Esta investigación fue financiada por la Facultad de Humanidades y artes escénicas de la Universidad de Plymouth. Los autores desean reconocer la Functionalize para el suministro de muestras de su conductora PLA.

1. fabricación de un receptáculo de impresión 3D <ol><li>cámaras, tapas y base <ol><li>carga un 3D impresora con poliestireno de alto impacto (HIPS) mediante la interfaz de impresora para ajustar la temperatura de la cama de impresión a 85 ° C y la extrusora a 230 ° C. Cuando se alcanzan las temperaturas, aflojar un brazo Inserte el filamento y empuje hacia abajo hasta que comience a sacar fuera el extremo caliente. A continuación, vuelva a apretar el filamento un brazo más ocioso y retire el material extruido.</li>
		<li>Importar el archivo de modelo 3D receptáculo STL en una impresión 3D corte software, que normalmente es posible, navegar a la pestaña archivo y seleccionar las opciones de importar/abrir ( figura 2).</li>
		<li>Si corte software ofrece alto y bajo parámetros de calidad de impresión, seleccione alta calidad asegurando también que el perfil correcto del material es seleccionado. 
		Nota: Si varios receptáculos en una carrera, la impresión, asegúrese de el software se encuentra imprimir cada objeto uno a la vez. Si se omite este paso, puede reducirse la calidad de impresión, que probablemente causará problemas de tolerancia cuando encaje las piezas.</li>
		<li>Una vez completada la impresión, espere hasta que la temperatura de la cama de impresión está por debajo de 50 ° C eliminar las partes.</li>
		<li>Suavemente con un cepillo de alambre fino, claro la toma de electrodo de cualquier imperfección que puedan causar obstrucciones al colocar la cámara con un electrodo.</li>
	</ol></li> <li>Electrodos <ol><li>reemplazar el filamento de las caderas de un filamento de limpieza y un montón de material pase por la cabeza de impresión.</li>
		<li>Cargar la impresora con un filamento de ácido (PLA) de poliláctico eléctricamente conductor que tiene una resistividad de volumen igual o inferior a 0.75 cm de Ω.</li>
		<li>Ajustar la temperatura de la cama de impresión el estirador a 230 ° C y 60 ° C (consulte el paso 1.1.1 para dirección).</li>
		<li>Cuando las temperaturas se alcanzan, saque varios centímetros del filamento a través del cabezal de impresión. Este proceso ayudará a asegurar que se eliminan todas las partículas de sesiones anteriores.</li>
		<li>De una impresión 3D corte software, carga el archivo STL de electrodo ( figura 3).</li>
		<li>En la configuración de impresión, especifique las siguientes: altura de la capa = 0,16 mm, espesor de cáscara = 1,7 m m, grueso de abajo/arriba = 0,74 mm, densidad de llenado = 100% ( figura 4).</li>
		<li>Si impresión varios electrodos en una carrera, establecer la impresora para imprimir uno por uno.</li>
		<li>Una vez impreso, deje los electrodos en la cama de impresión hasta que se enfríe a temperatura ambiente. Esto asegura la parte deformada y deformada no.</li>
	</ol></li> <li>Asamblea receptáculo <ol><li>ranura un electrodo en cada una de las dos cámaras. Si paso 1.1.5 se ha completado correctamente, los electrodos deben ir en las cámaras sin mucha fuerza.</li>
		<li>Con un bisturí afilado, corte un pedazo de 10 mm de cloruro de polivinilo (PVC) tubo (diámetro interno de 4 mm y diámetro externo de 6 mm) teniendo cuidado de asegurar que cada extremo se corta recto y limpio.</li>
		<li>Aliviar suavemente cada extremo de la tubería de PVC de 10 mm sobre el borde de los dos electrodos.</li>
		<li>Una vez conectado, las dos cámaras del clip en la base.</li>
	</ol></li></ol> 2. Recipiente de preparación e inoculación de p. polycephalum <ol><li>2% preparación medio de agar <ol><li>poner 2 g de polvo de agar microbiológico no nutritivas en un frasco de vidrio de 250 mL.</li>
		<li>Agregar 100 mL de agua desionizada y mezclar bien.</li>
		<li>Autoclave de la botella para 12-15 min a 121 ° C o el lugar en un baño de agua hirviendo durante 15-20 minutos</li>
	</ol></li> <li>Ajuste el sustrato de agar en el receptáculo de &#39; cámaras de s <ol><li>fundir el agar utilizando un baño María o microondas.</li>
		<li>Llenar una pipeta de 2 mL con agar fundido.</li>
		<li>Llenar cada uno del receptáculo &#39; cámaras s asomando la punta de la pipeta aproximadamente 5 mm por encima de la base interna y poco a poco llenando los pozos hasta la parte inferior de la conexión del tubo orificio.</li>
		<li>Inmediatamente después de llenar los pozos, coloque una tapa sobre cada una de las cámaras y apartar el recipiente hasta que el agar haya establecido y temperatura ambiente.</li>
	</ol></li> <li>P. polycephalum inoculación <ol><li>Coloque una hojuela de avena en cada una de las dos cámaras.</li>
		<li>Saque una gota 2 mL de pseudópodos una hambrienta (aproximadamente 12 h) cultura de plasmodium en una de las dos cámaras. Para promover el crecimiento rápido, trate de tomar el protoplasma de los más activos del organismo anterior.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
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A., Horsfield, I., Mayne, R., Ieropoulos, I. A., Adamatzky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+hybrid+circuits+exploiting+thermistive+properties+of+slime+mould.">On hybrid circuits exploiting thermistive properties of slime mould.</a> Scientific reports. 6, (2016).</li><li>Romeo, A., Dimonte, A., Tarabella, G., D'Angelo, P., Erokhin, V., Iannotta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bio-inspired+memory+device+based+on+interfacing+Physarum+polycephalum+with+an+organic+semiconductor.">A bio-inspired memory device based on interfacing Physarum polycephalum with an organic semiconductor.</a> APL materials. 3 (1), (2015).</li><li>Whiting, J. G., de Lacy Costello, B., Adamatzky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+function+of+protoplasmic+tubes+of+Physarum+polycephalum.">Transfer function of protoplasmic tubes of Physarum polycephalum.</a> Biosystems. 128, 48-51 (2015).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este trabajo presenta un método para el cultivo de memristores de mixomicetos p. polycephalum. El organismo se cultiva dentro de 3D impresos receptáculos que se diseñaron para superar algunas de las limitaciones que están asociadas con la implementación de la bio-memristores. Tales limitaciones incluyen tiempo de preparación, tiempo de crecimiento de la muestra y falta de estandarización para las condiciones de crecimiento de muestra a muestra y eléctricos observaciones.
