Esta labor fue apoyada por subvenciones de funcionamiento a KJ de las Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (NSERC) y la enfermedad de Crohn y Colitis Foundation of Canada (CCFC). VM es apoyado por una beca de CFRI y GB una beca de posgrado de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR). BAV es una Niños con Intestinal y Trastornos hepáticos Foundation (CHILD) Cátedra de Pediatría IBD Investigación y la Cátedra de Investigación de Canadá en Gastroenterología Pediátrica y KJ es un senior Clínico Científico apoyado por el Instituto de Investigación de la Familia Programa Clínico científicos Premio (CFRI) niño y el niño y de la Universidad de Columbia Británica.

Los procedimientos que implican sujetos animales siguen las pautas de cuidado de animales expuestos por el Cuidado de Animales y el empleo Comisión Institucional (IACUC) de la Universidad de British Columbia. Procedimientos mencionados en este protocolo se describen para ratas y ratones, mientras que los resultados representativos se presentarán a partir de ratas Sprague-Dawley. 1. Preparación de DNBS y administración intrarrectal <ol><li> Para la instilación rectal de DNBS en ratas, recién preparar 15-30 mg de DNBS/250 l de etanol al 50%. Para los ratones, prepare 2-6 mg de DNBS/100 l de etanol al 50%. Nota: Optimizar la concentración exacta DNBS para ser administrado en cada instalación. Ratas macho Sprague-Dawley, y C57BL / 6 ratones se prefieren para la inducción de la colitis con DNBS, sin embargo otras cepas de ratón y de rata se pueden utilizar. Los ratones y las ratas tratadas sólo con etanol al 50% se pueden utilizar como grupos de control sin embargo, dados los efectos de etanol son leves o ausente, se puede OMIt la inclusión de este grupo de estudio 12. </li><li> Conecte una jeringa de 1 ml con una aguja 19 que tiene un catéter de polietileno (PE-90 - ratas o PE-50 - ratones) fijado a su fin. </li><li> Ligeramente anestesiar la rata o el ratón que descansa sobre una almohadilla eléctrica (por ejemplo, mediante la administración de 1,5% de isoflurano a través de cono de la nariz, los animales deben tener todavía un abrir y cerrar y los reflejos de deglución y mostrar la respiración regular). Aplique el gel lágrima a sus ojos para evitar los ojos se sequen. </li><li> Suavemente aplique presión con los dedos para el extremo posterior del animal para eliminar cualquier materia fecal que puede estar presente en el colon distal. </li><li> Introduzca suavemente el catéter por vía rectal, con el catéter alcanza aproximadamente 8 cm proximal al ano para las ratas, o 3-4 cm para ratones. Inyectar una pequeña cantidad de la solución mientras se inserta el catéter para lubricar, lo que permite una inserción más fácil. Nota: Si se siente resistencia al insertar el catéter, no continúe para insertar ya que esto puede conducir a la perforación dela pared intestinal. Retire el catéter e intentar volver a insertar suavemente, de nuevo lubricante del colon como proceder. </li><li> Lentamente inyectar 250 (ratas) o 100 (ratones) l de DNBS, o un volumen igual o etanol al 50% para los controles. Después de inyectar la DNBS, coloque el animal cabeza abajo durante 90 segundos para evitar la pérdida de la DNBS. </li><li> Después de la administración DNBS, alimentar a los animales 8% de agua de sacarosa en 0,2% de solución salina para prevenir la deshidratación durante la primera semana. </li><li> Observe cuidadosamente a los animales, con un seguimiento diario de la pérdida de peso y signos de deshidratación o malestar durante la duración del experimento. Nota: La pérdida de peso puede acercarse rápidamente las recomendaciones del CCPA de la pérdida de peso máximo autorizado. Desde esta mayoría deriva de la deshidratación, pérdida de peso debe ser utilizado como un indicador para la administración de solución de Ringer lactato para limitar la deshidratación. Por favor, asegúrese de consultar con el veterinario instalación en temas de salud, según proceda. </li></ol> 2. Collecting tejidos y Evaluación de daño histológico en DNBS ratones retados <ol><li> En el punto de tiempo deseado después del desafío con DNBS, la eutanasia a los animales por sobredosis de isoflurano en una cámara de anestesia suplementado con suficiente oxígeno. Observar el animal hasta que se vea ninguna subida o de bajada del pecho y no hay latidos cardiacos palpable. Confirme que el animal ha sido sacrificado correctamente por la ausencia de una respuesta a pizca dedo del pie o conmovedora de la córnea, seguido por dislocación cervical. </li><li> Abra la cavidad abdominal y eliminar todo el intestino grueso. Abra el intestino longitudinalmente; úlceras de la mucosa macroscópicas deben ser observados aproximadamente 5-6 cm proximal desde el extremo distal del colon en ratas (2-3 cm en ratones). Nota: Después de retirar el intestino grueso, evaluar puntuaciones de daño macroscópico si se desea. Introducir las secciones de colon desde correspondiente localización anatómica de los animales de control. Nota: Las personas que califican el tejido para las puntuaciones de daño macroscópico debeser cegados a la identidad de los grupos de tratamiento. Puntuación secciones de tejido usando las siguientes o similares criterios: gravedad y el alcance de la ulceración (0-10), sumadas las puntuaciones de la ausencia o presencia de diarrea (0 ó 1), adherencias (0, 1, o 2) y el espesor de la pared del colon máxima en milímetros 11. </li><li> Recoger 0,5 cm secciones proximal al sitio de daño macroscópico máxima. Snap congelar una sección de 0,5 cm en nitrógeno líquido para evaluar posteriormente la actividad mieloperoxidasa (MPO) (una medida de la infiltración de neutrófilos), y coloque la otra sección en el 10% formalina tamponada neutra para el análisis histológico. Nota: Encajar tejidos congelados para el ensayo de mieloperoxidasa se puede almacenar a -80 ° C durante un máximo de 1 mes. </li><li> Permita que los tejidos recogidos para el análisis histológico en el paso 2.3 para fijar en formol durante la noche, y luego se lavan con etanol al 70%. Incrustar tejidos en parafina y corte con el espesor deseado (3-5 micras), tinción con hematoxilina y eosina (HE) para la puntuación histológica. </li&gt; <li> Haga que dos observadores anotan al menos tres secciones de tejido de cada animal bajo un microscopio óptico para determinar las puntuaciones de los daños histológicos para cada grupo. Nota: Las personas que califican el tejido para las puntuaciones de los daños histológicos deben ser cegados a la identidad de los grupos de tratamiento. Puntuación secciones de tejido usando los siguientes o similares criterios: Extensión de infiltrado de células inflamatorias (0 = ausente, 3 = transmural), pérdida de la arquitectura de la mucosa (0 = ausente, 3 = grave), la presencia o ausencia de abscesos en las criptas (0-1) , y el agotamiento de las células caliciformes (0-3). Determinar puntaje daño histológico como la suma de estas puntuaciones 11. </li></ol> 3. Realización de mieloperoxidasa (MPO) Ensayo sobre DNBS Desafiado tejido intestinal <ol><li> Actividad MPO ensayo en los 0,5 cm segmentos colónicos obtenidos en la etapa 2.3. Homogeneizar los tejidos en tampón de homogeneización MPO (0,5% de bromuro de hexadeciltrimetil-amonio en tampón fosfato de potasio 50 mM (pH 6,0)) para dar un SEGME de colon 50 mgnt / ml de tampón de homogeneización suspensión. </li><li> Alícuota de la solución homogeneizada en porciones de 1 ml y centrifugar a 4 ° C durante 2 min a 10.000 x g. </li><li> Mezclar 100 l de cada alícuota con 2,9 ml de 50 mM de tampón de fosfato (pH 6,0) que contienen 0,167 mg / ml de o-dianisidinedihydrochloride y peróxido de hidrógeno 0,0005% en una cubeta. </li><li> Medir la tasa de absorbancia utilizando un espectrofotómetro a 460 nm. Nota: la actividad de MPO se define como la cantidad de enzima que degrada 1 mol / min de H 2 O 2 a H 2 O a temperatura ambiente y se expresa en unidades por mg de tejido. </li></ol>

