Apoyado en parte por una subvención del Instituto Nacional del Cáncer 1R03CA172923.

Declaración de Ética: El uso de ratones en la investigación sólo es aceptable en los casos en que podría avanzar en la comprensión humana de la biología fundamental o hacia el eventual tratamiento de la enfermedad. 1. Orden <ol><li> Compra hembra C57BL / 6 ratones (edad de 6 - 8 semanas), 5 ratones por grupo. Se requieren varios días para los ratones para ajustar. </li></ol> 2. Preparación de las células B16-BL6 <ol><li> Retire las placas de cultivo celular de incubadora a 37 grados y coloque en una campana estéril. Las placas deben ser aproximadamente 70% confluentes con células de melanoma murino B16-BL6. A mayor confluencia puede alterar las células potencial metastásico. </li><li> Añadir 1 ml de 0,05% tripsina-EDTA por placa, dejar reposar durante 1 minuto, y luego aspirar la solución de tripsina-media. </li><li> Añadir 1 ml de tripsina por placa y las placas de volver a la incubadora durante 10 min. </li><li> Después de mover las placas de la incubadora a la campana estéril, añadir 4 ml de suero libre de Rosewell Parque Memorial Institute Medium (RPMI) a cada placa. </li><li> Recoger las células con una pipeta estéril, motorizado. Expulsar células contra la parte inferior de la placa, con la punta presionado en un muy ligero ángulo, para romper las células. Repetir varias veces con el fin de asegurar la separación adecuada de los grupos de células, que de otro modo podrían obstruir la aguja de inyección. Recordar y transferir a un tubo cónico de 50 ml. </li><li> Use un hemocitómetro para determinar la densidad celular. Mantener el número total de células B16-BL6 constante, determinar el volumen de RPMI libre de suero necesario para alcanzar concentraciones finales de 0, 0,065, 0,015, 0,25, y 0,5 millones de células / ml. </li><li> Igualmente alícuota los medios de comunicación en el tubo de 50 ml a 15 ml tubos cónicos. Centrifugar los tubos cónicos a 2.250 xg durante 5 min. Decantar los medios de comunicación. Añadir un volumen apropiado de RPMI libre de suero y confirmar la densidad celular deseada a través de hemocitómetro. Ajuste densities- añadiendo RPMI adicional o hilado y resuspensión en un volumen-más pequeño en consecuencia. </li><li> Alícuotas 500 lde cada suspensión celular en 1,8 ml etiquetados tubos en hielo. </li></ol> 3. vena de la cola de inyección <ol><li> Tome un ratón, que tuvo lugar por la cola, y lo guiará trasera por primera vez en el limitador del ratón. Con el torso en la cámara principal del retenedor, con la cola fuera de ella, tira del ratón hacia el final del inmovilizador. Inserte el limitador-émbolo, sin dejar de empujar hasta que el ratón es seguro. </li><li> Girar el ratón 90 grados de tal manera que una de las venas de la cola lateral esté orientado hacia arriba. El uso de una almohadilla con alcohol, limpie vigorosamente el lado de la cola del ratón, en particular cuando la vena de la cola es más visible. Nota: Una buena iluminación es esencial para la visualización de la vena de la cola efectiva en 6J / B57BL. Las lámparas de calor o almohadillas de cirugía climatizada, aunque no es necesario, también ayudan a aumentar el volumen de la vena de la cola. </li><li> En una campana de cultivo estéril, recoger 300 l de medio de cultivo celular del tubo de 2 millones de células / ml. Invertir la aguja, moviendo los side y empujando el émbolo, para expulsar las burbujas de la jeringa. Expulsar cultivo RPMI para dar lugar a un volumen final de 250 l. </li><li> Extender el ratón de cola con la mano no dominante. Mantenga la cola con el extremo proximal de la cola elevada con el dedo índice de la mano no dominante, y la parte distal de la cola deprimido con el pulgar. Nota: En este modo, la vena de la cola se mantiene en una posición lateral, paralela a la superficie de contención, con una entrada congruente posible en la parte más distal de la cola. </li><li> Insertar la aguja en la vena de la cola, hacia el extremo distal, en un ángulo descendente minutos para empezar, y luego ajustar la aguja para que coincida con el ángulo de la vena de la cola a la inserción adicional (bajando extremo del émbolo de la jeringa respecto a la aguja) . </li><li> Insertar la aguja aproximadamente 1 cm en la vena de la cola. Después de la inserción, comienzan a empujar el émbolo, se mantiene la aguja constante. Nota: Si la aguja está en la vena de la cola y el extremo de la aguja es not obstruido los medios de comunicación debe fluir sin obstáculos en la vena. inyección eficaz se caracteriza por depuración de la sangre de la vena. Si hay resistencia, o una burbuja empieza a formar en el lugar de la inyección, retire la aguja e inténtelo de nuevo en una ubicación más proximal a lo largo de la vena de la cola. </li><li> Retire la aguja de la vena y lo descarta. Mantenga una gasa contra el sitio de entrada para detener cualquier sangrado. </li><li> Retire el émbolo del retenedor y colocar el puntero del ratón en la jaula destinatario. </li><li> Repita este procedimiento para todas las demás concentraciones. Nota:. Pulmón establecimiento focos tarda aproximadamente 2 - 3 semanas, con una variabilidad dependiendo de la línea celular y el tamaño deseado de los focos 9 En el ínterin, los ratones deben ser monitorizados para detectar síntomas que podrían justificar la eutanasia temprano, como jadeo excesivo. </li></ol> 4. Contar el pulmón Focos <ol><li> La eutanasia el ratón mediante la colocación de una cámara de CO 2 y la exposición al 100% de CO2 </sub&gt; introdujo en 10 a 30% de volumen de la cámara por minuto durante 5 minutos. Siga con una dislocación cervical. </li><li> Splay el ratón sobre la espuma de poliestireno. Usando tijeras quirúrgicas, crear una incisión quirúrgica a lo largo del esternón. </li><li> Haga dos incisiones adicionales, tanto de la parte superior de la incisión del esternón y la ramificación hacia los hombros del ratón, la exposición de la caja torácica. </li><li> Hacer dos cortes, cada uno a lo largo de los lados laterales del esternón, para eliminar de la caja torácica del torso, la exposición de los pulmones y el corazón. </li><li> Sosteniendo el corazón con pinzas quirúrgicas, cortar la tráquea y el esófago, liberando el corazón y los pulmones del ratón. Colocar debajo de un microscopio de disección, un aumento de 10x, para una mejor visualización. </li><li> Diseccionar el corazón de los pulmones y retire el timo, dejando sólo los dos pulmones. </li><li> Con los pulmones bajo un microscopio de disección, comenzar a contar los focos de pulmón. Cada focos debe aparecer como una intromisión circular, de color marrón en la superficie de los pulmones. <ol><li> porla coherencia entre los ratones, contar el número de focos en la superficie de un lóbulo, y luego invertir ese lóbulo. Hacer cada uno de los cuatro lóbulos permite individualmente para el recuento más fácil. </li></ol></li><li> Guardar y fijar los pulmones si se realiza IHC, de lo contrario, desechar los restos. </li></ol>

