archivo I (en g/2L, 374.6 NaCl, CaCl2 9,56, 17,52 KCl, 8,21 NaH 2 PO 4 , 10,67 MgCl 2) y (2) Foto II (en g/2L, 84,01 NaHCO 3). Para hacer 2 litros de solución suficiente para un experimento de tomar Tyrodes &#39;1840mL de agua destilada y mezclar en ella 80 ml de archivo I, 80 ml de archivo II, y 4 g de glucosa. </li><li> Preparar soluciones madre de colorantes y desacopladores de: (1) de excitación-contracción blebbistatin desacoplador solución madre (Tocris Bioscience solución, 2mg/ml en DMSO), (2) sensibles al voltaje tinte di-4-ANEPPS solución (Invitrogen, 1mg/ml solución en DMSO), (3) sensibles al voltaje tinte RH 237 de la solución madre (Invitrogen, solución 1.25mg/ml en DMSO), (4) Indicador de calcio Rhod-2AM solución (Invitrogen, la solución de 1mg/ml en DMSO). Un experimento de conejo solo requiere de aproximadamente 30 l de la solución di-4-ANEPPS, 30 l de la solución madre RH237, y 200 l de la Rhod-2AM solución madre. Para evitar la congelación y descongelación repetida, almacenamos alícuotas de 100 l de di-4-ANEPPS a -20 ° C. Otros colorantes también se almacenan a -20 ° C. Guarde el blebbistatin disuelto en +4 º C refrigerador. </li><li> Antes de la cosecha del corazón, la solución de Tyrodes transferencia &quot;en la botella de 2 litros y colocarlo en un baño de agua (Fisher Scientific) que mantiene la temperatura de la solución a 37 ° C. La solución es oxigenada con un 95% O 2 - 5% de CO 2. El pH se mantiene en 7,35 ± 0,05 ajustando el nivel de oxigenación. La solución se distribuye en el sistema de perfusión Langendorff y se filtra por un filtro de red de nylon (de tamaño de poro: 11μm, Millipore) colocado en la línea de perfusión antes de la cánula. </li><li> Preparar el equipo de supervisión antes de la cosecha del corazón. Un transductor de presión (IPM) se utiliza para controlar la presión aórtica durante el experimento. Línea de base del transductor de presión se ajusta a cero mmHg cuando el corazón no está conectado al sistema de perfusión. Pseudo-ECG se colocan electrodos en la cámara para dirigir aproximada I, II y III de la ECG Einthoven triángulo. </li></ol> 2. La cosecha y la perfusión de los corazones de conejo <ol><li> Fijar el conejo en la inmovilización de conejo. Sacrificar al conejo por una inyección intravenosa de pentobarbital sódico (50 mg / kg), con 2.000 U de heparina. Cuando el conejo está totalmente liquidado, el cual está determinado por la falta de reflejo de dolor, de la cavidad torácica se abrió rápidamente y el corazón y los pulmones extirpados se. </li><li> Haga un corte en el extremo superior de la aorta ascendente antes de todas las ramas del cayado aórtico. Expulsar el aire de la aorta ascendente y luego rápidamente canular el corazón de una cánula de calibre 16, que previamente ha sido conectado a un cazador de burbujas que es muy importante para mantener el aire fuera de las coronarias. Una vez que el corazón es retrógrada perfusión en un sistema de perfusión no recirculante Langendorff, hacer un corte para abrir el pericardio rápidamente. </li><li> Extirpar el pulmón, la tráquea, la grasa y los tejidos conectivos, mientras que la sangre se limpia por la perfusión. </li><li> ¡Muy importante! Un tubo de silicona (~ 3 cm de largo y 2 mm de diámetro) se inserta a través de una vena pulmonar y la válvula mitral hacia el ventrículo izquierdo (LV) y se mantiene durante todo el experimento. Este tubo se libera la solución que se encuentra atrapado en el VI. Sin circulación durante horas durante el experimento Langedorff-perfusión en un corazón mecánico inmovilizado, que puede causar isquemia severa en la cavidad del ventrículo izquierdo y producir arritmia. </li><li> Mover el corazón de la cánula a la recirculación de Langendorff sistema de perfusión con el aparato de mapeo óptico. </li></ol> 3. La realización de experimentos con el sistema de mapeo óptico panorámico <ol><li> Coloque el corazón en una cámara de hexágono a medida y conectar la cánula para el sistema de perfusión. Mantener la presión aórtica a 60 ± 5 mmHg, ajustando el caudal de la bomba de perfusión. Monitor de la derivación I pseudo-ECG. Mantener el pH a alrededor de 7,35 ± 0,05. </li><li> Apagar la luz de la habitación, porque es blebbistatin photoinactivated finales UV y baja (450 a 490 nm) 17 de la parte visible del espectro. Inyecte lentamente la solución madre blebbistatin a través del puerto de inyección en el cazador de burbujas de aire situado por encima de la cánula. Inyecte lentamente 0,1 ml por cada blebbistatin inyección en bolo. Espere a que la presión se estabilice antes de la próxima inyección. </li><li> Coloque con cuidado el electrodo de estimulación en el lugar específico de su diseño experimental. </li><li> Enfoque la imagen del corazón en el vidrio esmerilado situada en el plano de la imagen de cada matriz de fotodiodos (PDA) de tresespaciados uniformemente los ángulos que rodea el corazón. Ajustar la posición de la cánula y las distancias entre cada PDA y el corazón para que se ajuste el corazón en el campo de visión de los tres PDAs. Tome una fotografía de cada imagen que se enfoca en el cristal esmerilado. </li><li> Inyecte lentamente 10 ~ 20μL di-4-ANEPPS solución de reserva a través del puerto de inyección en la trampa de la burbuja de aire en la solución de perfusión. Espere 1 a 3 minutos antes de las grabaciones ópticas. </li><li> Para la primera grabación, a su vez la luz LED verde (sin filtro de excitación, INUNDACIONES LED, Lumileds), coge las grabaciones ópticas simultáneamente tres PDAs conectados con el sistema de adquisición de datos a medida, 5 y apagar la luz del LED. Comprobar la calidad de las señales de píxeles diferentes de los tres PDAs. Añadir 0,1 ~ 0,2 ml de solución madre blebbistatin si los artefactos de movimiento en el potencial de acción óptico se notan. Añadir otros 5 l di-4-ANEPPS solución de reserva si la señal-a-ruido es baja. </li><li> Finalizar el protocolo diseñado experimental para el estudio funcional. Re-mancha el corazón con una solución de almacenamiento adicional 5μL di-4-ANEPPS si la