<ol>
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E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression.">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li><li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis.">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li><li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+CD4++lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis.">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. 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Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat.">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li><li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis.">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li><li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease.">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li><li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain.">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li><li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mundra+H.,Innis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet.">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li><li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis.">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li><li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis.">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li><li>Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=N-3+fatty+acid-rich+diet+prevents+early+response+of+interleukin-6+elevation+in+trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+enteritis.">N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis.</a> Int. J. Mol. Med. 12, 721-725 (2003).</li><li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10,+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+(DSS)+colitis.">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li><li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice.">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li><li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats.">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li></ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

El modelo DNBS se describe en este protocolo es un modelo de colitis valiosa, de bajo costo, y reproducible que puede ser utilizado para estudiar diversos aspectos de la EII. Cuando se administra por vía rectal para ratas o ratones, DNBS induce un importante grado de inflamación y lesión tisular en el colon, se asemeja a la enfermedad de Crohn humana en términos de sus diferentes características histológicas que incluyen la infiltración transmural de polimorfonucleares y la activación de Th1 NF-kB dependiente pr...

La enfermedad inflamatoria intestinal (EII) se caracteriza por la inflamación crónica recidivante en el tracto gastro-intestinal (GI), que resulta en síntomas de la diarrea, la pérdida de peso y dolor abdominal. La colitis ulcerosa (CU) y la enfermedad de Crohn (CD) son las dos formas principales de la EII, y se pueden distinguir por la ubicación de la inflamación en el tracto GI. En los pacientes con CU, la inflamación suele afectar el recto y se extiende de forma contigua a los dos puntos por un grado variable que afecta sólo a la mucosa superficial. En contraste, el CD puede afectar cualquier parte del tracto GI, aunque afecta predominantemente el íleon y ciego. CD se manifiesta frecuentemente como inflamación transmural asocia a menudo con granulomas y que conduce a estenosante (fibroestenótica) y / o penetrante (fistulizante) enfermedad. Aunque la etiología de la EII sigue siendo difícil de alcanzar, es bien aceptado que la EII es multifactorial, que implica interacciones entre los hosts del sistema inmune, susceptibilidad genética y responses a los factores ambientales y microbianos. Hasta la fecha, se han propuesto diferentes modelos de IBD que mostrar varias respuestas clínicas, histológicas e inmunológicas propias de CU y EC. Los modelos más utilizados son ratones modificados genéticamente (, IL-10, SAMP / Yit IL-2), modelos inducidos infección (rodentium Citrobacter, Salmonella typhimurium), modelos de transferencia adoptiva (CD45 + RB altos, de transferencia de células CD62L + en ratones SCID) y modelos de colitis inducida químicamente (dextrán sulfato sódico (DSS), ácido sulfónico trinitrobenceno (TNBS), y ácido sulfónico dinitrobenceno (DNBS)). Debido a su bajo coste y rápida aparición de la enfermedad, los modelos químicos se consideran de gran valor para el estudio de diversos aspectos de la EII. Cada uno de los modelos de colitis químicos enumerados tienen ventajas y limitaciones en algunos aspectos de su clínica, inmunológica e histopatológico relevancia para la EII. DSS es uno de los métodos químicos más comunes empleadas para inducir coliTIS en los roedores 1. Administración de 3-10% de DSS (PM: 42 kDa) durante 7-10 días en el agua de bebida de los ratones puede inducir síntomas y signos de colitis incluyendo pérdida de peso, diarrea con sangre, acortamiento del colon, ulceración de la mucosa y la infiltración de neutrófilos. Este modelo es particularmente útil para los estudios de cribado de fármacos, así como explorar los mecanismos de regeneración epitelial, el impacto de la inmunidad innata en la homeostasis de la mucosa, y el papel de la inflamación en la promoción de la displasia intestinal y el desarrollo de adenocarcinoma. Sin embargo, hay