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Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

Las células tumorales circulantes de una inyección en vena de cola representar las metástasis que evaden sitios de crecimiento primario y migrar a través de rutas como el torrente sanguíneo o el sistema linfático, de vez en cuando establecerse en los lechos capilares de lugares distantes. 14 el protocolo descrito anteriormente sirve como un modelo para secundaria metástasis. Con un número óptimo de células B16-BL6 inyectado, los experimentadores pueden determinar el efecto relativo de un fármaco administrado o población de células inmunes, post-neutralización, sobre la metástasis de células de cáncer. Este protocolo tiene sus limitaciones. Las células tumorales circulantes se han seleccionado por su capacidad de metástasis y por lo tanto son no inmunogénicos, que tiene menores niveles de mayor histocompatibilidad de clase 1 moléculas. 12 Además, la introducción repentina y agrupada de gran número de metástasis es a diferencia de la situación típica en pacientes donde un pequeño número de células tumorales metastásicasdisipar durante un período prolongado de tiempo de la localización del tumor primario. Además, las células tumorales por vía intravenosa introducidas son de cultivo de tejidos y no de un origen del tumor primario. Por lo tanto, estas células son a diferencia de las metástasis secundarias que resultan de alteraciones en la adhesión celular, la migración, el reconocimiento inmune y el receptor establecimiento de órganos. 15,16 Un protocolo alternativo sería la inyección subcutánea de B16 / BL6 para la generación de tumores primarios y el análisis de los resultantes metástasis pulmonares &quot;espontáneas&quot;. Se han encontrado estas metástasis &quot;espontáneas&quot; para contener una mayor heterogeneidad que sus contrapartes &quot;experimentales&quot;, más muy similares a los de los pacientes humanos. El protocolo es limitante en su capacidad para determinar la influencia de un compuesto experimental sobre la metástasis. Con una inyección vena de la cola lateral, el número de células de melanoma inyectadas en el torrente sanguíneo se puede aproximar a través de hemocytometer. Con la metástasis &quot;espontánea&quot;, sin embargo, hay una mayor heterogeneidad entre los tumores, la adición de una variable adicional para el número de focos de pulmón resultante. 16 En conclusión, el modelo de melanoma murino B16-BL6 vena de la cola representa un modelo sencillo para determinar la influencia de un tratamiento o la inmunoterapia en la metástasis. Por vía intravenosa la inyección de células tumorales circulantes, los investigadores pueden replicar, en cierta medida, los pacientes post-metástasis. Teniendo en cuenta los efectos destructivos de células tumorales metastásicas en los pacientes de cáncer, este modelo es una herramienta poderosa para la comprensión del proceso de múltiples etapas de la metástasis.

