Name: injection of syngeneic murine melanoma cells to determine their metastatic potential in the lungs
Uploaded: 2016-05-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
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Supportato in parte da una sovvenzione del National Cancer Institute 1R03CA172923.

Etica Dichiarazione: L&#39;uso di topi nella ricerca è accettabile solo nei casi in cui si potrebbe avanzare la comprensione umana della biologia fondamentale o verso l&#39;eventuale trattamento della malattia. 1. Ordine <ol><li> Acquisto femminile C57BL / 6 topi (all&#39;età di 6 - 8 settimane), 5 topi per gruppo. Consentire diversi giorni per i topi per regolare. </li></ol> 2. Preparazione di cellule B16-BL6 <ol><li> Rimuovere piastre di coltura di cellule da incubatore a 37 gradi e posto in una cappa sterile. Le piastre devono essere circa il 70% confluenti con cellule di melanoma murino B16-BL6. Una maggiore confluenza può alterare le cellule potenziale metastatico. </li><li> Aggiungere 1 ml di 0,05% tripsina-EDTA per piastra, lasciate riposare per 1 minuto, e poi aspirare la soluzione di tripsina-media. </li><li> Aggiungere 1 ml di tripsina per piastra e tornare piastre incubatrice per 10 min. </li><li> Dopo aver spostato le piastre dal termostato alla cappa sterile, aggiungere 4 ml di privo di siero Rosewell Park Memorial Institute Medium (RPMI) per ogni piatto. </li><li> Raccogliere le cellule con una sterile, pipetta motorizzato. Estrarre cellule contro il fondo della piastra, con la punta pressata a una leggera angolazione, per rompere le cellule. Ripetere più volte al fine di garantire un&#39;adeguata separazione dei grumi di cellule, che altrimenti potrebbero intasare l&#39;ago espulsione. Ricordare e trasferire in una provetta conica da 50 ml. </li><li> Utilizzare un emocitometro per determinare la densità cellulare. Mantenere il numero totale di cellule B16-BL6 costante, determinare il volume di RPMI senza siero necessario per raggiungere concentrazioni finali di 0, 0,065, 0,015, 0,25 e 0,5 milioni di cellule / ml. </li><li> Altrettanto un&#39;aliquota media del tubo da 50 ml a 15 ml provette coniche. Centrifugare le provette coniche a 2.250 xg per 5 min. Decantare il supporto. Aggiungere un volume adeguato di RPMI senza siero e confermare la densità cellulare desiderato tramite emocitometro. Regolare densities- con l&#39;aggiunta di ulteriore RPMI o filatura e risospensione in un volume- più piccolo di conseguenza. </li><li> Aliquota 500 microlitridi ciascuna sospensione cellulare in etichettato 1,8 ml provette su ghiaccio. </li></ol> 3. Tail Vein Injection <ol><li> Prendere un topo, che si tiene per la coda, e guidarla posteriore prima nel dispositivo di immobilizzazione del mouse. Con il torso nella camera principale del dispositivo di immobilizzazione, con la coda fuori, tirare il mouse verso la fine del dispositivo di immobilizzazione. Inserire il dispositivo di immobilizzazione-stantuffo, continuando a spingere fino a quando il mouse è sicuro. </li><li> Ruotare il mouse 90 gradi in modo che una delle vene coda laterale rivolta in alto. Usando un tampone di alcool, vigorosamente pulire il lato di coda del topo, in particolare quando la vena della coda è più visibile. Nota: Una buona illuminazione è essenziale per la coda efficace visualizzazione vena sul B57BL 6J /. lampade di calore o pastiglie chirurgia riscaldata, mentre non necessario, aiuterà anche aumentando il volume della vena della coda. </li><li> In una cappa sterile cultura, raccogliere 300 ml di terreni di coltura delle cellule dal / tubo di 2 milioni di cellule ml. Invertire l&#39;ago, sfogliando le side e spingendo lo stantuffo, per espellere le bolle dalla siringa. Estrarre coltura RPMI-tradursi in un volume finale di 250 microlitri. </li><li> Estendere il mouse-coda con la mano non dominante. Tenere la coda con l&#39;estremità prossimale della coda elevata con l&#39;indice della mano non dominante, e la porzione distale della coda premuto con il pollice. Nota: In questo modo, la vena della coda viene tenuto in posizione laterale, parallelo alla superficie restrainer, con una voce congruente possibile nella parte più distale della coda. </li><li> Inserire l&#39;ago nella vena della coda, verso l&#39;estremità distale, ad un angolo verso il basso minuti per cominciare, e quindi regolare l&#39;ago per abbinare l&#39;angolo della vena caudale dopo ulteriore inserimento (abbassamento fine stantuffo della siringa rispetto all&#39;ago) . </li><li> Inserire l&#39;ago di circa 1 cm nel vena della coda. Dopo l&#39;inserimento, iniziano a spingere lo stantuffo, tenendo l&#39;ago costante. Nota: Se l&#39;ago è in vena della coda e l&#39;estremità dell&#39;ago è not ostruito i media dovrebbero fluire senza ostacoli nella vena. iniezione efficace è caratterizzata da depurazione del sangue dalla vena. Se c&#39;è resistenza, o una bolla inizia a formarsi il sito in iniezione, rimuovere l&#39;ago e riprovare in una posizione più prossimale lungo la vena della coda. </li><li> Rimuovere l&#39;ago dalla vena e disfarsene. Tenere garza contro il sito di entrata per fermare le emorragie. </li><li> Rimuovere lo stantuffo dalla restrainer e posizionare il mouse nella gabbia destinatario. </li><li> Ripetere l&#39;operazione per tutte le altre concentrazioni. Nota:. Lung stabilimento foci richiede circa 2 - 3 settimane, con variabilità a seconda della linea cellulare e la dimensione desiderata dei fuochi 9 Nel frattempo, i topi devono essere monitorati per sintomi che potrebbero giustificare l&#39;eutanasia presto, come ansimante eccessivo. </li></ol> 4. Contare il polmone Foci <ol><li> Euthanize il mouse posizionando in una camera di CO 2 ed esponendo al 100% CO 2 </sub&gt; introdotto al 10-30% del volume della camera per minuto per 5 min. Seguire con una dislocazione cervicale. </li><li> Splay il mouse sul polistirolo. Utilizzando forbici chirurgiche, creare una incisione chirurgica lungo lo sterno. </li><li> Fare due incisioni aggiuntivi, sia dalla parte superiore dell&#39;incisione sterno e ramificazione verso le spalle del mouse, esponendo la gabbia toracica. </li><li> Fare due tagli, ciascuno lungo i lati laterali dello sterno, per rimuovere la gabbia toracica dal tronco, esponendo i polmoni e il cuore. </li><li> Tenendo cuore con le pinzette chirurgiche, tagliare l&#39;esofago e la trachea, liberando il cuore ei polmoni dal mouse. Mettere sotto un microscopio da dissezione, a 10X di ingrandimento, per una migliore visualizzazione. </li><li> Sezionare cuore dai polmoni e rimuovere il timo, lasciando solo i due polmoni. </li><li> Con i polmoni sotto un ambito dissezione, cominciare a contare i fuochi polmone. Ogni foci dovrebbe apparire come circolare, obtrusion marrone sulla superficie dei polmoni. <ol><li> Percoerenza tra topi, contare il numero di focolai sulla superficie di un lobo, e poi invertire tale lobo. Facendo ciascuno dei quattro lobi permette singolarmente per il conteggio più facile. </li></ol></li><li> Salvare e fissare i polmoni se l&#39;esecuzione di IHC, in caso contrario, eliminare i resti. </li></ol>