señal se deteriora durante los experimentos, debido a photobleaching o lavado. </li><li> Encienda la luz de la habitación después de la finalización del estudio funcional. Tomar imágenes del corazón de 36 ángulos iguales de tiempo. Esto se logra mediante la rotación del corazón a un paso de 10 ° con una cámara digital fija en el lugar de un PDA. </li><li> Quitaré el corazón de la cámara. Drenaje de todas las soluciones. Lave el sistema de perfusión en la secuencia de DI de agua, alcohol al 70% del reactivo, y de nuevo con agua DI. </li><li> El análisis de datos incluye la reconstrucción de la geometría del corazón de las 36 fotografías digitales, el registro de la señal óptica en la superficie de la geometría reconstruido, y la cuantificación de la duración del potencial de acción (APD), la velocidad de conducción (CV), fase, etc 6 </li></ol> 4. La realización de experimentos con el sistema de mapeo de doble <ol><li> (Continúa después de la parte 2) Coloque el corazón canulado en una cámara de vidrio (Radnoti) y conectar la cánula para el sistema de perfusión. Precisar el corazón de la parte inferior de silicio de la cámara en la punta del ventrículo y la aurícula. </li><li> Apagar la luz de la habitación. Inyecte lentamente la solución madre blebbistatin (15 ~ 20 minutos para llegar a 10μM) a través del puerto de inyección antes de la cánula de perfusión para inmovilizar el corazón. </li><li> Poner una placa Petri de plástico, o de las demás ventanas de vidrio, por encima de la superficie epicárdica para reducir el movimiento de la superficie de la solución. </li><li> Centra en dos cámaras CMOS en el sistema de mapeo dual (Ultima-L, SciMedia) en el mismo campo de visión. Fluorescencia emitida es separada por un espejo dicroico (635 de corte, Omega óptico), y filtrada por un filtro de 700 nm de paso largo (Thorlabs) para señales de tensión y por un 590/30 nm de paso de banda del filtro (Omega Optical) para las señales de calcio. </li><li> El objetivo de la guía a la luz de dos lámparas halógenas (Newport Oriel Instruments, Stratford, CT; SciMedia, Costa Mesa, CA) hacia el campo de la cartografía de vista para lograr una iluminación uniforme. Filtros de excitación (531/40 nm, SemRock) se utilizan. </li><li> Mancha el corazón con la solución de tinte sensible a la tensión de valores RH 237 (10 ~ 30 l) a través del puerto de inyección. </li><li> Mezclar la Rhod-2AM (0,2 ml) de solución madre con Pluronic F-127 (Invitrogen, una mezcla 1:1). Sonicar durante 1 minuto en un baño de ultrasonidos en baño María. Se inyecta la mezcla a través del puerto del trampero burbuja. Espere unos 20 minutos para permitir que el de-esterificación de los Rhod-02 a.m. antes de que comience la cartografía. </li><li> Para una grabación, apagar la bomba de superfusión para evitar el movimiento en la superficie de la solución, a su vez de la fuente de luz de excitación (las lámparas halógenas); tener grabaciones óptica utilizando dos cámaras conectadas al sistema de adquisición de datos (Ultima-L, SciMedia) , apague la luz de excitación, y encender la bomba de superfusión. Comprobar la calidad de las señales ópticas. Re-mancha el tejido si es necesario. </li><li> Terminar el resto del protocolo experimental diseñado para un estudio. </li><li> Encienda la luz de la habitación y tomar una fotografía del corazón que contiene el campo de visión. Quitaré el corazón de la cámara. Drenaje de todas las soluciones. Lave el sistema de perfusión en la secuencia de DI de agua, 70% de alcohol reactivo (Fisher Scientific), y el agua DI. </li><li> El análisis de datos contiene las medidas de APD, CV, la duración de calcio transitorios (CATD), la demora entre AP y el aumento del movimiento hacia arriba CAT, el tiempo de subida del calcio transitorio, y la constante de tiempo de un ajuste monoexponencial de la decadencia del gato. </li></ol> Los resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/3160/3160fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Los resultados representativos de un experimento de conejo Langendorff perfundidos mediante el sistema de cartografía óptica panorámica. (A) La opinión anterior del corazón de conejo y de la geometría del corazón de conejo reconstruido en la forma de una malla tridimensional de la red de superficie. (B) Tdesenvolvió superficie epicárdica con código de color de la fase (que se obtiene a partir del análisis del plano fase 18) indica el frente de onda en rojo durante un episodio de taquiarritmia. (C) Las grabaciones de la acción óptica potencial de cinco lugares alrededor de la singularidad de fase marcada por 1-5 en el panel B. (D) Ocho fotografías de frente de onda de activación (color rojo) durante un ciclo de propagación de una arritmia reentrante estable. Los círculos de frente de onda de las agujas del reloj alrededor de una singularidad de fase, que es visible en la superficie anterior del corazón. El color de la repolarización (azul) está dispuesto a ser parcialmente transparente para que el frente de onda posterior es visible (por ejemplo, a 80 ms, 100 ms, y 120 ms). Una película de esta arritmia reentrante se presenta en el video complementario 1. Los métodos para la reconstrucción de la geometría, el registro de la señal, el cálculo del mapa de fase, y se desenvuelve la superficie se describen en detalle en otra parte 6. <img src="/files/ftp_upload/3160/3160fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Los resultados representativos de un experimento de conejo Langendorff perfundidos corazón mediante el sistema de mapeo dual (mapeo simultáneo de potencial de acción y el calcio transitorio). (A) La superficie anterior del corazón con el campo de la cartografía de vista cubiertos por los puntos negro. (B) Un primer plano de las grabaciones de un sitio. (C) muestra las huellas del potencial de acción (azul) y el calcio transitorio (rojo) de una serie de puntos espaciados uniformemente marcada por los puntos negro en el panel de A. Nótese que no todas las grabaciones de píxeles se muestran y la resolución espacial es de 200μm.