La metástasis es una causa importante de muerte entre los pacientes con tumores malignos. El proceso de la diseminación metastásica de las células cancerosas es poco conocida pero parece implicar varios pasos, incluyendo la invasión de los tejidos adyacentes, intravasación en los vasos linfáticos y la vasculatura, la supervivencia y la translocación dentro del sistema circulatorio, la extravasación de la vasculatura en el lugar de la metástasis, la adaptación al nuevo microambiente del nuevo sitio, y la colonización en el nuevo sitio de la proliferación y la formación de tumores secundarios. 1 Cada uno de estos eventos biológicos implican la transformación, la difusión y la supervivencia de las células tumorales metastásicas. Por ejemplo, la transformación del fenotipo epitelial de la célula tumoral en un fenotipo mesenquimal, junto con la interacción exitosa con la matriz extracelular, que puedan invadir los tejidos adyacentes y metastatizar a otras partes del cuerpo. 2,3 Además, estos metastásico Célulasdebe sobrevivir en el torrente sanguíneo circulante y evadir la vigilancia inmune del huésped. 4,5 Por último, cuando se implanta en un sitio distante dentro del cuerpo, las células tumorales deben adaptarse a su microambiente con el fin de proliferar y formar tumores secundarios. 6,7 Por lo tanto , a pesar de la metástasis es un fenómeno común entre los pacientes con cáncer, las células tumorales metastásicas tienen múltiples áreas de vulnerabilidad que son susceptibles de intervención terapéutica. Dada la naturaleza inmunogénica de melanoma, y el reciente interés en inmunoterapias, modelos para el melanoma son cada vez más útil. 8 Sólo en los Estados Unidos, el melanoma es la causa de un estimado de 9.000 muertes al año. 9 lugares comunes de metástasis de melanoma son los huesos, el cerebro , el hígado y los pulmones. La mayoría de las metástasis a sitios distantes se producen a través del torrente sanguíneo. Las células tumorales circulantes en la sangre puede eludir aclaramiento inmunitario, llegar a un lecho capilar de un órgano distal yinvadir a través de las células endoteliales de los vasos sanguíneos con el fin de establecer con éxito a sí mismos. 4-7,10, 11 Para imitar los fenómenos comunes y virulentas de metástasis, se ha creado la línea de células B16-BL6 murino. A difunto de la C57BL / 6 línea celular de melanoma parental B16-F0, B16-BL6 es el producto final de 10 selecciones sucesivas de metástasis de pulmón de la inyección intravenosa (que resulta en B16-F10), seguido de 6 selecciones sucesivas de penetración de la membrana de la vejiga. 12 Como tal, es una línea de células de melanoma fiable para el establecimiento de focos metastásicos en el ratón, sobre todo cuando se inyecta por vía intravenosa. 13 Después de la inyección de una cantidad suficiente de B16-BL6 células en la vena de la cola de un ratón 6 / B57BL, seguido de dos o más semanas para permitir la implantación y el crecimiento de las células B16 / BL6, focos metastásicos se formará en los pulmones. Tras la eutanasia y la inspección por microscopía de disección, el número defocos individuales presentes se puede cuantificar. Esto, a su vez, puede ser usado para establecer un efecto dosis-metástasis, como el número de células B16-BL6 inyectados se correlaciona con el número de focos formados en la superficie de los pulmones. Este modelo es conocido como &quot;la metástasis experimental&quot;, donde se introducen directamente las células conocidas metastásico en el torrente sanguíneo, lo que facilita una rápida dispersión y establecimiento y predecible en los pulmones, el hígado, u otro órgano de investigación. Esto está en contraste con la &quot;metástasis espontánea&quot;, donde se implantan células tumorales, a menudo por vía subcutánea, y las metástasis se originan a partir orgánicamente eliminar las células cancerosas. 14,15 Es importante para inyectar una cantidad apropiada de células B16 / BL6 en las venas de la cola de los ratones. Demasiados, y los pulmones serán cubiertos con metástasis y la vecina focos serán indistinguibles unos de otros. Demasiado pocos, y la influencia de un agente terapéutico será indiscernible debido a vari inherenteciones entre las inyecciones. Con el fin de obtener un número óptimo de focos en los pulmones de los ratones C57BL / 6, es necesario correlacionar el número de células inyectadas con la cantidad de focos metastásicos establecido sobre la superficie de los pulmones, teniendo en cuenta la distinguibilidad de individuo focos. Este protocolo demostrará un modelo de melanoma murino metastásico de ratones C57BL / 6.