algunos inconvenientes a la modelo DSS, incluyendo la variación en la concentración de DSS es necesario para inducir la colitis en diferentes instalaciones de los animales, así como la captación de agua está irregular por los ratones y la exposición tanto, contrarios al DSS, lo que resulta en la variación en el grado, la extensión y distribución de lesión de la mucosa y ulceración en el colon. Todas estas características dan lugar a la heterogeneidad de los resultados y limitan la capacidad para comparar los resultados entre los estudios frdiferentes grupos de investigación de la OM. Una alternativa al modelo DSS es los DNBS inducida hapteno-o modelos de colitis TNBS. Este modelo emplea la instilación rectal de la mucosa sensibilizar a agentes DNBS o TNBS, diluido en diferentes concentraciones de etanol. La administración de etanol es un requisito previo para romper la barrera de la mucosa del colon para permitir la penetración de DNBS o TNBS en la lámina propia. DNBS / TNBS entonces haptenize las proteínas del colon y del intestino microbianos localizados a ser inmunogénica, iniciando así el anfitrión innata y la respuesta inmune adaptativa. En general, este modelo se asocia con graves y algunas veces diarrea con sangre, pérdida de peso y engrosamiento de la pared intestinal sin embargo los síntomas varían dependiendo del tipo de roedor utilizado, así como el tiempo, la dosis y el grado de exposición a la DNBS o TNBS utilizado en la estudio. Distinciones importantes entre las ratas y ratones deben tenerse en cuenta, con las ventajas de menor costo para la compra y comida, así como lower de masa corporal para la disminución de los costos por los animales del tratamiento in vivo. Esto debe situarse en el curso más rápido y severo de colitis en ratones, donde los animales más frágiles y sensibles pueden llegar rápidamente a un punto final de la integridad personal. La inflamación intestinal inicialmente resulta de etanol daño inducido a las células epiteliales intestinales, dando lugar a aumento de la permeabilidad epitelial, la penetración microbiana en la mucosa, haptenización de proteínas del huésped, todo esto resulta en la infiltración de neutrófilos, macrófagos y linfocitos T Th1 en la mucosa dañada. En comparación con DNBS, TNBS se considera una sustancia química peligrosa, debido a sus propiedades altamente oxidantes que pueden suponer un riesgo de explosión en contacto con bases, tales como el sodio y el hidróxido de potasio. Por lo tanto DNBS es considerada actualmente como una opción preferente de productos químicos sobre TNBS para inducir colitis. En los roedores, DNBS colitis es considerado como uno de los métodos más convenientes para estudiar los siguienala IBD modificadores de la enfermedad asociada: <ol><li> La depresión y la reactivación de la colitis: Se ha demostrado que el estrés, la ansiedad y la depresión en los pacientes con EII son frecuentemente asociados con la recaída de la enfermedad. DNBS colitis es un modelo adecuado para estudiar el papel de la depresión y sus consecuencias sobre la reactivación de la colitis en ratones. El método implica típicamente la inducción inicial de la colitis por DNBS, seguido por la resolución de la colitis por dejando los ratones durante 6-8 semanas. Los ratones se administran entonces con agentes depresión causando tales como reserpina o por bulbectomy olfativa para inducir depresión seguido por pruebas de ellos para la reactivación de la colitis través de desafío con una dosis subcolitic de DNBS 2. </li><li> El estrés y la reactivación de la colitis: El estrés es otro factor ambiental común que se ha vinculado a la patogénesis de la EII. Hay un creciente cuerpo de evidencia que sugiere una fuerte asociación entre el estrés crónico y la aparición de los síntomas de la UC y la CD en roedoress, así como en los seres humanos y los primates no humanos 3. DNBS la colitis es un buen modelo para estudiar la reactivación de estrés asociada de la colitis en ratones y ratas. El método se emplea generalmente en una manera similar como se mencionó anteriormente para la depresión, excepto en el lugar de la depresión, los animales están expuestos a factores de estrés tales como Sonic y tensión de restricción 4. </li><li> La inflamación neurogénica: Un número de estudios han descrito ya sea alteraciones transitorias o permanentes en el sistema nervioso entérico (ENS) estructura y la función, como se ve en muestras de tejido de modelos animales y de pacientes con EII. DNBS es un buen modelo para estudiar los efectos de la inflamación en la ENS 5 y estudiar tanto noradrenérgica y vías neuronales colinérgicas 6. </li><li> Los mecanismos de lesión-reparación: Durante la EII patogénesis, mediadores de lesiones derivadas del huésped tales como especies de oxígeno reactivo (ROS), óxido nítrico (NO), molécula de adhesión intercelular 3 (ICAM-3), y P-selectina se han mostrado a Psentar un papel en las alteraciones del epitelio intestinal. DNBS es un excelente modelo para estudiar las lesiones causadas por la sobre regulación de estos mediadores, así como los mecanismos de reparación que se regulan mediante el uso de fármacos selectivos o inhibidores de 7,8. </li><li> Inflamación transmural: Además de las aplicaciones de DNBS mencionados anteriormente, el modelo también se puede aplicar para estudiar la inflamación transmural del intestino, una característica clásica encontrado en pacientes con EC. Ambos DNBS