Nuestro receptáculo primero fue revelado en el año 2015 en el material de publicidad impresa para la península arte contemporáneo música Festival 2016 (PACMF) y sitio web respectivo15. Aquí, nuestra tecnología se utilizó para desarrollar un sistema de música interactiva de bioware hardware híbrido que fue capaz de generar acompañamientos musicales a un músico vivo. En la referencia14, informó sobre las pruebas extensas de nuestro recipiente y compararon los resultados con los anteriores enfoques9,10. Tras estos acontecimientos, otro grupo de investigadores posteriormente explorado creando ambientes de crecimiento para el estudio thermistive propiedades16 del organismo, pero estos no son los mismos que memristive propiedades. Sin embargo, sólo ha habido dos otros intentos de desarrollar un enfoque controlado a la aplicación de p. polycephalum memristores13,17. En estos experimentos, pozos fueron hechos de un material elastómero biocompatible gelatinoso llamado polidimetilsiloxano (PDMS), y electrodos fueron creados utilizando diferentes metales o poly(3,4-ethylenedioxythiophene):poly(styrene sulfonate) (PSS). Aunque estos materiales se utilizan habitualmente en ingeniería biónica, microfluídica y electrónica, que son costosos y requieren algunos conocimientos a utilizar. Por ejemplo, el PSS necesita spin-coating y dopaje para mejorar su conductividad. Por lo tanto, las técnicas están fuera del alcance de personas que no tienen acceso a los recursos especializados. Las tomas presentadas en este artículo utilizan métodos y materiales que son de fácil acceso y bajo costo. Además, el diseño proporciona un ambiente acogedor para el plasmodium a habitat, que está en contraste con los otros prototipos de memristor de p. polycephalum donde no se intentó mantener la célula viva de cualquier duración de tiempo.
Hasta ahora, ha sido difícil obtener mediciones consistentes V anteriores métodos para cultivar el microorganismo en placas de Petri (figura 5, izquierda). Nuestros métodos de mejoraron significativamente este escenario (figura 6). Los resultados de nuestro receptáculo pruebas han demostrado que el diseño ha disminuido el tiempo de crecimiento, mayor vida útil, estandarizado de respuestas componentes y creado un microambiente protegido para encapsular el organismo. Además, el dispositivo proporciona medios factibles de integrar el organismo como componente de un esquema eléctrico.
El método presentado alivia una serie de cuestiones relacionadas con el aprovechamiento de p. polycephalum memristores dentro de sistemas eléctricos. Sin embargo, existen limitaciones que requieren más investigación y desarrollo. En primer lugar, condensación puede recoger en la superficie interna del tubo de conexión si los recipientes están sometidos a un rápido cambio de temperatura o si se aplica un alto voltaje para las duraciones largas. El último es debido a alta resistencia del organismo haciendo que la energía eléctrica transferida en calor. Si significativo, la condensación puede crear una vía baja resistente entre los dos electrodos en los extremos del tubo de conexión. Esta limitación se puede manejar con eficacia garantizando que no se sobrecarguen los memristores. En segundo lugar, la resistencia total de memristores producida utilizando el método presentado puede variar de componente a componente. Este fenómeno puede ser el resultado del enfoque no restringiendo el diámetro externo del tubo protoplásmico. En consecuencia, los usuarios deba incorporar un proceso de calibración de la aplicación de los memristores.
Gracias a esta metodología, podemos empezar ahora a estudiar los procesos biológicos que están causando memristive observaciones de p. polycephalum. Es probable que tales procesos tengan parámetros dinámicos que podamos explotar para aumentar el uso del elemento. Hemos comenzado a ejecutar algunos experimentos preliminares donde se alteran las concentraciones extracelulares de iones para revisar si un papel de canales voltaje-bloqueados del ion en memristance.
Los recipientes presentados fueron diseñados exclusivamente para la implementación de p. polycephalum memristores. Estos dispositivos suelen, sin embargo, tener aplicaciones más allá de la aplicación de un solo componente. Por ejemplo, en referencias12,18, el protoplásmico tubo fue estudiado como una uno mismo-montaje y reparación automática alambre biológica. En tanto estas investigaciones, los investigadores expresaron que era necesario seguir trabajando para establecer métodos de cultivo el protoplásmico tubo según un esquema. Las tomas presentadas en este documento proporcionan un método de delinear la producción del tubo entre dos, o potencialmente más puntos. La figura 7 muestra dos fotografías que ilustran que los recipientes pueden utilizarse para crecer sanos tubos en longitudes de más de 100 mm. En referencia18, se investigó la función de transferencia del tubo protoplásmica. Los resultados de esta investigación indicaron que el agar necesario para crecer de los tubos puede causar un problema si el organismo iba a integrarse en un sistema eléctrico. Esto es debido a la capacitancia del sustrato. Las tomas presentadas aquí requieren todavía agar para mantener la humedad alta. Sin embargo, con pequeños cambios al diseño del recipiente, es posible crear un tubo desmontable. Esta configuración puede permitir el tubo a desconectar las cámaras una vez que el crecimiento es completo y recortadas en un sistema eléctrico. Además, una vez que la salud del tubo comienza a deteriorarse, se podría volver a conectarse cámaras nuevas para comida y descanso hasta que se haya reparado y puede ser utilizado otra vez. La figura 8 muestra una fotografía de tubos largos que ha sido desconectado de las cámaras. Se necesitan investigaciones futuras para investigar propiedades eléctricas las protoplásmico del tubo sin el agar y cuando se cultiva en las longitudes utilizando el método presentado.