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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Circolanti cellule tumorali da una iniezione coda vena rappresentare le metastasi che eludono i siti di crescita primaria e migrare attraverso percorsi come il sangue o il sistema linfatico, di tanto in tanto si stabilisce nei letti capillari di luoghi distanti. 14 Il protocollo sopra descritto serve da modello per la secondaria metastasi. Con un numero ottimale di cellule B16-BL6 iniettato, sperimentatori in grado di determinare l&#39;effetto relativo di un farmaco somministrato o di una popolazione di cellule immunitarie, post-neutralizzazione, sulle metastasi delle cellule tumorali. Questo protocollo ha limitazioni. Le cellule tumorali circolanti sono state selezionate per la loro capacità di metastatizzare e sono quindi non immunogenica, con livelli inferiori di maggiore di istocompatibilità di classe complessa 1 molecole. 12 Inoltre, l&#39;introduzione improvvisa e cluster di gran numero di metastasi è diverso scenario tipico in pazienti dove un piccolo numero di cellule tumorali metastatichedissipare per un periodo prolungato di tempo dalla localizzazione del tumore primario. Inoltre, le cellule tumorali per via endovenosa introdotte sono da coltura tissutale e non di origine tumore primario. Pertanto, queste cellule sono a differenza delle metastasi secondarie che derivano da alterazioni nella adesione cellulare, la migrazione, il riconoscimento immunitario e stabilimento organo ricevente. 15,16 Un protocollo alternativo sarebbe l&#39;iniezione sottocutanea di B16 / BL6 per la generazione di tumori primari e l&#39;analisi delle risultanti metastasi polmonari &quot;spontanee&quot;. Queste metastasi &quot;spontanee&quot; sono stati trovati per contenere più l&#39;eterogeneità delle loro controparti &quot;sperimentali&quot;, più strettamente corrispondono a quelli dei pazienti umani. Il protocollo è limitante nella sua capacità di determinare l&#39;influenza di un composto sperimentale di metastasi. Con una laterale iniezione vena della coda, il numero di cellule di melanoma iniettato nel sangue può essere approssimata tramite hemocytometer. Con metastasi &quot;spontanee&quot;, tuttavia, vi è una maggiore eterogeneità tra tumori, aggiungendo un&#39;ulteriore variabile per il numero di foci risultante polmonare. 16 In conclusione, la B16-BL6 modello di melanoma murino vena della coda rappresenta un modello semplice per determinare l&#39;influenza di un trattamento o immunoterapia in metastasi. In via endovenosa iniezione di cellule tumorali circolanti, i ricercatori possono replicare, in una certa misura, i pazienti post-metastasi. Considerando gli effetti distruttivi delle cellule tumorali metastatiche nei pazienti affetti da cancro, questo modello è un potente strumento per la comprensione del processo multistep di metastasi.