<table><tbody><tr><td>Trypsin</td><td>Corning</td><td>MT25052CV</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>MT15040CM</td><td></td></tr><tr><td>Phase Contraast Hemacytometer</td><td>Hausser</td><td>02-671-54</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Fine IV Insulin Syringes</td><td>BD</td><td>14-829-1D</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pads</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Restrainer</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9999969</td><td>Restrainer choice depends on age/size of mice</td></tr><tr><td>Heating Pad</td><td>Harry Schein</td><td>NC0012697</td><td>Optional</td></tr></tbody></table>

injection of syngeneic murine melanoma cells to determine their metastatic potential in the lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Tras una inspección visual, la variación en los focos de la superficie es evidente. Contar el número de tumores en virtud de un microscopio de disección debe producir una relación lineal entre el número de células tumorales inyectadas y el número de focos resultante y contable. El uso de un número óptimo de células inyectables, el objetivo es una donde los pulmones no están completamente cubiertas, ya que están en 500.000 células / ml en la Figura 1A, y que no están cubiertos demasiado escasa, ya que están en 62.500 células / ml y 125.000 células / ml. Esto también es cuantificable por correlación lineal (Figura 1B). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54039/54039fig1.jpg" /> Figura 1. Los focos de pulmón resultante de vena de la cola inyectaron células B16 / BL6. (A) focos de pulmón puede ser visualizado en la superficie de los pulmones de ratones C57BL / 6 como masas circulares marrones (focos representante en virtud de las flechas). Como los antrosdad del cultivo celular inyectada (por encima de cada imagen) aumenta, también lo hace el número correspondiente de resultante focos de pulmón (por debajo de cada imagen). Los pulmones del ratón con la mayor densidad de células inyectadas tiene la mayor cobertura visual de focos de pulmón. Las barras de escala representan 20 mm. (B) Enumeración de los focos de pulmón en relación con la densidad de cultivo de células. Existe una relación aproximadamente lineal por encima de 125.000 células / ml, según lo determinado por hemocitómetro. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54039/54039fig1large.jpg" target="_blank">Por favor, haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>

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Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

La inyección de células de melanoma murino singénico para determinar su potencial metastásico en los pulmones

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

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Medicine

17.5K vistas.  Beth Israel Deaconess Medical Center & Harvard Medical School. Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

Video: Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Experimental Metastasis Assay

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients. To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established using immunodeficient mice. This article delineates the procedures involved in this assay, including sample preparation, intravenous injection, and culturing cells from lung metastases. Briefly, a pre-determined number of human cancer cells were prepared in vitro and directly injected into the circulation of immunodeficient mice through their tail veins. A small number of cells survive the turbulence in the circulation and grow as metastases in internal organs, such as lung. The injected mice are dissected after a certain period. The tissue distribution of metastases is determined under a dissecting microscope. The number of metastases in a specific tissue is counted and it directly correlates with the metastatic ability of the injected cancer cells. The arisen metastases are isolated and cultured in vitro as cell lines, which often show enhanced metastatic abilities than the parental line when injected again into immunodeficient mice. These highly metastatic derivatives become useful tools for identifying genes or molecular pathways that regulate metastatic progression.