Computadoras de hoy se construyen utilizando los tres elementos fundamentales circuito pasivo de dos terminales: el condensador, la resistencia y el inductor. Elementos pasivos sólo son capaces de disipar o almacenamiento de energía, no generarla. Estos elementos se establecieron en la 18th ydel siglo 19 y se ligan a través de las ecuaciones de Maxwell. Definimos cada uno de estos componentes de tres circuito en términos de su relación entre dos de las variables del circuito de cuatro, a saber, corriente (I), voltaje (V), carga (Q) y acoplamiento de flujo (φ). La carga es el integral del tiempo de la corriente y ley de Faraday define la tensión como la integral de tiempo del flujo. Así, un condensador se define por una relación entre el voltaje y la carga, una resistencia se define por una relación entre voltaje y corriente, y el inductor es definido por una relación entre flujo y corriente. Para bien sobre un siglo, estos elementos fueron una piedra angular de la electrónica. Sin embargo, representan sólo tres de los posibles pares de cuatro relación entre las variables del circuito, dejando flujo-acoplamiento y carga disociados. En 1971, Leon Chua publicó un papel1 donde él postuló que había un cuarto elemento que falta que las dos variables restantes, que él llamó el memristor. El memristor puede ser descrito como un resistor que recuerda su historia, por lo tanto la contracción 'resistencia memoria.' Funciones de este elemento, alterando su resistencia según la magnitud del voltaje aplicado previamente y su duración. Por otra parte, el memristor conserva su último estado de la resistencia una vez que ya no se aplica la tensión. A diferencia del condensador, resistor y inductor, comportamiento del memristor es no lineal, que es evidente en su perfil-V donde se forma un lazo de histéresis aprisionamiento bajo una tensión de CA. Este circuito toma la forma de una figura de Lissajous que contiene dos oscilaciones perpendiculares de Estados resistentes a altas y bajas. Antes teoría de memristance formalizado de Chua, otros investigadores habían informado sobre los efectos de memoria de la resistencia a ciertas frecuencias cuando experimentar con materiales tales como polímeros y óxidos metálicos, junto con el desarrollo de dispositivos eléctricos en el micrómetro escala2. Sin embargo, en muchos casos, estos efectos fueron considerados indeseables. Tardó casi cuarenta años para formalización de Chua para conectarse a un dispositivo físico y para los investigadores comenzar a desarrollar métodos de explotar efectos de memristive. Un equipo en los laboratorios de HP tuvo éxito en la fabricación de un dispositivo de memristive en 20083 que encendió el enorme interés en el elemento.
Científicos de la computación tienen un gran interés en el memristor debido a que se acredita como el primer elemento para combinar capacidades de procesamiento y memoria en una sola unidad. También muestra comportamientos que son análogas a ciertos procesos neurológicos como Spike-tiempo-dependiente de la plasticidad (STDP)4, por nombrar uno. Tales conductas están dando lugar a perspectivas de construir cerebro-como tecnologías de computación que renunciar a la distinción entre la memoria y la unidad central de procesamiento (o CPU)5. En contraste con los enfoques populares al desarrollo de memristores (con TiO2, por ejemplo), nuestra ambición es desarrollar un memristor de bio orgánico. Además, estamos interesados en cómo este componente puede proporcionar medios de explorar paradigmas más allá de los enfoques convencionales para dispositivos informáticos de ingeniería; por ejemplo, aplicaciones creativas en el campo de la música por ordenador6.
Memristance es un efecto que los investigadores han descubierto recientemente en toda una gama de sistemas biológicos. Por ejemplo, se han observado propiedades memristive en aloe vera plantas7 y piel humana8para citar sino dos. Estos descubrimientos indican que es posible implementar dispositivos de procesamiento y memoria en los substratos biológicos. Aprovechamiento de sistemas orgánicos dentro de la tecnología puede permitir a nosotros para explorar conceptos interesantes tales como uno mismo-Asamblea, reparación automática y de bajo impacto ambiental y la alimentación. Antes de que podemos investigar estas oportunidades sin embargo, varios retos deben abordarse. Muchos de los sistemas biológicos que tienen propiedades memristive tienen importantes limitaciones que limitan su viabilidad como un componente electrónico real. Por ejemplo, una hoja de aloe vera7 necesita luz, tiene una vida útil limitada y sería difícil de integrar en un circuito. Además, varios otros en vivo memristive fenómenos, tales como conductos de sudor humano8, no son opciones factibles en la actualidad para el desarrollo de sistemas para su uso fuera del laboratorio y en sistemas electrónicos todos los días. Sin embargo, de todos los fenómenos de memristive, hay un candidato de potenciales: p. polycephalum.
El plasmodium p. polycephalum es un sistema unicelular amorfo que se ha descubierto como un componente de memristive9,10. Este microorganismo es un candidato ideal para la investigación en electrónica de hardware wetware híbrido para un número de razones. En primer lugar, el organismo es macroscópico, no patógenas y no exige el uso de equipo de especialista, que hace accesible a los ingenieros y biólogos no el plasmodium. En segundo lugar, la célula es amorfa, forma redes de cable-como las venas y crecerá en la mayoría de sustratos (figura 1). Estas propiedades permiten la morfología de la célula delinear fácilmente para ajustarse a un esquema eléctrico convencional. También hay investigaciones que demuestran que el plasmodium puede vivir por más de cuatro años11, y que sus venas pueden actuar como uno mismo-reparación vías conductoras12. Varios estudios de laboratorio han confirmado memristive habilidades9,10,13 del organismo y ahora es hora de explorar su potencial.
La idea de usar P. polycephalum memristores es relativamente nuevo. Como resultado, hay no hay normas establecidas para la medición y observación de sus características eléctricas. Falta de uniformidad en procedimientos experimentales del mismo grupo y entre grupos puede ser la razón que hay incongruencias entre publicado resultados9,10. Es probable que dicha variación es más prominente en su manejo y las condiciones de crecimiento de la muestra. Así, debemos establecer métodos para la producción y pruebas memristores de p. polycephalum donde factores que podrían causar errores son mejor controlado y supervisado.  Además, tenemos que crear métodos de aplicación de p. polycephalum memristores que permiten estable y fácil integración en sistemas eléctricos.
El método presentado en este artículo proporciona una plataforma para la exploración de aplicaciones prácticas de p. polycephalum memristores proporcionando medios de incorporar el organismo como un componente en un diagrama eléctrico esquemático. Es probable que estas técnicas serán de interés para ingenieros buscan para explorar aplicaciones reales de sistemas de hardware wetware híbridos. Además, es accesible a los no expertos (por ejemplo, los entusiastas de prototipos electrónicos de código abierto) que puede estar interesado en experimentar con aspectos de la computación no convencional pero les ha resultado difícil encontrar prototipos para adaptarse a sus necesidades. Algunas aplicaciones potenciales pueden incluir modelos probabilísticos aprovechar los memristores clavar comportamiento, desarrollar enfoques a realizar con lunifo operaciones, modelado de procesos neurológicos para almacenamiento de información y procesamiento.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Conductive PLA filament 2.85mm</td>
			<td>Functionalize</td>
			<td>FE_1LB_2.85MM</td>
			<td>Conductive 3D Printing Filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIPS Filament 3mm 1KG (black)</td>
			<td>NuNus</td>
			<td>104856</td>
			<td>3D printing filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cleaning Filament, 3mm, 0.1 kg, Natural</td>
			<td>3D Prima</td>
			<td>3DPCLEAN300</td>
			<td>3D cleaning filament</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lulzbot Taz 5</td>
			<td>Lulzbot</td>
			<td>TAZ 5</td>
			<td>3D printer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>0504</td>
			<td>Non-nutrient microbiological Agar powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4mm ID x 6mm OD Clear PVC Tubing Pipe Hose 5 Metres</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B008NC4JUO</td>
			<td>Roll of PVC tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physarum polycephalum Plasmodium, Living, Plate</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>156193</td>
			<td>Plasmodium culture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oat Flakes</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td></td>
			<td>Oak flakes to feed the Plasmoidum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cura</td>
			<td>Lulzbot</td>
			<td>Cura LulzBot Edition</td>
			<td>https://www.lulzbot.com/cura</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>230 Programmable Voltage Source</td>
			<td>Keithley Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Voltage source instrument.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>617 Programmable Electrometer</td>
			<td>Keithley Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Electrometer to measure low currents.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a method for growing bio-memristors from slime mold