Metastasi è una delle principali cause di morte tra i pazienti con neoplasie. Il processo di diffusione metastatica delle cellule tumorali è poco conosciuta, ma sembra coinvolgere diversi passaggi, tra cui invasione dei tessuti adiacenti, intravasation nei vasi linfatici e vasi, la sopravvivenza e la traslocazione all&#39;interno del sistema circolatorio, stravaso dal sistema vascolare presso il sito di metastasi, l&#39;adattamento al nuovo microambiente del nuovo sito, e la colonizzazione al nuovo sito proliferazione e formazione di tumori secondari. 1 Ciascuno di questi eventi biologici coinvolgono la trasformazione, la diffusione e la sopravvivenza delle cellule tumorali metastatiche. Per esempio, la trasformazione del fenotipo epiteliale della cellula tumorale in un fenotipo mesenchimale, accoppiato con l&#39;interazione positiva con la matrice extracellulare, consentire loro di invadere i tessuti adiacenti e metastasi in altre parti del corpo. 2,3 Inoltre, questi metastatico celluledeve sopravvivere all&#39;interno del flusso sanguigno circolante e evadere la sorveglianza immunitaria dall&#39;host. 4,5 Infine, quando impiantato in un sito lontano all&#39;interno del corpo, le cellule tumorali devono adattarsi al loro microambiente per proliferare e formare tumori secondari. 6,7 Pertanto , anche se le metastasi è un fenomeno comune tra i pazienti affetti da cancro, le cellule tumorali metastatiche hanno molteplici aree di vulnerabilità che sono suscettibili di intervento terapeutico. Data la natura immunogenica del melanoma, e il recente interesse per le immunoterapie, modelli per il melanoma sono sempre più utile. 8 Nei soli Stati Uniti, il melanoma è la causa di una stima di 9.000 morti l&#39;anno. 9 sedi comuni di metastasi del melanoma sono ossa, cervello , fegato e polmoni. La maggior parte delle metastasi a siti distanti avviene attraverso il flusso sanguigno. Circolanti cellule tumorali nel sangue deve eludere spazio immunitario, raggiungere un letto capillare di un organo distale einvadono attraverso le cellule endoteliali dei vasi sanguigni per stabilire correttamente se stessi. 4-7,10, 11 Per simulare i fenomeni comuni e virulenti di metastasi, è stato creato la linea cellulare B16-BL6 murino. Un defunto della parentali C57BL / 6 linea di cellule di melanoma B16-F0, B16-BL6 è il prodotto finale di 10 selezioni successive per metastasi polmonari da iniezione endovenosa (con conseguente B16-F10), seguita da 6 selezioni successive per la penetrazione della membrana della vescica. 12 come tale, è una linea cellulare di melanoma affidabile per la creazione di foci metastatici nel topo, in particolare quando iniettato per via endovenosa. 13 Dopo l&#39;iniezione di una quantità sufficiente di B16-BL6 cellule nella vena della coda di un B57BL / 6 del mouse, seguito da due o più settimane per permettere impianto e la crescita delle cellule B16 / BL6, foci metastatici formerà nei polmoni. Al momento l&#39;eutanasia e l&#39;ispezione al microscopio dissezione, il numero difoci presente individuo può essere quantificato. Questo, a sua volta, può essere utilizzato per stabilire un effetto dose-metastasi, come il numero di cellule B16-BL6 iniettati è correlato al numero di foci formata sulla superficie dei polmoni. Questo modello è conosciuto come &quot;metastasi sperimentale&quot;, in cui le cellule conosciute metastatico vengono introdotti direttamente nel flusso sanguigno, favorendo una diffusione rapida e prevedibile e stabilimento nel polmoni, fegato, o di altro organo di indagine. Questo è in contrasto con &quot;metastasi spontanee&quot;, in cui le cellule tumorali vengono impiantati, spesso per via sottocutanea, e metastasi provengono da organicamente capannone cellule tumorali. 14,15 E &#39;importante per iniettare una quantità appropriata di cellule B16 / BL6 nelle vene coda dei topi. Troppi, ei polmoni saranno coperti con metastasi e la vicina focolai saranno indistinguibili gli uni dagli altri. Troppo pochi, e l&#39;influenza di un agente terapeutico sarà indistinguibile causa intrinseca varizioni tra le iniezioni. Per ottenere un numero ottimale di foci sui polmoni dei C57BL 6 topi /, è necessario correlare il numero di cellule iniettate con la quantità di foci metastatici stabilito sulla superficie dei polmoni tenendo conto la distinguibilità dei singoli foci. Questo protocollo dimostrerà un modello murino di melanoma metastatico in topi C57BL / 6.