<ol>
	<li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+heart.">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95, 21-33 (2004).</li><li>Panfilov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+heart+size+a+factor+in+ventricular+fibrillation?+Or+how+close+are+rabbit+and+human+hearts?.">Is heart size a factor in ventricular fibrillation? Or how close are rabbit and human hearts?.</a> Heart Rhythm. 3, 862-864 (2006).</li><li>Maier, L. S., Bers, D. M., Pieske, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Ca(2+)-handling+and+sarcoplasmic+reticulum+Ca(2+)-content+in+isolated+rat+and+rabbit+myocardium.">Differences in Ca(2+)-handling and sarcoplasmic reticulum Ca(2+)-content in isolated rat and rabbit myocardium.</a> J Mol Cell Cardiol. 32, 2249-2258 (2000).</li><li>Bray, M. A., Lin, S. F., Wikswo, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+surface+reconstruction+and+fluorescent+visualization+of+cardiac+activation.">Three-dimensional surface reconstruction and fluorescent visualization of cardiac activation.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 47, 1382-1391 (2000).</li><li>Qu, F., Ripplinger, C. M., Nikolski, V. P., Grimm, C., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+panoramic+imaging+of+cardiac+arrhythmias+in+rabbit+heart.">Three-dimensional panoramic imaging of cardiac arrhythmias in rabbit heart.</a> J Biomed Opt. 12, 044019-044019 (2007).</li><li>Lou, Q., Ripplinger, C. M., Bayly, P. V., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+panoramic+imaging+of+epicardial+electrical+activity.">Quantitative panoramic imaging of epicardial electrical activity.</a> Ann Biomed Eng. 36, 1649-1658 (2008).</li><li>Kay, M. W., Amison, P. M., Rogers, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+surface+reconstruction+and+panoramic+optical+mapping+of+large+hearts.">Three-dimensional surface reconstruction and panoramic optical mapping of large hearts.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51, 1219-1229 (2004).</li><li>Li, W., Ripplinger, C. M., Lou, Q., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+monophasic+shocks+improve+electrotherapy+of+ventricular+tachycardia+in+a+rabbit+model+of+chronic+infarction.">Multiple monophasic shocks improve electrotherapy of ventricular tachycardia in a rabbit model of chronic infarction.</a> Heart Rhythm. 6, 1020-1027 (2009).</li><li>Ripplinger, C. M., Lou, Q., Li, W., Hadley, J., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Panoramic+imaging+reveals+basic+mechanisms+of+induction+and+termination+of+ventricular+tachycardia+in+rabbit+heart+with+chronic+infarction:+implications+for+low-voltage+cardioversion.">Panoramic imaging reveals basic mechanisms of induction and termination of ventricular tachycardia in rabbit heart with chronic infarction: implications for low-voltage cardioversion.</a> Heart Rhythm. 6, 87-97 (2009).</li><li>Efimov, I. R., Rendt, J. M., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+maps+of+intracellular+[Ca2+]i+transients+and+action-potentials+from+the+surface+of+perfused+guinea-pig+hearts+(abstract).">Optical maps of intracellular [Ca2+]i transients and action-potentials from the surface of perfused guinea-pig hearts (abstract).</a> Circulation. 90, 632-632 (1994).</li><li>Choi, B. R., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+maps+of+optical+action+potentials+and+calcium+transients+in+guinea-pig+hearts:+mechanisms+underlying+concordant+alternans.">Simultaneous maps of optical action potentials and calcium transients in guinea-pig hearts: mechanisms underlying concordant alternans.</a> J Physiol. 529, 171-188 (2000).</li><li>Fast, V. G., Ideker, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+optical+mapping+of+transmembrane+potential+and+intracellular+calcium+in+myocyte+cultures.">Simultaneous optical mapping of transmembrane potential and intracellular calcium in myocyte cultures.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 11, 547-556 (2000).</li><li>Laurita, K. R., Singal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+action+potentials+and+calcium+transients+simultaneously+from+the+intact+heart.">Mapping action potentials and calcium transients simultaneously from the intact heart.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 280, 2053-2060 (2001).</li><li>Choi, B. R., Burton, F., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytosolic+Ca2++triggers+early+afterdepolarizations+and+Torsade+de+Pointes+in+rabbit+hearts+with+type+2+long+QT+syndrome.">Cytosolic Ca2+ triggers early afterdepolarizations and Torsade de Pointes in rabbit hearts with type 2 long QT syndrome.</a> J Physiol. 543, 615-631 (2002).</li><li>Hwang, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+and+vulnerability+to+fibrillation+and+defibrillation+in+Langendorff-perfused+rabbit+ventricles.">Intracellular calcium and vulnerability to fibrillation and defibrillation in Langendorff-perfused rabbit ventricles.</a> Circulation. 114, 2595-2603 (2006).</li><li>Lou, Q., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+susceptibility+to+alternans+in+a+rabbit+model+of+chronic+myocardial+infarction.">Enhanced susceptibility to alternans in a rabbit model of chronic myocardial infarction.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 4527-4530 (2009).