Nuestra investigación está orientada a obtener una mejor comprensión de las propiedades electrónicas de los organismos con el fin de diseñar nuevos sistemas bioelectrónicas y arquitecturas informáticas basadas en biología. Este trabajo específico se centra en aprovechar el molde de limo unicelular Physarum polycephalum desarrollar bio-memristores (o memristores biológica) y dispositivos de bio-informática. El memristor es una resistencia que posee memoria. Es el 4 º circuito pasivo fundamental elemento (los otros tres son el resistor, el capacitor y el inductor), que está allanando el camino para el diseño de nuevos tipos de sistemas informáticos; por ejemplo, los equipos que podría renunciar a la distinción entre almacenamiento y una unidad central de procesamiento. Cuando se aplica con un voltaje de CA, la corriente vs característica del voltaje de un memristor es un lazo de histéresis pinchado. Se ha demostrado que p. polycephalum produce lazos de histéresis aprisionamiento bajo voltajes de CA y muestra un comportamiento adaptativo que es comparable con el funcionamiento de un memristor. Este trabajo presenta el método que hemos desarrollado para la aplicación de bio-memristores con p. polycephalum y presenta el desarrollo de un receptáculo para el organismo, lo que facilita su despliegue como un componente de circuito electrónico de la cultura. Nuestro método ha demostrado disminuir el tiempo de crecimiento, aumentar la vida útil del componente y estandarizar eléctricos observaciones.