<table><tbody><tr><td>Trypsin</td><td>Corning</td><td>MT25052CV</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>MT15040CM</td><td></td></tr><tr><td>Phase Contraast Hemacytometer</td><td>Hausser</td><td>02-671-54</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Fine IV Insulin Syringes</td><td>BD</td><td>14-829-1D</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pads</td><td>Fisherbrand</td><td>22-363-750</td><td></td></tr><tr><td>Mouse Restrainer</td><td>Braintree Scientific</td><td>NC9999969</td><td>Restrainer choice depends on age/size of mice</td></tr><tr><td>Heating Pad</td><td>Harry Schein</td><td>NC0012697</td><td>Optional</td></tr></tbody></table>

injection of syngeneic murine melanoma cells to determine their metastatic potential in the lungs

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis. Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or prevention are lacking. We report a method for the establishment of pulmonary metastases in mice, useful for the study of this phenomenon. Tail vein injection of B57BL/6J mice with B16-BL6 is among the most used models for melanoma metastases. Some of the circulating tumor cells establish themselves in the lungs of the mouse, creating "experimental" metastatic foci. With this model it is possible to measure the relative effects of therapeutic agents on the development of cancer metastasis. The difference in enumerated lung foci between treated and untreated mice indicates the efficacy of metastases neutralization. However, prior to the investigation of a therapeutic agent, it is necessary to determine an optimal number of injected B16-BL6 cells for the quantitative analysis of metastatic foci. Injection of too many cells may result in an overabundance of metastatic foci, impairing proper quantification and overwhelming the effects of anti-cancer therapies, while injection of too few cells will hinder the comparison between treated and controls.