</li><li>Kolega, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phototoxicity+and+photoinactivation+of+blebbistatin+in+UV+and+visible+light.">Phototoxicity and photoinactivation of blebbistatin in UV and visible light.</a> Biochem Biophys Res Commun. 320, 1020-1025 (2004).</li><li>Bray, M. A., Wikswo, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+phase+plane+analysis+for+nonstationary+reentrant+cardiac+behavior.">Considerations in phase plane analysis for nonstationary reentrant cardiac behavior.</a> Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys. 65, 051902-05 (2002).</li><li>Fast, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recording+action+potentials+using+voltage-sensitive+dyes.">Recording action potentials using voltage-sensitive dyes.</a> Practical methods in cardiovascular research. , 233-255 (2005).</li><li>Knisley, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmembrane+voltage+changes+during+unipolar+stimulation+of+rabbit+ventricle.">Transmembrane voltage changes during unipolar stimulation of rabbit ventricle.</a> Circ Res. 77, 1229-1239 (1995).</li><li>Bishop, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+photon+scattering+in+optical+signal+distortion+during+arrhythmia+and+defibrillation.">The role of photon scattering in optical signal distortion during arrhythmia and defibrillation.</a> Biophys J. 93, 3714-3726 (2007).</li><li>Efimov, I. R., Fedorov, V. V., Joung, B., Lin, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+cardiac+pacemaker+circuits:+methodological+puzzles+of+the+sinoatrial+node+optical+mapping.">Mapping cardiac pacemaker circuits: methodological puzzles of the sinoatrial node optical mapping.</a> Circ Res. 106, 255-271 (2010).</li><li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts.">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4, 619-626 (2007).</li></ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Basándonos en nuestra experiencia, las claves para el éxito de Langendorff perfundidos experimento corazón de conejo son una solución bien preparada Tyrodes, cosecha rápida del corazón, en buen estado la presión de perfusión, y el pH adecuado de la solución oxigenada en el sistema de perfusión. Con el fin de registrar la señal con más alto posible relación señal-ruido, debemos tener en cuenta factores como la fuente de luz, filtros de luz, enfocando la óptica, fotodetectores, etc 19. Los detalles de estos aspectos se discuten en otro lugar 19. Los conejos jóvenes (edad: 4-5 meses; peso: 9.7 libras) podría ser utilizado para evitar la grasa epicárdica, lo que disminuye la relación señal-ruido de las señales ópticas. La señal registrada por cada píxel es una integración ponderada de la luz emitida por un volumen de tejido. La profundidad de este volumen de tejido depende de las longitudes de onda de excitación y emisión de los colorantes utilizados. Por di-4-ANEPPS, como ejemplo, la profundidad de penetración estimada es de 300μm en el corazón de conejo 20. Por lo tanto, la interpretación de la señal óptica se debe hacer con precaución cuando la heterogeneidad local de la función eléctrica están presentes en el nodo sinusal, nódulo auriculoventricular, y durante la arritmia ventricular 1,21,22. Una de las limitaciones de la técnica de mapeo óptico en comparación con la grabación de electrodos es que la fase de repolarización del potencial de acción es a menudo óptica distored por los artefactos de movimiento causado por la contracción cardíaca. Restricción mecánica se podría utilizar para reducir el artefacto, pero no lo elimina completamente. En comparación, farmacológicos excitación-contracción desacopladores son eficaces para eliminar los artefactos de movimiento. Sin embargo, estos desacopladores (por ejemplo, 2,3-butanodiona monoxima) podría tener importantes efectos secundarios electrofisiológicos. Blebbistatin se ha demostrado no tener efectos adversos sobre la electrofisiología cardíaca en el corazón normal 23, y por lo tanto un desacoplador prometedoras para el mapeo óptico. Cabe señalar que la aceleración de edema debido a la abolición de la contracción podría afectar también a la electrofisiología.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> S271-1 </td></tr><tr><td> CaCl2 (2H 2 O) </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> C79-500 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> S217-500 </td></tr><tr><td> MgCl 2 (6H 2 O) </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> M33-500 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 (H 2 O) </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> S369-500 </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> S233-3 </td></tr><tr><td> D-glucosa </td><td> Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ </td><td> D16-1 </td></tr><tr><td> Blebbistatin </td><td> Bioscience Tocris, Ellisville, MO </td><td> 1760 </td></tr><tr><td> Di-4-ANEPPS </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> D1199 </td></tr><tr><td> RH237 </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> S1109 </td></tr><tr><td> Rhod-2AM </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> R1244 </td></tr><tr><td> Pluronic F127 </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> P3000MP </td></tr><tr><td> Dimetilsulfóxido (DMSO) </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> D2650 </td></tr></tbody></table>