Para obtener resultados representativos, hemos creado 5 muestras utilizando el método descrito anteriormente. Para un control, 5 muestras también fueron arregladas con el método descrito en la primera p. polycephalum memristor investigaciones9,10. Aquí, nos coloca dos electrodos espaciados a una distancia de aproximadamente 10 mm dentro de platos de Petri de 60 mm. Cada electrodo consistió en un círculo (~ 20 mm de diámetro) de alambre de cobre estañado (16 soportes a 0.2 mm) con un no-nutrientes de 2% agar desionizada (2 mL). Todas las muestras fueron monitoreadas a través de imágenes de lapso de tiempo revisar tiempo de crecimiento. Aquí, las muestras de 5 receptáculo conectan los dos electrodos dentro de las 10 h de la inoculación. El más rápido de estos creció en menos de 2 h y 10 h, con el tiempo de crecimiento promedio a través de todas las 5 muestras de 7 h 24 min fue el más largo. Cuatro de las muestras de control producen una vinculación tubo protoplasmática y uno propaga fuera el electrodo de inoculación pero se secó antes de que hiciera la conexión necesaria. El más rápido de las muestras de control hace su conexión dentro de las 19 h mientras que la más lenta 36 h, con un tiempo promedio a través de muestras de control de 26 h 15min. Estos datos muestran una disminución significativa en el tiempo de crecimiento de memristores crecido utilizando el método presentado.
El perfil-V de un memristor es su característica más distintiva. Como tal, realizamos mediciones de-V en las muestras para obtener resultados representativos para este papel. Aquí, se hicieron medidas de corriente instantáneas en cada punto de una onda senoidal de tensión de paso de 160. Cada paso de voltaje un tiempo estático de 2 mediciones eléctricas s. se hizo utilizando una fuente de voltaje programable 230 y un Electrómetro programable 617. Estos dispositivos fueron seleccionados ya que son capaces del abastecimiento tensión y tomar medidas en altas resoluciones. Experimentos se realizaron a temperatura ambiente en una habitación apagada.
La figura 6 muestra las curvas V típicos producidas a partir de pruebas de p. polycephalum memristores. Figura 6 c y 6 d Mostrar diagramas con las medidas representativas de los componentes en las placas Petri. Usando este método los resultados muestran que, aunque medidas en la misma muestra las curvas son morfológicamente similares, histéresis varía mucho de muestra a muestra. Dicha variación incluye la ubicación de puntos de pellizco, la magnitud de lóbulos positivos y negativos y la simetría entre las mediciones en los dominios de voltaje negativo y positivo. Así, curvas-V medidas en memristores utilizando el método del plato de Petri no son la huella de un memristor 'ideal' porque no son puntos de pellizco a cero voltaje y corriente. Figura 6a y 6b muestran gráficos con mediciones representativas de memristores en los receptáculos. La ubicación del punto de pellizco y lóbulo tamaños de estos lazos de histéresis son relativamente constantes en curvas muestra discreta ensayadas distintos rangos de voltaje y pasos de tiempo y muestra a muestra las curvas. Por lo tanto, las curvas i-v de receptáculo estaban más evocador de la huella de un memristor 'ideal', donde siempre eran singulares puntos de pellizco y casi constantemente en tensión y corriente. Sin embargo, aunque morfologías de histéresis eran muestras similares, hubo variación en la resistencia total entre muestras. .
Después se realizaron las mediciones de V inicial, se realizaron pruebas en cada muestra una vez al día hasta que no presentaban curvas memristive. De las muestras de control de 4, 2 secado dentro de 2 días de pruebas iniciales, mientras que las 2 restantes continuó a registrar curvas pinchadas durante 2 días más. Las muestras del recipiente mantienen su memristance durante al menos 7 días, con 3 muestras superior a. Con el tiempo, cada uno de los tubos protoplasmática del receptáculo se convirtió más densamente y hubo una disminución en la resistencia general, con algunas muestras de medición en la x 10-04 rango de 10 V funciona contra A x 10-05 en sus pruebas anteriores.
El lector es referido al artículo por Braund14 para obtener los resultados en la prueba extensa del receptáculo presentado.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig1.jpg"> 
Figura 1: Una fotografía de una cultura de día 2 de plasmodium de p. polycephalum. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56076/56076fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig2.jpg"> 
Figura 2: Una captura de pantalla del archivo STL recipiente después se carga en el software de corte de. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56076/56076fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig3.jpg"> 
Figura 3: una captura de pantalla del archivo STL electrodo después de se carga en el software de corte de. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56076/56076fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig4.jpg"> 
Figura 4: Una captura de pantalla de la configuración para la impresión del modelo STL de electrodo.
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig5.jpg"> 
Figura 5: Dos fotografías que representan p. polycephalum memristores implementado en una placa Petri (izquierda) y utilizando el método presentado en este trabajo (derecha). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56076/56076fig5large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig6.jpg"> 
Figura 6: Cuatro gráficos-V que fueron producidos de dos memristores cultivados en recipientes (a, b) y dos en platos de Petri (c, d). <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56076/56076fig6large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig7.jpg"> 
Figura 7: Fotografías mostrando el recipiente se utiliza para crecer tubos en varias medidas.
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56076/56076fig8.jpg"> / &gt; Figura 8: una fotografía que mostraba tubos protoplásmico que han sido desconectados de las cámaras de.

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A Method for Growing Bio-memristors from Slime Mold

Un método para el cultivo de Bio-memristores de molde de limo

Este trabajo presenta un método mejorado para el cultivo de bio-memristores de plasmodium de Physarum polycephalum. Este método ha demostrado disminuir el tiempo de crecimiento, aumentar la vida útil del componente, estandarizar observaciones eléctricos y crear un ambiente protegido que puede integrarse en circuitos convencionales.

Our research is aimed at gaining a better understanding of the electronic properties of organisms in order to engineer novel bioelectronic systems and ...

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Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Bioengineering

8.9K vistas.  Plymouth University. Este trabajo presenta un método mejorado para el cultivo de bio-memristores de plasmodium de Physarum polycephalum. Este método ha demostrado disminuir el tiempo de crecimiento, aumentar la vida útil del componente, estandarizar observaciones eléctricos y crear un ambiente protegido que puede integrarse en circuitos convencionales.

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A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that secretes sex hormones and supports oocyte maturation. In vitro follicle techniques provide a tool to model follicle development in order to investigate basic biology, and are further being developed as a technique to preserve fertility in the clinic1-4. Our in vitro culture system employs hydrogels in order to mimic the native ovarian environment by maintaining the 3D follicular architecture, cell-cell interactions and paracrine signaling that direct follicle development 5. Previously, follicles were successfully cultured in alginate, an inert algae-derived polysaccharide that undergoes gelation with calcium ions6-8. Alginate hydrogels formed at a concentration of 0.25% w/v were the most permissive for follicle culture, and retained the highest developmental competence 9. Alginate hydrogels are not degradable, thus an increase in the follicle diameter results in a compressive force on the follicle that can impact follicle growth10. We subsequently developed a culture system based on a fibrin-alginate interpenetrating network (FA-IPN), in which a mixture of fibrin and alginate are gelled simultaneously. This combination provides a dynamic mechanical environment because both components contribute to matrix rigidity initially; however, proteases secreted by the growing follicle degrade fibrin in the matrix leaving only alginate to provide support. With the IPN, the alginate content can be reduced below 0.25%, which is not possible with alginate alone 5. Thus, as the follicle expands, it will experience a reduced compressive force due to the reduced solids content. Herein, we describe an encapsulation method and an in vitro culture system for ovarian follicles within a FA-IPN. The dynamic mechanical environment mimics the natural ovarian environment in which small follicles reside in a rigid cortex and move to a more permissive medulla as they increase in size11. The degradable component may be particularly critical for clinical translation in order to support the greater than 106-fold increase in volume that human follicles normally undergo in vivo .