Su ispezione visiva, la variazione foci superficie è evidente. Contando il numero di tumori sotto un microscopio da dissezione dovrebbe produrre una relazione lineare tra il numero di cellule tumorali iniettate e il numero di foci risultante e numerabile. Utilizzando un numero ottimale di cellule iniettabili, l&#39;obiettivo è quello in cui i polmoni non sono completamente coperti, in quanto sono a 500.000 cellule / ml in figura 1A, e non troppo scarsamente coperte, come sono a 62.500 cellule / ml e 125.000 cellule / ml. Questo è anche quantificabile dalla correlazione lineare (Figura 1B). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/54039/54039fig1.jpg" /> Figura 1. Lung Foci risultante dalla vena della coda hanno iniettato cellule B16 / BL6. (A) foci polmone può essere visualizzata sulla superficie dei polmoni da C57BL / 6 topi come masse circolari marrone (foci rappresentante alle frecce). Come le tanelità della coltura cellulare iniettato (sopra ogni immagine) aumenta, così fa il corrispondente numero di focolai risultante polmone (sotto ogni immagine). I polmoni del mouse con la più alta densità di cellule iniettate ha la maggiore copertura visiva di foci del polmone. Barre di scala rappresentano 20 mm. (B) enumerazione dei fuochi polmone rispetto alla densità di coltura cellulare. Esiste una relazione approssimativamente lineare sopra 125.000 cellule / ml, come determinato da emocitometro. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54039/54039fig1large.jpg" target="_blank">Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Metastasis plays a profound role in the virulence of cancer, accounting for an estimated 90% of deaths. We report a protocol for a metastatic melanoma model in mice that is useful for determining the efficacy of therapeutic agents against this clinical phenomenon.

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This article describes the procedures of an experimental metastasis assay that is used to determine the metastatic potential of human cancer cell lines.

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Ricerca sul cancro

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous metastasis models are available. Thus, the experimental metastasis model involving tail-vein injection of suitable cell lines is a mainstay of metastasis research. When cancer cells are injected into the lateral tail-vein, the lung is their preferred site of colonization. A potential limitation of this technique is the accurate quantification of the metastatic lung tumor burden. While some investigators count macrometastases of a pre-defined size and/or include micrometastases following sectioning of tissue, others determine the area of metastatic lesions relative to normal tissue area. Both of these quantification methods can be exceedingly difficult when the metastatic burden is high. Herein, we demonstrate an intravenous injection model of lung metastasis followed by an advanced method for quantifying metastatic tumor burden using image analysis software. This process allows for investigation of multiple end-point parameters, including average metastasis size, total number of metastases, and total metastasis area, to provide a comprehensive analysis. Furthermore, this method has been reviewed by a veterinary pathologist board-certified by the American College of Veterinary Pathologists (SEK) to ensure accuracy.

Intravenous injection of cancer cells is often used in metastasis research, but the metastatic tumor burden can be difficult to analyze. Herein, we demonstrate a tail-vein injection model of metastasis and include a novel approach to analyze the resulting metastatic lung tumor burden.

Analisi patologica delle metastasi polmonari a seguito di iniezione laterale della vena della coda di cellule tumorali

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was established using robust, reproducible in vivo models and standardized methods to identify novel players in melanoma metastasis. This approach allows for data inference at specific experimental stages to precisely characterize a gene's role in metastasis. Models are established by introducing genetically modified melanoma cells via intracardiac, intradermal, or subcutaneous injections into mice, followed by monitoring with serial in vivo imaging. Once preestablished endpoints are reached, primary tumors and/or metastases-bearing organs are harvested and processed for various analyses. Tumor cells can be sorted and subjected to any of several 'omics' platforms, including single-cell RNA sequencing. Organs undergo imaging and immunohistopathological analyses to quantify the overall burden of metastases and map their specific anatomic location. This optimized pipeline, including standardized protocols for engraftment, monitoring, tissue harvesting, processing, and analysis, can be adopted for patient-derived, short-term cultures and established human and murine cell lines of various solid cancer types.

This article describes a workflow of techniques employed for testing novel candidate mediators of melanoma metastasis and their mechanism(s) of action.

Una solida piattaforma di scoperta per l'identificazione di nuovi mediatori delle metastasi del melanoma

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Imaging in vivo per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is essential to understand the process and related mechanisms of prostate cancer bone metastasis for developing new therapeutics. For this, an animal model of bone metastasis is an essential tool. Here, we report detailed procedures to generate a bone metastasis mouse model via intra-cardiac injection of prostate cancer cells. A bioluminescence imaging system can determine whether prostate cancer cells have been accurately injected into the heart and monitor cancer cell metastasis since it has great advantages in monitoring metastatic lesion development. This model replicates the natural development of disseminated cancer cells to form micro-metastases in the bone and imitates the pathological process of prostate cancer bone metastasis. It provides an effective tool for further exploration of the molecular mechanisms and the in vivo therapeutic effects of this disease.