multiparametric optical mapping of the langendorff-perfused rabbit heart

Imágenes ópticas y sondas fluorescentes metodología de investigación avanzado significativamente en el campo de la electrofisiología cardiaca de manera que no podría haber sido logrado por otros enfoques 1. Con el uso de los tintes de calcio y sensibles al voltaje, mapeo óptico permite la medición de potenciales de acción transmembrana y transitorios de calcio con una alta resolución espacial sin el contacto físico con el tejido. Esto hace que las mediciones de la actividad eléctrica cardíaca posible bajo muchas condiciones donde el uso de electrodos es inconveniente o imposible 1. Por ejemplo, las grabaciones ópticas proporcionan precisión los cambios morfológicos del potencial de membrana durante e inmediatamente después de la estimulación y desfibrilación, mientras que las técnicas convencionales de electrodos sufren de estímulo inducido por los artefactos durante y después de los estímulos debido a la polarización del electrodo 1. El corazón de conejo Langendorff perfundidos es uno de los modelos más estudiados de la fisiología del corazón humano y la fisiopatología. Existen muchos tipos de arritmias observadas clínicamente podría ser recapitulado en el modelo de corazón de conejo. Se ha demostrado que los patrones de ondas en el corazón de conejo en las arritmias ventriculares, según el número de efectivos del corazón y de la longitud de onda de la reentrada, son muy similares a la de los dos corazón humano. También se demostró que los aspectos críticos de excitación-contracción (CE) de acoplamiento en el miocardio de conejo, como la contribución relativa de retículo sarcoplásmico (SR), es muy similar a la humana acoplamiento CE 3. Aquí se presentan los procedimientos básicos de los experimentos de mapeo óptico en el corazón de conejo Langendorff perfundidos, incluyendo la configuración del sistema Langendorff perfusión, la configuración de los sistemas de mapeo óptico, el aislamiento y la canalización del corazón, la perfusión y el colorante mancha del corazón, de excitación-contracción desacoplamiento y la recolección de señales ópticas. Estos métodos podrían aplicarse también en el corazón de otras especies de conejo, con los ajustes a las tasas de flujo, la óptica, soluciones, etc Dos sistemas de mapeo óptico se describen. El sistema de cartografía panorámica se utiliza para asignar el epicardio todo del corazón de conejo 4-7. Este sistema proporciona una visión global de la evolución de los circuitos de reentrada durante arritmogénesis y la desfibrilación, y se ha utilizado para estudiar los mecanismos de las arritmias y la terapia antiarrítmica 8,9. El sistema de mapeo dual se utiliza para asignar el potencial de acción (AP) y el calcio transitorio (CAT) de forma simultánea desde el mismo campo de visión 10/13. Este enfoque ha mejorado nuestra comprensión de la importancia del calcio en la alternancia eléctrica y la inducción de arritmias 14-16.

Watch this Scientific Journal Video about Multiparametric Optical Mapping of the Langendorff-perfused Rabbit Heart at JoVE.com

Multiparametric Optical Mapping of the Langendorff-perfused Rabbit Heart

En este artículo se describen los procedimientos básicos para la realización de experimentos ópticos de asignación en el corazón de conejo Langendorff perfundidos con el sistema de imágenes panorámicas, y el doble (voltaje y calcio) modalidad de imagen.

Multiparamétrico óptico Cartografía del corazón de conejo Langendorff perfundidos

Optical imaging and fluorescent probes have significantly advanced research methodology in the field of cardiac electrophysiology in ways that could not ...

multiparametric-optical-mapping-langendorff-perfused-rabbit

Research

JoVE Journal

Bioengineering

22.4K vistas.  Washington University in St. Louis. En este artículo se describen los procedimientos básicos para la realización de experimentos ópticos de asignación en el corazón de conejo Langendorff perfundidos con el sistema de imágenes panorámicas, y el doble (voltaje y calcio) modalidad de imagen.

Video: Multiparametric Optical Mapping of the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Optical Mapping of Action Potentials and Calcium Transients in the Mouse Heart

The mouse heart is a popular model for cardiovascular studies due to the existence of low cost technology for genetic engineering in this species. Cardiovascular physiological phenotyping of the mouse heart can be easily done using fluorescence imaging employing various probes for transmembrane potential (Vm), calcium transients (CaT), and other parameters. Excitation-contraction coupling is characterized by action potential and intracellular calcium dynamics; therefore, it is critically important to map both Vm and CaT simultaneously from the same location on the heart1-4. Simultaneous optical mapping from Langendorff perfused mouse hearts has the potential to elucidate mechanisms underlying heart failure, arrhythmias, metabolic disease, and other heart diseases. Visualization of activation, conduction velocity, action potential duration, and other parameters at a myriad of sites cannot be achieved from cellular level investigation but is well solved by optical mapping1,5,6. In this paper we present the instrumentation setup and experimental conditions for simultaneous optical mapping of Vm and CaT in mouse hearts with high spatio-temporal resolution using state-of-the-art CMOS imaging technology. Consistent optical recordings obtained with this method illustrate that simultaneous optical mapping of Langendorff perfused mouse hearts is both feasible and reliable.