A new method for ovarian follicle encapsulation in a 3D fibrin-alginate interpenetrating network is described. This system combines structural support with proteolytic degradation to support the development of immature follicles to produce mature oocytes. This method may be applied to culture cell aggregates to maintain cell-cell contacts without limiting expansion.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

The ovarian follicle is the functional unit of the ovary that secretes sex hormones and supports oocyte maturation. In vitro  follicle techniques provide ...

Investigación

Bioingeniería

Constant Pressure-controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Lipid Vesicles

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform to study protein-protein and protein-lipid interactions3, monitor drug delivery4,5, and encapsulation4. Phospholipids naturally create curved lipid bilayers, distinguishing itself from a micelle.6 Liposomes are traditionally classified by size and number of bilayers, i.e. large unilamellar vesicles (LUVs), small unilamellar vesicles (SUVs) and multilamellar vesicles (MLVs)7. In particular, the preparation of homogeneous liposomes of various sizes is important for studying membrane curvature that plays a vital role in cell signaling, endo- and exocytosis, membrane fusion, and protein trafficking8. Several groups analyze how proteins are used to modulate processes that involve membrane curvature and thus prepare liposomes of diameters &lt;100 - 400 nm to study their behavior on cell functions3. Others focus on liposome-drug encapsulation, studying liposomes as vehicles to carry and deliver a drug of interest9. Drug encapsulation can be achieved as reported during liposome formation9. Our extrusion step should not affect the encapsulated drug for two reasons, i.e. (1) drug encapsulation should be achieved prior to this step and (2) liposomes should retain their natural biophysical stability, securely carrying the drug in the aqueous core. These research goals further suggest the need for an optimized method to design stable sub-micron lipid vesicles.
Nonetheless, the current liposome preparation technologies (sonication10, freeze-and-thaw10, sedimentation) do not allow preparation of liposomes with highly curved surface (i.e. diameter &lt;100 nm) with high consistency and efficiency10,5, which limits the biophysical studies of an emerging field of membrane curvature sensing. Herein, we present a robust preparation method for a variety of biologically relevant liposomes.
Manual extrusion using gas-tight syringes and polycarbonate membranes10,5 is a common practice but heterogeneity is often observed when using pore sizes &lt;100 nm due to due to variability of manual pressure applied. We employed a constant pressure-controlled extrusion apparatus to prepare synthetic liposomes whose diameters range between 30 and 400 nm. Dynamic light scattering (DLS)10, electron microscopy11 and nanoparticle tracking analysis (NTA)12 were used to quantify the liposome sizes as described in our protocol, with commercial polystyrene (PS) beads used as a calibration standard. A near linear correlation was observed between the employed pore sizes and the experimentally determined liposomes, indicating high fidelity of our pressure-controlled liposome preparation method. Further, we have shown that this lipid vesicle preparation method is generally applicable, independent of various liposome sizes. Lastly, we have also demonstrated in a time course study that these prepared liposomes were stable for up to 16 hours. A representative nano-sized liposome preparation protocol is demonstrated below.

This protocol describes an extrusion method for preparing lipid vesicles of sub-micron sizes with a high degree of homogeneity. This method uses a pressure-controlled system with controlled nitrogen flow rates for liposome preparation. The lipid preparation1,2, liposome extrusion, and size characterization will be presented herein.

Presión constante controlada por extrusión Método para la preparación de vesículas de lípidos de tamaño nano-

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform ...

Designing a Bio-responsive Robot from DNA Origami

Nucleic acids are astonishingly versatile. In addition to their natural role as storage medium for biological information1, they can be utilized in parallel computing2,3 , recognize and bind molecular or cellular targets4,5 , catalyze chemical reactions6,7 , and generate calculated responses in a biological system8,9. Importantly, nucleic acids can be programmed to self-assemble into 2D and 3D structures10-12, enabling the integration of all these remarkable features in a single robot linking the sensing of biological cues to a preset response in order to exert a desired effect.
Creating shapes from nucleic acids was first proposed by Seeman13, and several variations on this theme have since been realized using various techniques11,12,14,15 . However, the most significant is perhaps the one proposed by Rothemund, termed scaffolded DNA origami16. In this technique, the folding of a long (&gt;7,000 bases) single-stranded DNA 'scaffold' is directed to a desired shape by hundreds of short complementary strands termed 'staples'. Folding is carried out by temperature annealing ramp. This technique was successfully demonstrated in the creation of a diverse array of 2D shapes with remarkable precision and robustness. DNA origami was later extended to 3D as well17,18 .
 
The current paper will focus on the caDNAno 2.0 software19 developed by Douglas and colleagues. caDNAno is a robust, user-friendly CAD tool enabling the design of 2D and 3D DNA origami shapes with versatile features. The design process relies on a systematic and accurate abstraction scheme for DNA structures, making it relatively straightforward and efficient.
In this paper we demonstrate the design of a DNA origami nanorobot that has been recently described20. This robot is 'robotic' in the sense that it links sensing to actuation, in order to perform a task. We explain how various sensing schemes can be integrated into the structure, and how this can be relayed to a desired effect. Finally we use Cando21 to simulate the mechanical properties of the designed shape. The concept we discuss can be adapted to multiple tasks and settings.

DNA origami is a powerful method for fabricating precise nanoscale objects by programming the self-assembly of DNA molecules. Here, we describe how DNA origami can be utilized to design a robotic robot capable of sensing biological cues and responding by shape shifting, subsequently relayed to a desired effect.

Diseño de un Robot Bio-respuesta a partir del ADN Origami

Nucleic acids are astonishingly versatile. In addition to their natural role as storage medium for biological information1, they can be utilized in ...