This article describes the procedures of an experimental metastasis assay that is used to determine the metastatic potential of human cancer cell lines.

Ensayo experimental de metástasis

Metastasis is the leading cause of death in cancer patients.  To understand the mechanism of metastasis, an experimental metastasis assay was established ...

Investigación

Medicina

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Investigación sobre el cáncer

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous metastasis models are available. Thus, the experimental metastasis model involving tail-vein injection of suitable cell lines is a mainstay of metastasis research. When cancer cells are injected into the lateral tail-vein, the lung is their preferred site of colonization. A potential limitation of this technique is the accurate quantification of the metastatic lung tumor burden. While some investigators count macrometastases of a pre-defined size and/or include micrometastases following sectioning of tissue, others determine the area of metastatic lesions relative to normal tissue area. Both of these quantification methods can be exceedingly difficult when the metastatic burden is high. Herein, we demonstrate an intravenous injection model of lung metastasis followed by an advanced method for quantifying metastatic tumor burden using image analysis software. This process allows for investigation of multiple end-point parameters, including average metastasis size, total number of metastases, and total metastasis area, to provide a comprehensive analysis. Furthermore, this method has been reviewed by a veterinary pathologist board-certified by the American College of Veterinary Pathologists (SEK) to ensure accuracy.

Intravenous injection of cancer cells is often used in metastasis research, but the metastatic tumor burden can be difficult to analyze. Herein, we demonstrate a tail-vein injection model of metastasis and include a novel approach to analyze the resulting metastatic lung tumor burden.

Análisis patológico de metástasis pulmonares después de la inyección lateral de células tumorales en la vena de la cola

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was established using robust, reproducible in vivo models and standardized methods to identify novel players in melanoma metastasis. This approach allows for data inference at specific experimental stages to precisely characterize a gene's role in metastasis. Models are established by introducing genetically modified melanoma cells via intracardiac, intradermal, or subcutaneous injections into mice, followed by monitoring with serial in vivo imaging. Once preestablished endpoints are reached, primary tumors and/or metastases-bearing organs are harvested and processed for various analyses. Tumor cells can be sorted and subjected to any of several 'omics' platforms, including single-cell RNA sequencing. Organs undergo imaging and immunohistopathological analyses to quantify the overall burden of metastases and map their specific anatomic location. This optimized pipeline, including standardized protocols for engraftment, monitoring, tissue harvesting, processing, and analysis, can be adopted for patient-derived, short-term cultures and established human and murine cell lines of various solid cancer types.

This article describes a workflow of techniques employed for testing novel candidate mediators of melanoma metastasis and their mechanism(s) of action.

Una plataforma de descubrimiento robusta para la identificación de nuevos mediadores de la metástasis del melanoma

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Imágenes in vivo para medir la metástasis pulmonar espontánea de células tumorales de mama inyectadas ortotópicamente

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo Diagnóstico por imágenes para medir la metástasis pulmonar espontánea de células tumorales de mama inyectadas ortotópicamente

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is essential to understand the process and related mechanisms of prostate cancer bone metastasis for developing new therapeutics. For this, an animal model of bone metastasis is an essential tool. Here, we report detailed procedures to generate a bone metastasis mouse model via intra-cardiac injection of prostate cancer cells. A bioluminescence imaging system can determine whether prostate cancer cells have been accurately injected into the heart and monitor cancer cell metastasis since it has great advantages in monitoring metastatic lesion development. This model replicates the natural development of disseminated cancer cells to form micro-metastases in the bone and imitates the pathological process of prostate cancer bone metastasis. It provides an effective tool for further exploration of the molecular mechanisms and the in vivo therapeutic effects of this disease.

Here, we present a protocol for the intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to generate a mouse model with bone metastasis lesions.

Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Experimental Melanoma Immunotherapy Model Using Tumor Vaccination with a Hematopoietic Cytokine

Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) is a hematopoietic cytokine that promotes the survival and differentiation of dendritic cells (DCs). It has been used in tumor vaccines to activate innate immunity and enhance antitumor responses. This protocol demonstrates a therapeutic model using cell-based tumor vaccine consisting of Flt3L-expressing B16-F10 melanoma cells along with phenotypic and functional analysis of immune cells in the tumor microenvironment (TME). Procedures for cultured tumor cell preparation, tumor implantation, cell irradiation, tumor size measurement, intratumoral immune cell isolation, and flow cytometry analysis are described. The overall goal of this protocol is to provide a preclinical solid tumor immunotherapy model, and a research platform to study the relationship between tumor cells and infiltrating immune cells. The immunotherapy protocol described here can be combined with other therapeutic modalities, such as immune checkpoint blockade (anti-CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-L1 antibodies) or chemotherapy in order to improve the cancer therapeutic effect of melanoma.

The protocol presents a cancer immunotherapy model using cell-based tumor vaccination with Flt3L-expressing B16-F10 melanoma. This protocol demonstrates the procedures, including preparation of cultured tumor cells, tumor implantation, cell irradiation, measurement of tumor growth, isolation of intratumoral immune cells, and flow cytometry analysis.

Modelo experimental de inmunoterapia de melanoma utilizando vacunación tumoral con una citocina hematopoyética

Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) is a hematopoietic cytokine that promotes the survival and differentiation of dendritic cells (DCs). It has been ...

<meta charset="utf8"></head><body>Nanofármaco dirigido al miRNA-10b oncogénico para el tratamiento del cáncer de mama metastásico

Monitoring of Nanodrug Accumulation in Murine Breast Cancer Metastases

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have been shown to be associated with the metastatic potential of breast cancer and are implicated in tumor cell migration, invasion, and viability. However, it can be difficult to deliver an inhibitory RNA molecule to the tissue of interest. To overcome this challenge and deliver active antisense oligonucleotides to tumors, we utilized magnetic iron oxide nanoparticles as a delivery platform. These nanoparticles target tissues with increased vascular permeability, such as sites of inflammation or cancer. Delivery of these nanoparticles can be monitored in vivo by magnetic resonance imaging (MRI) due to their magnetic properties. Translation of this therapeutic approach into the clinic will be more accessible because of its compatibility with this relevant imaging modality. They can also be labeled with other imaging reporters such as a Cy5.5 near-infrared optical dye for correlative optical imaging and fluorescence microscopy. Here, we demonstrate that nanoparticles labeled with Cy5.5 and conjugated to therapeutic oligomers targeting oncogenic miRNA-10b (termed MN-anti-miR10b, or &#34;nanodrug&#34;) administered intravenously accumulate in metastatic sites, opening a possibility for therapeutic intervention of metastatic breast cancer.

<meta charset="utf8"></head><body>Monitorización de la acumulación de nanofármacos en metástasis de cáncer de mama murino

Here, we describe the protocol for in vivo delivery of magnetic iron oxide nanoparticles carrying RNA oligomers to metastatic breast cancer in animal models, providing a clinically viable approach for the therapeutic silencing of oncogenic nucleic acids.

Monitorización de la acumulación de nanofármacos en metástasis de cáncer de mama murino

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have ...

La inyección de células de melanoma murino singénico para determinar su potencial metastásico en los pulmones

Resumen

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Capítulos en este video

Ensayo experimental de metástasis

Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones

Análisis patológico de metástasis pulmonares después de la inyección lateral de células tumorales en la vena de la cola

Una plataforma de descubrimiento robusta para la identificación de nuevos mediadores de la metástasis del melanoma

In vivo Diagnóstico por imágenes para medir la metástasis pulmonar espontánea de células tumorales de mama inyectadas ortotópicamente

In vivo Diagnóstico por imágenes para medir la metástasis pulmonar espontánea de células tumorales de mama inyectadas ortotópicamente

Inyección intracardíaca de células de cáncer de próstata humano para crear un modelo de ratón xenoinjerto de metástasis ósea

Modelo experimental de inmunoterapia de melanoma utilizando vacunación tumoral con una citocina hematopoyética

Monitorización de la acumulación de nanofármacos en metástasis de cáncer de mama murino

Monitorización de la acumulación de nanofármacos en metástasis de cáncer de mama murino