y la colitis inducida por TNBS se asocian con la infiltración significativa de linfocitos, en la mucosa del colon haciendo estos modelos particularmente útiles para estudiar los mecanismos inmunes dependientes de células T. </li></ol> En comparación con el modelo de DSS, las ventajas de DNBS y la colitis inducida por TNBS incluyen bajo costo, el rápido desarrollo de la colitis (por lo general requiere de 1-3 días para mostrar ulceración reproducible y la inflamación) y daños localizados consistente para el colon distal. Sin embargo, los inconvenientes son un requisito para unamayor nivel de conocimientos técnicos, la optimización de la dosis DNBS / TNBS, y la necesidad de anestesia para la administración rectal. En este trabajo metodológico se estudiaron los efectos de diferentes concentraciones de n-6 y n-3 ácidos grasos poliinsaturados en la alteración de la respuesta de la mucosa del colon a la colitis inducida por DNBS en ratas mediante el aceites vegetales aceite de cártamo (SO) y el aceite de canola (CO) , y aceite de pescado (FO). Se ha demostrado que los ácidos n-6 y n-3 grasos son importantes mediadores de la enfermedad inflamatoria intestinal a través de su papel como restos acilo de fosfolípidos de la membrana celular 9. En contraste con el potencial proinflamatorio de los ácidos grasos n-6, ácidos grasos n-3 en suficientemente alta ingesta son potencialmente agentes anti-inflamatorios potentes. Las acciones antiinflamatorias de los ácidos grasos n-3 están mediados directamente a través de la sustitución de ácido araquidónico como un sustrato de eicosanoides, inhibiendo el metabolismo del ácido araquidónico y indirectamente a través de la alteración de proinflla expresión génica proinflamatoria y la señalización celular. Los ácidos grasos n-3 también dan lugar a resolvinas, una familia de mediadores antiinflamatorios. La alta ingesta de ácidos grasos n-3 se asocia con una disminución en la producción de eicosanoides proinflamatorios, citocinas, quimiocinas, especies reactivas de oxígeno y la expresión de moléculas de adhesión. En este estudio, las ratas fueron alimentadas con dietas ad libitum idénticos en todos los nutrientes, excepto ácidos grasos, con una energía como por ciento de grasa, 20% de SO, 20% de CO, o 18% de aceite de pescado más 2% de aceite de cártamo (FO) 10-11 . Como porcentaje de la energía diaria, la dieta SO proporciona 15% de ácido linoleico (LA), con &lt;0,06%-α-linolénico (ALA) y no el ácido eicosapentaenoico (EPA) o el ácido docosahexaenoico (DHA), la dieta CO tenía 4,2 % LA y ALA 1,9% sin la EPA o DHA, y la dieta FO proporcionaron 1,4% de EPA, DHA 4,9%, 0,32% LA, y el 0,12% de ALA. Tres semanas después de la iniciación de las dietas de lípidos, los ratones se les administró DNBS intrarrectal o etanol al 50% y se sacrificaron 5 días después. La inflrespuesta amatorio se evaluó mediante la evaluación de la pérdida de peso, los resultados histológicos de daño y la actividad mieloperoxidasa de tejido.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="627">
	<colgroup>
		<col />
		<col /> 
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">1 mL syringe</td>
			<td style="width:121px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">309659</td>
			<td style="width:167px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">19 gauge needle</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-50</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427517</td>
			<td>for intra-rectal administration in mice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene tubing PE-90</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427519</td>
			<td>for intra-rectal administration in rat</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNBS</td>
			<td>MP Bio</td>
			<td>150959</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">tear gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>63601662596</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% Formalin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>5F93-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">warming pad</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>TPZ-0510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>A-962.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">hexadecyltrimethyl-ammonium bromide</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>H5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Potassium phosphate buffer solution</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>79628-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">O-dianisidine dihydrochloride</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>D3252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">30% H2O2</td>
			<td style="width:121px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>31642</td>
			<td>hydrogen peroxide</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>Benchmarker Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Image.Z1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">Data analysis software program </td>
			<td>GraphPad Software</td>
			<td style="width:119px;"> GraphPad Prism Software Version 4.00 </td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">San Diego California USA, www.graphpad.com</a></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dnbs/tnbs colitis models: providing insights into inflammatory bowel disease and effects of dietary fat