Here, we present a protocol for the intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to generate a mouse model with bone metastasis lesions.

Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Experimental Melanoma Immunotherapy Model Using Tumor Vaccination with a Hematopoietic Cytokine

Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) is a hematopoietic cytokine that promotes the survival and differentiation of dendritic cells (DCs). It has been used in tumor vaccines to activate innate immunity and enhance antitumor responses. This protocol demonstrates a therapeutic model using cell-based tumor vaccine consisting of Flt3L-expressing B16-F10 melanoma cells along with phenotypic and functional analysis of immune cells in the tumor microenvironment (TME). Procedures for cultured tumor cell preparation, tumor implantation, cell irradiation, tumor size measurement, intratumoral immune cell isolation, and flow cytometry analysis are described. The overall goal of this protocol is to provide a preclinical solid tumor immunotherapy model, and a research platform to study the relationship between tumor cells and infiltrating immune cells. The immunotherapy protocol described here can be combined with other therapeutic modalities, such as immune checkpoint blockade (anti-CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-L1 antibodies) or chemotherapy in order to improve the cancer therapeutic effect of melanoma.

The protocol presents a cancer immunotherapy model using cell-based tumor vaccination with Flt3L-expressing B16-F10 melanoma. This protocol demonstrates the procedures, including preparation of cultured tumor cells, tumor implantation, cell irradiation, measurement of tumor growth, isolation of intratumoral immune cells, and flow cytometry analysis.

Modello sperimentale di immunoterapia del melanoma utilizzando la vaccinazione tumorale con una citochina ematopoietica

Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) is a hematopoietic cytokine that promotes the survival and differentiation of dendritic cells (DCs). It has been ...

<meta charset="utf8"></head><body>Nanofarmaco mirato al miRNA-10b oncogenico per il trattamento del carcinoma mammario metastatico

Monitoring of Nanodrug Accumulation in Murine Breast Cancer Metastases

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have been shown to be associated with the metastatic potential of breast cancer and are implicated in tumor cell migration, invasion, and viability. However, it can be difficult to deliver an inhibitory RNA molecule to the tissue of interest. To overcome this challenge and deliver active antisense oligonucleotides to tumors, we utilized magnetic iron oxide nanoparticles as a delivery platform. These nanoparticles target tissues with increased vascular permeability, such as sites of inflammation or cancer. Delivery of these nanoparticles can be monitored in vivo by magnetic resonance imaging (MRI) due to their magnetic properties. Translation of this therapeutic approach into the clinic will be more accessible because of its compatibility with this relevant imaging modality. They can also be labeled with other imaging reporters such as a Cy5.5 near-infrared optical dye for correlative optical imaging and fluorescence microscopy. Here, we demonstrate that nanoparticles labeled with Cy5.5 and conjugated to therapeutic oligomers targeting oncogenic miRNA-10b (termed MN-anti-miR10b, or &#34;nanodrug&#34;) administered intravenously accumulate in metastatic sites, opening a possibility for therapeutic intervention of metastatic breast cancer.

<meta charset="utf8"></head><body>Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino

Here, we describe the protocol for in vivo delivery of magnetic iron oxide nanoparticles carrying RNA oligomers to metastatic breast cancer in animal models, providing a clinically viable approach for the therapeutic silencing of oncogenic nucleic acids.

Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino

Metastatic breast cancer is a devastating disease with very limited therapeutic options, calling for new therapeutic strategies. Oncogenic miRNAs have ...

Iniezione di cellule singenici del topo melanoma per determinare il loro potenziale metastatico nei polmoni

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Metastasi di analisi sperimentale

Orthotopic iniezione delle cellule di cancro al seno in topi cuscinetto grasso mammario

Analisi patologica delle metastasi polmonari a seguito di iniezione laterale della vena della coda di cellule tumorali

Una solida piattaforma di scoperta per l'identificazione di nuovi mediatori delle metastasi del melanoma

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

In vivo Imaging per misurare le metastasi polmonari spontanee di cellule tumorali mammarie iniettate ortotopicamente

Iniezione intracardiaca di cellule tumorali della prostata umane per creare un modello murino di xenotrapianto di metastasi ossee

Modello sperimentale di immunoterapia del melanoma utilizzando la vaccinazione tumorale con una citochina ematopoietica

Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino

Monitoraggio dell'accumulo di nanofarmaci nelle metastasi del carcinoma mammario murino