An Improved Method for the Preparation of Type I Collagen From Skin

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. Clinically, this protein is widely used for cosmetic surgery, dermal injections, bone grafting, and reconstructive surgery. The sources of COL1 for these procedures are commonly nonhuman, which increases the potential for inflammation and rejection as well as xenobiotic disease transmission. In view of this, a method to efficiently and quickly purify COL1 from limited quantities of autologously-derived tissues would circumvent many of these issues; however, standard isolation protocols are lengthy and often require large quantities of collagenous tissues. Here, we demonstrate an efficient COL1 extraction method that reduces the time needed to isolate and purify this protein from about 10 days to less than 3 hr. We chose the dermis as our tissue source because of its availability during many surgical procedures. This method uses traditional extraction buffers combined with forceful agitation and centrifugal filtration to obtain highly-pure, soluble COL1 from small amounts of corium. Briefly, dermal biopsies are washed thoroughly in ice-cold dH2O after removing fat, connective tissue, and hair. The skin samples are stripped of noncollagenous proteins and polysaccharides using 0.5 M sodium acetate and a high speed bench-top homogenizer. Collagen from residual solids is subsequently extracted with a 0.075 M sodium citrate buffer using the homogenizer. These extracts are purified using 100,000 MW cut-off centrifugal filters that yield COL1 preparations of comparable or superior quality to commercial products or those obtained using traditional procedures. We anticipate this method will facilitate the utilization of autologously-derived COL1 for a multitude of research and clinical applications.

Traditional procedures for the isolation of soluble type 1 collagen (COL1) require about 10 days from start to finish because of lengthy buffer incubations and laborious resuspensions of fibrils. Here, we describe a means to purify COL1 from small dermal biopsies in less than 3 hr.

Un método mejorado para la preparación de colágeno tipo I De Piel

Soluble type 1 collagen (COL1) is used extensively as an adhesive substrate for cell cultures and as a cellular scaffold for regenerative applications. ...

A Novel Method for Localizing Reporter Fluorescent Beads Near the Cell Culture Surface for Traction Force Microscopy

PA gels have long been used as a platform to study cell traction forces due to ease of fabrication and the ability to tune their elastic properties. When the substrate is coated with an extracellular matrix protein, cells adhere to the gel and apply forces, causing the gel to deform. The deformation depends on the cell traction and the elastic properties of the gel. If the deformation field of the surface is known, surface traction can be calculated using elasticity theory. Gel deformation is commonly measured by embedding fluorescent marker beads uniformly into the gel. The probes displace as the gel deforms. The probes near the surface of the gel are tracked. The displacements reported by these probes are considered as surface displacements. Their depths from the surface are ignored. This assumption introduces error in traction force evaluations. For precise measurement of cell forces, it is critical for the location of the beads to be known. We have developed a technique that utilizes simple chemistry to confine fluorescent marker beads, 0.1 and 1 &#181;m in diameter, in PA gels, within 1.6 &#956;m of the surface. We coat a coverslip with poly-D-lysine (PDL) and fluorescent beads. PA gel solution is then sandwiched between the coverslip and an adherent surface. The fluorescent beads transfer to the gel solution during curing. After polymerization, the PA gel contains fluorescent beads on a plane close to the gel surface.

Traditional techniques for fabricating polyacrylamide (PA) gels containing fluorescent probes involve sandwiching a gel between an adherent surface and a glass slide. Here, we show that coating this slide with poly-D-lysine (PDL) and fluorescent probes localizes the probes to within 1.6 &#181;m from the gel surface.

Un nuevo método para la localización de cuentas fluorescentes Reporter cerca de la superficie de la célula de la cultura para Microscopía de Fuerza de Tracción

PA gels have long been used as a platform to study cell traction forces due to ease of fabrication and the ability to tune their elastic properties. When ...

Biomembrane Fabrication by the Solvent-assisted Lipid Bilayer (SALB) Method

In order to mimic cell membranes, the supported lipid bilayer (SLB) is an attractive platform which enables in vitro investigation of membrane-related processes while conferring biocompatibility and biofunctionality to solid substrates. The spontaneous adsorption and rupture of phospholipid vesicles is the most commonly used method to form SLBs. However, under physiological conditions, vesicle fusion (VF) is limited to only a subset of lipid compositions and solid supports. Here, we describe a one-step general procedure called the solvent-assisted lipid bilayer (SALB) formation method in order to form SLBs which does not require vesicles. The SALB method involves the deposition of lipid molecules onto a solid surface in the presence of water-miscible organic solvents (e.g., isopropanol) and subsequent solvent-exchange with aqueous buffer solution in order to trigger SLB formation. The continuous solvent exchange step enables application of the method in a flow-through configuration suitable for monitoring bilayer formation and subsequent alterations using a wide range of surface-sensitive biosensors. The SALB method can be used to fabricate SLBs on a wide range of hydrophilic solid surfaces, including those which are intractable to vesicle fusion. In addition, it enables fabrication of SLBs composed of lipid compositions which cannot be prepared using the vesicle fusion method. Herein, we compare results obtained with the SALB and conventional vesicle fusion methods on two illustrative hydrophilic surfaces, silicon dioxide and gold. To optimize the experimental conditions for preparation of high quality bilayers prepared via the SALB method, the effect of various parameters, including the type of organic solvent in the deposition step, the rate of solvent exchange, and the lipid concentration is discussed along with troubleshooting tips. Formation of supported membranes containing high fractions of cholesterol is also demonstrated with the SALB method, highlighting the technical capabilities of the SALB technique for a wide range of membrane configurations.

Biomembrane Fabrication by the Solvent-assisted Lipid Bilayer SALB Method

We present an experimental protocol to form a supported lipid bilayer on solid substrates without using lipid vesicles. We demonstrate a one-step method to form a lipid bilayer on silicon dioxide and gold as well as supported membranes with cholesterol-enriched domain for various biological applications.