Enfermedades inflamatorias del intestino (IBD), incluyendo enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa, se han asociado con una base genética, y más recientemente respuestas inmunes del huésped a los agentes microbianos y ambientales. Colitis Dinitrobenceno ácido sulfónico (DNBS) inducida permite estudiar la patogénesis de la EII desencadenantes ambientales asociados, tales como el estrés y la dieta, los efectos de las terapias potenciales, y los mecanismos de la inflamación de la mucosa intestinal y lesión subyacente. En este trabajo, hemos investigado los efectos de los ácidos n-3 y n-6 ácidos grasos de la dieta sobre la respuesta inflamatoria de la mucosa del colon a la colitis inducida por DNBS en ratas. Todas las ratas fueron alimentadas con dietas idénticas con la excepción de los diferentes tipos de ácidos grasos [aceite de cártamo (SO), aceite de canola (CO), o el aceite de pescado (FO)] durante tres semanas antes de la exposición a intrarrectal DNBS. Las ratas de control dadas etanol intrarectal continuaron ganando peso durante el estudio 5 días, mientras que, las ratas tratadas con dietas lipídicas DNBS alimentados todo el lost de peso con FO y CO alimentado ratas demuestra la pérdida de peso significativa en un 48 hr y las ratas alimentadas SO por 72 hr. El aumento de peso se reanuda a las 72 h después de DNBS, y por 5 días después DNBS, el grupo FO tenido un mayor peso corporal que los SO o grupos CO. Secciones del colon recogieron 5 días después de DNBS-tratamiento mostró ulceración focal, destrucción cripta, el agotamiento de células caliciformes, y la infiltración mucosa de células inflamatorias tanto agudas y crónicas que difieren en gravedad entre los grupos de la dieta. El grupo SO alimentado mostró el daño más severo seguido por el CO, y FO alimenta grupos que mostraron el grado más leve de lesión de los tejidos. Del mismo modo, la mieloperoxidasa del colon (MPO) la actividad, un marcador de la actividad de los neutrófilos fue significativamente mayor en SO seguido de ratas CO alimentados, con FO ratas alimentadas tener significativamente menor actividad de MPO. Estos resultados demuestran el uso de la colitis inducida por DNBS, tal como se describe en este protocolo, para determinar el impacto de la dieta en la patogénesis de la EII.