This paper details the dissection procedure, instrumental setup, and experimental conditions during optical mapping of transmembrane potential (Vm) and intracellular calcium transient (CaT) in intact isolated Langendorff perfused mouse hearts.

Mapeo óptico de potenciales de acción y transitorios de calcio en el corazón de ratón

The mouse heart is a popular model for cardiovascular studies due to the existence of low cost technology for genetic engineering in this species. ...

Investigación

Bioingeniería

A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo

The ability of two or more cells of the same type to fuse has been utilized in metazoans throughout evolution to form many complex organs, including skeletal muscle, bone and placenta. Contemporary studies demonstrate fusion of cells of the same type confers enhanced function. For example, when the trophoblast cells of the placenta fuse to form the syncytiotrophoblast, the syncytiotrophoblast is better able to transport nutrients and hormones across the maternal-fetal barrier than unfused trophoblasts1-4. More recent studies demonstrate fusion of cells of different types can direct cell fate. The "reversion" or modification of cell fate by fusion was once thought to be limited to cell culture systems. But the advent of stem cell transplantation led to the discovery by us and others that stem cells can fuse with somatic cells in vivo and that fusion facilitates stem cell differentiation5-7. Thus, cell fusion is a regulated process capable of promoting cell survival and differentiation and thus could be of central importance for development, repair of tissues and even the pathogenesis of disease.
Limiting the study of cell fusion, is lack of appropriate technology to 1) accurately identify fusion products and to 2) track fusion products over time. Here we present a novel approach to address both limitations via induction of bioluminescence upon fusion (Figure 1); bioluminescence can be detected with high sensitivity in vivo8-15. We utilize a construct encoding the firefly luciferase (Photinus pyralis) gene placed adjacent to a stop codon flanked by LoxP sequences. When cells expressing this gene fuse with cells expressing the Cre recombinase protein, the LoxP sites are cleaved and the stop signal is excised allowing transcription of luciferase. Because the signal is inducible, the incidence of false-positive signals is very low. Unlike existing methods which utilize the Cre/LoxP system16, 17, we have incorporated a "living" detection signal and thereby afford for the first time the opportunity to track the kinetics of cell fusion in vivo.
To demonstrate the approach, mice ubiquitously expressing Cre recombinase served as recipients of stem cells transfected with a construct to express luciferase downstream of a floxed stop codon. Stem cells were transplanted via intramyocardial injection and after transplantation intravital image analysis was conducted to track the presence of fusion products in the heart and surrounding tissues over time. This approach could be adapted to analyze cell fusion in any tissue type at any stage of development, disease or adult tissue repair.

A Cre-Lox P Recombination Approach for the Detection of Cell Fusion In Vivo

A method to track cell fusion in living organisms over time is described. The approach utilizes Cre-LoxP recombination to induce luciferase expression upon cell fusion. The luminescent signal generated can be detected in living organisms using biophotonic imaging systems with a sensitivity of detection of &tilde;1,000 cells in peripheral tissues.

A Cre-Lox P Enfoque de recombinación para la detección de la fusión celular En Vivo</em

The ability of two or more cells of the same type to fuse has been utilized in metazoans throughout evolution to form many complex organs, including ...

In vitro Synthesis of Native, Fibrous Long Spacing and Segmental Long Spacing Collagen

Collagen fibrils are present in the extracellular matrix of animal tissue to provide structural scaffolding and mechanical strength. These native collagen fibrils have a characteristic banding periodicity of ~67 nm and are formed in vivo through the hierarchical assembly of Type I collagen monomers, which are 300 nm in length and 1.4 nm in diameter. In vitro, by varying the conditions to which the monomer building blocks are exposed, unique structures ranging in length scales up to 50 microns can be constructed, including not only native type fibrils, but also fibrous long spacing and segmental long spacing collagen. Herein, we present procedures for forming the three different collagen structures from a common commercially available collagen monomer. Using the protocols that we and others have published in the past to make these three types typically lead to mixtures of structures. In particular, unbanded fibrils were commonly found when making native collagen, and native fibrils were often present when making fibrous long spacing collagen. These new procedures have the advantage of producing the desired collagen fibril type almost exclusively. The formation of the desired structures is verified by imaging using an atomic force microscope.

In vitro Synthesis of Native, Fibrous Long Spacing and Segmental Long Spacing Collagen

Simple and reproducible procedures are described for making three structurally distinct collagen assemblies from a common commercially available Type I collagen monomer. Native type, fibrous long spacing or segmental long spacing collagen can be constructed by varying the conditions to which the 300 nm long and 1.4 nm diameter monomer building block is exposed.

La síntesis in vitro de Espaciado nativo, y colágeno fibroso Long Long segmentaria Espaciado

Collagen fibrils are present in the  extracellular matrix of animal tissue to provide structural scaffolding and  mechanical strength. These native ...