Biomembrana Fabrication por la bicapa lipídica (SALB) Método-Solvente asistida

In order to mimic cell membranes, the supported lipid bilayer (SLB) is an attractive platform which enables in vitro investigation of membrane-related ...

A Rapid and Quantitative Fluorimetric Method for Protein-Targeting Small Molecule Drug Screening

We demonstrate a new drug screening method for determining the binding affinity of small drug molecules to a target protein by forming fluorescent gold nanoclusters (Au NCs) within the drug-loaded protein, based on the differential fluorescence signal emitted by the Au NCs. Albumin proteins such as human serum albumin (HSA) and bovine serum albumin (BSA) are selected as the model proteins. Four small molecular drugs (e.g., ibuprofen, warfarin, phenytoin, and sulfanilamide) of different binding affinities to the albumin proteins are tested. It was found that the formation rate of fluorescent Au NCs inside the drug loaded albumin protein under denaturing conditions (i.e., 60 &#176;C or in the presence of urea) is slower than that formed in the pristine protein (without drugs). Moreover, the fluorescent intensity of the as-formed NCs is found to be inversely correlated to the binding affinities of these drugs to the albumin proteins. Particularly, the higher the drug-protein binding affinity, the slower the rate of Au NCs formation, and thus a lower fluorescence intensity of the resultant Au NCs is observed. The fluorescence intensity of the resultant Au NCs therefore provides a simple measure of the relative binding strength of different drugs tested. This method is also extendable to measure the specific drug-protein binding constant (KD) by simply varying the drug content preloaded in the protein at a fixed protein concentration. The measured results match well with the values obtained using other prestige but more complicated methods.

A protocol for small molecular drug screening based on in-situ synthesis of ultrasmall fluorescent gold nanoclusters (Au NCs) using drug-loaded protein as template is presented. This method is simple to determine the binding affinity of drugs to a target protein by a visible fluorescent signal emitted from the protein-templated Au NCs.

Una rápida y cuantitativa método fluorimétrico para la proteína-Targeting Pequeña Molécula De Drogas

We demonstrate a new drug screening method for determining the binding affinity of small drug molecules to a target protein by forming fluorescent gold ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung tissue from porcine, rat, or mouse, the tissue is perfused and submerged in subsequent chemical detergents to remove the cellular debris. Histological comparison of the tissue before and after processing confirms removal of over 95% of double stranded DNA and alpha galactosidase staining suggests the majority of cellular debris is removed. After decellularization, the tissue is lyophilized and then cryomilled into a powder. The matrix powder is digested for 48 hr in an acidic pepsin digestion solution and then neutralized to form the pregel solution. Gelation of the pregel solution can be induced by incubation at 37 &#176;C and can be used immediately following neutralization or stored at 4 &#176;C for up to two weeks. Coatings can be formed using the pregel solution on a non-treated plate for cell attachment. Cells can be suspended in the pregel prior to self-assembly to achieve a 3D culture, plated on the surface of a formed gel from which the cells can migrate through the scaffold, or plated on the coatings. Alterations to the strategy presented can impact gelation temperature, strength, or protein fragment sizes. Beyond hydrogel formation, the hydrogel stiffness may be increased using genipin.

This is a method to create a 3-dimensional cell culture scaffold from pulmonary extracellular matrix. Intact lung is processed into hydrogels that can support the growth of cells in three-dimensions.

Los hidrogeles sintonizable de la matriz extracelular pulmonar por la 3D de Cultivos Celulares

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. Human-induced pluripotent stem-cell-derived cardiomyocytes (iPSC-CMs), human cardiac fibroblasts (HCFs), and human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) are isolated and used to generate a cell suspension with 70% iPSC-CMs, 15% HCFs, and 15% HUVECs. They are co-cultured in an ultra-low attachment "hanging drop" system, which contains micropores for condensing hundreds of spheroids at one time. The cells aggregate and spontaneously form beating spheroids after 3 days of co-culture. The spheroids are harvested, seeded into a novel mold cavity, and cultured on a shaker in the incubator. The spheroids become a mature functional tissue approximately 7 days after seeding. The resultant multilayered tissues consist of fused spheroids with satisfactory structural integrity and synchronous beating behavior. This new method has promising potential as a reproducible and cost-effective method to create engineered tissues for the treatment of heart failure in the future.

This protocol describes a net mold-based method to create three-dimensional scaffold-free cardiac tissues with satisfactory structural integrity and synchronous beating behavior.

Un método basado en el molde neto creación libre de andamio tridimensional de tejido cardiaco

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Cell-free Protein Expression Using the Rapidly Growing Bacterium Vibrio natriegens

The marine bacterium Vibrio natriegens has garnered considerable attention as an emerging microbial host for biotechnology due to its fast growth rate. A general protocol is described for the preparation of V. natriegens crude cell extracts using common laboratory equipment. This high yielding protocol has been specifically optimized for user accessibility and reduced cost. Cell-free protein synthesis (CFPS) can be carried out in small scale 10 &#956;L batch reactions in either a 96- or 384-well format and reproducibly yields concentrations of &#62; 260 &#956;g/mL super folder GFP (sfGFP) within 3 h. Overall, crude cell extract preparation and CFPS can be achieved in 1&#8722;2 full days by a single user. This protocol can be easily integrated into existing protein synthesis pipelines to facilitate advances in bio-production and synthetic biology applications.

Cell-free Protein Expression Using the Rapidly Growing Bacterium Vibrio natriegens

Cell-free expression systems are powerful and cost-efficient tools for the high-throughput synthesis and screening of important proteins. Here, we describe the preparation of cell-free protein expression system using Vibrio natriegens for the rapid protein production using plasmid DNA, linear DNA, and mRNA template.

Sin células proteína expresión usando el crecimiento rápido de bacteria Vibrio natriegens

The marine bacterium Vibrio natriegens has garnered considerable attention as an emerging microbial host for biotechnology due to its fast growth rate. A ...