Desafío de ratas (Sprague-Dawley) o ratones (C57BL / 6) con DNBS típicamente resulta en la pérdida de peso transitoria y diarrea, a veces con sangre presente en las heces. Sin embargo, factores como la genética, la dieta y la microbiota intestinal puede modificar la susceptibilidad a la colitis inducida DNBS. Por lo tanto, incluso con los animales en los experimentos deben ser de la misma institución, ya sea derivado de forma local o pedir en un solo proveedor animal. Todos los animales deben ser controlados cuidad...

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DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

DNBS / TNBS colitis inducida ofrece un método alternativo y barato para estudiar la patobiología de la enfermedad inflamatoria del intestino. El protocolo descrito en este documento se describen la aplicación exitosa de DNBS para inducir la colitis en ratones y ratas y permite estudiar a fondo las respuestas intestinales mediados por el huésped.

Modelos DNBS / TNBS colitis: Proporcionar ideas sobre la enfermedad inflamatoria intestinal y efectos de la grasa en la dieta

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

46.8K vistas.  BC Children's Hospital.  DNBS / TNBS colitis inducida ofrece un método alternativo y barato para estudiar la patobiología de la enfermedad inflamatoria del intestino. El protocolo descrito en este documento se describen la aplicación exitosa de DNBS para inducir la colitis en ratones y ratas y permite estudiar a fondo las respuestas intestinales mediados por el huésped. 