Patient-specific Modeling of the Heart: Estimation of Ventricular Fiber Orientations

Patient-specific simulations of heart (dys)function aimed at personalizing cardiac therapy are hampered by the absence of in vivo imaging technology for clinically acquiring myocardial fiber orientations. The objective of this project was to develop a methodology to estimate cardiac fiber orientations from in vivo images of patient heart geometries. An accurate representation of ventricular geometry and fiber orientations was reconstructed, respectively, from high-resolution ex vivo structural magnetic resonance (MR) and diffusion tensor (DT) MR images of a normal human heart, referred to as the atlas. Ventricular geometry of a patient heart was extracted, via semiautomatic segmentation, from an in vivo computed tomography (CT) image. Using image transformation algorithms, the atlas ventricular geometry was deformed to match that of the patient. Finally, the deformation field was applied to the atlas fiber orientations to obtain an estimate of patient fiber orientations. The accuracy of the fiber estimates was assessed using six normal and three failing canine hearts. The mean absolute difference between inclination angles of acquired and estimated fiber orientations was 15.4 &deg;. Computational simulations of ventricular activation maps and pseudo-ECGs in sinus rhythm and ventricular tachycardia indicated that there are no significant differences between estimated and acquired fiber orientations at a clinically observable level.The new insights obtained from the project will pave the way for the development of patient-specific models of the heart that can aid physicians in personalized diagnosis and decisions regarding electrophysiological interventions.

A methodology to estimate ventricular fiber orientations from in vivo images of patient heart geometries for personalized modeling is described. Validation of the methodology performed using normal and failing canine hearts demonstrate that that there are no significant differences between estimated and acquired fiber orientations at a clinically observable level.

Modelado específico del paciente del corazón: Estimación de las orientaciones de las fibras ventriculares

Patient-specific  simulations of heart (dys)function aimed at personalizing cardiac therapy are hampered  by the absence of in vivo imaging technology for ...

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

A label-free optical biosensor based on a nanostructured porous Si is designed for rapid capture and detection of Escherichia coli K12 bacteria, as a model microorganism. The biosensor relies on direct binding of the target bacteria cells onto its surface, while no pretreatment (e.g.&#160;by cell lysis) of the studied sample is required. A mesoporous Si thin film is used as the optical transducer element of the biosensor. Under white light illumination, the porous layer displays well-resolved Fabry-P&#233;rot fringe patterns in its reflectivity spectrum. Applying a fast Fourier transform (FFT) to reflectivity data results in a single peak. Changes in the intensity of the FFT peak are monitored. Thus, target bacteria capture onto the biosensor surface, through antibody-antigen interactions, induces measurable changes in the intensity of the FFT peaks, allowing for a &#39;real time&#39; observation of bacteria attachment.
The mesoporous Si film, fabricated by an electrochemical anodization process, is conjugated with monoclonal antibodies, specific to the target bacteria. The immobilization, immunoactivity and specificity of the antibodies are confirmed by fluorescent labeling experiments. Once the biosensor is exposed to the target bacteria, the cells are directly captured onto the antibody-modified porous Si surface. These specific capturing events result in intensity changes in the thin-film optical interference spectrum of the biosensor. We demonstrate that these biosensors can detect relatively low bacteria concentrations (detection limit of 104 cells/ml) in less than an hour.

Optical Detection of E. coli Bacteria by Mesoporous Silicon Biosensors

A label-free optical biosensor for rapid bacteria detection is introduced. The biosensor is based on a nanostructured porous Si, which is designed to directly capture the target bacteria cells onto its surface. We use monoclonal antibodies, immobilized onto the porous transducer, as the capture probes. Our studies demonstrate the applicability of these biosensors for the detection of low bacterial concentrations within minutes with no prior sample processing (such as cell lysis).

Detección óptica de<em&gt; E. coli</em&gt; Bacterias por mesoporosos Silicon Biosensores

A label-free optical biosensor based on a nanostructured porous Si is designed for rapid capture and detection of Escherichia coli K12 bacteria, as a ...

Nanomanipulation of Single RNA Molecules by Optical Tweezers

A large portion of the human genome is transcribed but not translated. In this post genomic era, regulatory functions of RNA have been shown to be increasingly important. As RNA function often depends on its ability to adopt alternative structures, it is difficult to predict RNA three-dimensional structures directly from sequence. Single-molecule approaches show potentials to solve the problem of RNA structural polymorphism by monitoring molecular structures one molecule at a time. This work presents a method to precisely manipulate the folding and structure of single RNA molecules using optical tweezers. First, methods to synthesize molecules suitable for single-molecule mechanical work are described. Next, various calibration procedures to ensure the proper operations of the optical tweezers are discussed. Next, various experiments are explained. To demonstrate the utility of the technique, results of mechanically unfolding RNA hairpins and a single RNA kissing complex are used as evidence. In these examples, the nanomanipulation technique was used to study folding of each structural domain, including secondary and tertiary, independently. Lastly, the limitations and future applications of the method are discussed.

Optical tweezers have been used to study RNA folding by stretching individual molecules from their 5&#8217; and 3&#8217; ends. Here common procedures are described to synthesize RNA molecules for tweezing, calibration of the instrument, and methods to manipulate single molecules.

Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN por Pinzas Ópticas

A large portion of the human genome is transcribed but not translated. In this post genomic era, regulatory functions of RNA have been shown to be ...

In Situ Mapping of the Mechanical Properties of Biofilms by Particle-tracking Microrheology

Bacterial cells are able to form surface-attached biofilm communities known as biofilms by encasing themselves in extracellular polymeric substances (EPS). The EPS serves as a physical and protective scaffold that houses the bacterial cells and consists of a variety of materials that includes proteins, exopolysaccharides and DNA. The composition of the EPS may change, which remodels the mechanic properties of the biofilm to further develop or support alternative biofilm structures, such as streamers, as a response to environmental cues. Despite this, there are little quantitative descriptions on how EPS components contribute to the mechanical properties and function of biofilms. Rheology, the study of the flow of matter, is of particular relevance to biofilms as many biofilms grow in flow conditions and are constantly exposed to shear stress. It also provides measurement and insight on the spreading of the biofilm on a surface. Here, particle-tracking microrheology is used to examine the viscoelasticity and effective crosslinking roles of different matrix components in various parts of the biofilm during development. This approach allows researchers to measure mechanic properties of biofilms at the micro-scale, which might provide useful information for controlling and engineering biofilms.