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Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues as well as altered cytokine homeostasis. The innate immune system plays a crucial role in recognizing pathogens and other endogenous danger stimuli. One of the major cytokines released by innate immune cells is Interleukin (IL)-1. Therefore, we utilize a whole blood stimulation assay in order to measure the secretion of inflammatory cytokines and specifically of the pro-inflammatory cytokine IL-1&beta; 1, 2, 3.
Patients with genetic dysfunctions of the innate immune system causing autoinflammatory syndromes show an exaggerated release of mature IL-1&beta; upon stimulation with LPS alone. In order to evaluate the innate immune component of patients who present with inflammatory-associated pathologies, we use a specific immunoassay to detect cellular immune responses to pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), such as the gram-negative bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). These PAMPs are recognized by pathogen recognition receptors (PRRs), which are found on the cells of the innate immune system 4, 5, 6, 7. A primary signal, LPS, in conjunction with a secondary signal, ATP, is necessary for the activation of the inflammasome, a multiprotein complex that processes pro-IL-1&beta; to its mature, bioactive form 4, 5, 6, 8, 9, 10.
The whole blood assay requires minimal sample manipulation to assess cytokine production when compared to other methods that require labor intensive isolation and culturing of specific cell populations. This method differs from other whole blood stimulation assays; rather than diluting samples with a ratio of RPMI media, we perform a white blood cell count directly from diluted whole blood and therefore, stimulate a known number of white blood cells in culture 2. The results of this particular whole blood assay demonstrate a novel technique useful in elucidating patient cohorts presenting with autoinflammatory pathophysiologies.

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&amp;#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

We describe a simple immunoassay to measure the production of pro-inflammatory cytokines, such as IL-1 beta production, in patients presenting with autoinflammatory phenotypes. By activating cells in whole blood cultures with pathogen-associated molecular patterns, specifically with lipopolysaccharide, cytokine secretion can be conveniently evaluated in whole blood supernatants.

La medición precisa y simple de la citoquina pro-inflamatoria IL-1β mediante un análisis de sangre entera estimulación

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Investigación

Medicina

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

La segmentación y la medición de los volúmenes de grasa en modelos murinos de obesidad Usando rayos X de tomografía computarizada

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson's Disease

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease (PD) pathogenesis are less understood. Gene-environment interaction models have utility in unmasking the impact of specific cellular pathways in toxicity that may not be observed using a solely genetic or toxicant disease model alone.&#160;To evaluate if distinct LOX isozymes selectively contribute to PD-related neurodegeneration, transgenic (i.e. 5-LOX and 12/15-LOX deficient) mice can be challenged with a toxin that mimics cell injury and death in the disorder.&#160;Here we describe the use of a neurotoxin, 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP), which produces a nigrostriatal lesion to elucidate the distinct contributions of LOX isozymes to neurodegeneration related to PD. The use of MPTP in mouse, and nonhuman primate, is well-established to recapitulate the nigrostriatal damage in PD.&#160;The extent of MPTP-induced lesioning is measured by HPLC analysis of dopamine and its metabolites and semi-quantitative Western blot analysis of striatum for tyrosine hydroxylase (TH), the rate-limiting enzyme for the synthesis of dopamine. To assess inflammatory markers, which may demonstrate LOX isozyme-selective sensitivity, glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Iba-1 immunohistochemistry are performed on brain sections containing substantia nigra, and GFAP Western blot analysis is performed on striatal homogenates.&#160;This experimental approach can provide novel insights into gene-environment interactions underlying nigrostriatal degeneration and PD.

Gene-environment Interaction Models to Unmask Susceptibility Mechanisms in Parkinson&#039;s Disease

Lipoxygenase (LOX) isozymes can generate products that may increase or decrease neuroinflammation and neurodegeneration.&#160;A gene-environment interaction study could identify LOX isozyme-specific effects. Using the 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) model of nigrostriatal damage in two LOX isozyme-deficient transgenic lines allows for comparison of the contribution of LOX isozymes on dopaminergic integrity and inflammation.

Modelos De Interacción Gen-Ambiente Para Desenmascarar Los Mecanismos De Susceptibilidad En La Enfermedad De Parkinson

Lipoxygenase (LOX) activity has been implicated in neurodegenerative disorders such as Alzheimer&#39;s disease, but its effects in Parkinson&#39;s disease ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Evaluación de la viabilidad de la inyección de grasa humana en ratones desnudos con micro-tomografía computarizada

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

Eficacia terapéutica de un suplemento dietético para la Gestión de la halitosis en los perros

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to induce reflux of gastric contents, duodenal contents or mixed contents. Surgical procedures and general principles have been described in detail. A researcher with surgical experience should be able to grasp the technique after a short period of practice. After surgery, most mice can survive and develop reflux esophagitis similar to that in humans. However, it should be noted that histological differences between mouse and human esophagus are the inherent limitations of these surgical models. If used for research on Barrett&#8217;s esophagus and adenocarcinoma, these procedures may need to be combined with genetic modifications.

This article demonstrates surgical procedures of gastroesophageal reflux with mice. These models are useful tools for research on mechanisms and treatment of gastroesophageal reflux disease and potentially Barrett&#8217;s esophagus and esophageal adenocarcinoma.

Modelos quirúrgicos de reflujo gastroesofágico con ratones

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying tissue compartments, restricting the transport of smaller molecules across the epithelium and almost completely prohibiting epithelial macromolecular transport. This selectivity is determined by the mucous gel layer, which limits the transport of lipophilic molecules and both the apical receptors and tight junctional protein complexes of the epithelium. In vitro cell culture models of the epithelium are convenient, but as a model, they lack the complexity of interactions between the microbiota, mucous-gel, epithelium and immune system. On the other hand, in vivo assessment of intestinal absorption or permeability may be performed, but these assays measure overall gastrointestinal absorption, with no indication of site specificity. Ex vivo permeability assays using &#34;intestinal sacs&#34; are a rapid and sensitive method of measuring either overall intestinal integrity or comparative transport of a specific molecule, with the added advantage of intestinal site specificity. Here we describe the preparation of intestinal sacs for permeability studies and the calculation of the apparent permeability (Papp) of a molecule across the intestinal barrier. This technique may be used as a method of assessing drug absorption, or to examine regional epithelial barrier dysfunction in animal models of gastrointestinal disease.

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

This protocol describes the use of excised intestinal tissue preparations or "intestinal sacs" as an ex vivo model of intestinal barrier function. This model may be used to assess integrity of both the epithelial barrier and the mucous gel layer at specific intestinal sites in animal models of digestive disease.

Ex Vivo intestinal Sacs para evaluar la permeabilidad de la mucosa en modelos de enfermedad gastrointestinal

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Trasplante en la almohadilla del ratón de ovario grasa

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause severe problems, such as abdominal cramping, bloody diarrhea, and weight loss, in affected individuals. Unfortunately, there is no cure yet, and treatments only aim to alleviate symptoms. Current treatments include anti-inflammatory and immunosuppressive drugs that may cause severe side effects. This warrants the search for alternative treatment options, such as nutritional supplements, that do not cause side effects. Before their application in clinical studies, such compounds must be rigorously tested for effectiveness and security in animal models. A reliable experimental model is the dextran sulfate sodium (DSS) colitis model in mice, which reproduces many of the clinical signs of ulcerative colitis in humans. We recently applied this model to test the beneficial effects of a nutritional supplement containing vitamins C and E, L-arginine, and &#969;3-polyunsaturated fatty acids (PUFA). We analyzed various disease parameters and found that this supplement was able to ameliorate edema formation, tissue damage, leukocyte infiltration, oxidative stress, and the production of pro-inflammatory cytokines, leading to an overall improvement in the disease activity index. In this article, we explain in detail the correct application of nutritional supplements using the DSS colitis model in C57Bl/6 mice, as well as how disease parameters such as histology, oxidative stress, and inflammation are assessed. Analyzing the beneficial effects of different diet supplements may then eventually open new avenues for the development of alternative treatment strategies that alleviate IBD symptoms and/or that prolong the phases of remission without causing severe side effects.

Current treatments of inflammatory bowel diseases (IBD) aim at alleviating disease symptoms but may cause severe side effects. Thus, alternative strategies are being investigated in animal colitis models. Here, we explain how the beneficial effects of diet supplements on clinical IBD signs are analyzed in such a colitis model.

Analizar los efectos beneficiosos de los suplementos nutricionales sobre las funciones epitelial intestinal de barrera durante Experimental Colitis

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...