In Situ Mapping of the Mechanical Properties of Biofilms by Particle-tracking Microrheology

Particle-tracking microrheology investigates the viscoelasticity of materials. Here, the technique is used to determine the viscoelasticity, creep compliance and effective crosslinking roles of different matrix components of a bacterial biofilm. The matrix consists of polymeric substances secreted by the bacteria and its components determine biofilm structure and mechanical properties.

En Mapping in situ de las propiedades mecánicas de biopelículas por partículas de seguimiento Microrheology

Bacterial cells are able to form surface-attached biofilm communities known as biofilms by encasing themselves in extracellular polymeric substances ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and adverse effects1,2,3,4,5,6,7. However, several challenges remain before these treatments can be applied more widely. The development and validation of intraductal therapeutics in an appropriate animal model facilitate the development of intraductal therapeutic strategies for patients. While the mouse mammary gland has been widely used as a model system of mammary development and tumorigenesis, the anatomy is distinct from the human gland. A larger animal model, such as the rabbit, may serve as a better model for mammary gland structure and intraductal therapeutic development. In contrast to mice, in which ten ductal trees are spatially distributed along the body axis, each terminating in a separate teat, the rabbit mammary gland more closely resembles the human gland, with multiple overlapping ductal systems that exit through separate openings in one teat. Here, we present minimally invasive methods for the delivery of reagents directly into the rabbit mammary duct and for visualization of the delivery itself with high-resolution ultrasound imaging.

Here, we describe a technique for the localized delivery of reagents to the rabbit mammary gland via an intraductal injection. In addition, we describe a protocol for visualization and the confirmation of delivery by high-resolution ultrasound imaging of contrast agents.

Intraductal La entrega al conejo Glándula Mamaria

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Light-sheet Fluorescence Microscopy for the Study of the Murine Heart

Light-sheet fluorescence microscopy has been widely used for rapid image acquisition with a high axial resolution from micrometer to millimeter scale. Traditional light-sheet techniques involve the use of a single illumination beam directed orthogonally at sample tissue. Images of large samples that are produced using a single illumination beam contain stripes or artifacts and suffer from a reduced resolution due to the scattering and absorption of light by the tissue. This study uses a dual-sided illumination beam and a simplified CLARITY optical clearing technique for the murine heart. These techniques allow for deeper imaging by removing lipids from the heart and produce a large field of imaging, greater than 10 x 10 x 10 mm3. As a result, this strategy enables us to quantify the ventricular dimensions, track the cardiac lineage, and localize the spatial distribution of cardiac-specific proteins and ion-channels from the post-natal to adult mouse hearts with sufficient contrast and resolution.

This study uses a dual-sided illumination light-sheet fluorescence microscopy (LSFM) technique combined with optical clearing to study the murine heart.

Hoja de luz fluorescencia microscopía para el estudio del corazón murino

Light-sheet fluorescence microscopy has been widely used for rapid image acquisition with a high axial resolution from micrometer to millimeter scale. ...

Biaxial Mechanical Characterizations of Atrioventricular Heart Valves

Extensive biaxial mechanical testing of the atrioventricular heart valve leaflets can be utilized to derive&#160;optimal parameters used in constitutive models, which provide a mathematical representation of the mechanical function of those structures. This presented biaxial mechanical testing protocol involves (i) tissue acquisition, (ii) the preparation of tissue specimens, (iii) biaxial mechanical testing, and (iv) postprocessing of the acquired data. First, tissue acquisition requires obtaining porcine or ovine hearts from a local Food and Drug Administration-approved abattoir for later dissection to retrieve the valve leaflets. Second, tissue preparation requires using tissue specimen cutters on the leaflet tissue to extract a clear zone for testing. Third, biaxial mechanical testing of the leaflet specimen requires the use of a commercial biaxial mechanical tester, which consists of force-controlled, displacement-controlled, and stress-relaxation testing protocols to characterize the leaflet tissue&#39;s mechanical properties. Finally, post-processing requires the use of data image correlation techniques and force and displacement readings to summarize the tissue&#39;s mechanical behaviors in response to external loading. In general, results from biaxial testing demonstrate that the leaflet tissues yield a nonlinear, anisotropic mechanical response. The presented biaxial testing procedure is advantageous to other methods since the method presented here allows for a more comprehensive characterization of the valve leaflet tissue under one unified testing scheme, as opposed to separate testing protocols on different tissue specimens. The proposed testing method has its limitations in that shear stress is potentially present in the tissue sample. However, any potential shear is presumed negligible.

This protocol involves characterizations of atrioventricular valve leaflets with force-controlled, displacement-controlled, and stress-relaxation biaxial mechanical testing procedures. Results acquired with this protocol can be used for constitutive model development to simulate the mechanical behavior of functioning valves under a finite element simulation framework.

Biaxiales caracterizaciones mecánicas de válvulas auriculoventricular del corazón

Extensive biaxial mechanical testing of the atrioventricular heart valve leaflets can be utilized to derive&#160;optimal parameters used in constitutive ...