Las mediciones de ultrasonido de alta resolución se han utilizado ampliamente para medir las dimensiones aórticas en ratones. Este protocolo proporciona una guía práctica para la aplicación de esta modalidad. Este protocolo facilita la adquisición de mediciones bidimensionales reproducibles y precisas del diámetro de los oraciones torácicas y abdominales en ratones.
Demostrando el procedimiento estarán el Dr. Hasashi Sawada, un estudiante post doctoral, y Jessica Morrleghen una científica de investigación, ambas en la Universidad de Kentucky. Antes de comenzar el procedimiento, use un hisopo de algodón para aplicar crema dilatar a la zona de imágenes del ratón anestesiado. Después de un minuto, retire suavemente toda la crema y el cabello, y enjuague la piel expuesta con agua tibia.
Después de limpiar la piel seca para eliminar completamente la crema, coloque un punto de gel de ultrasonido en cada uno de los cuatro cables de cobre en la plataforma. Pegue cada almohadilla de pata en cada plomo para obtener lecturas de electrocardiograma. Y verifique que la frecuencia cardíaca esté entre 450 y 450 latidos por minuto.
Aplique gel ultrasónico precalentado en el sitio de imágenes y conecte la sonda al soporte. A continuación, gire la plataforma para un escaneo óptimo, y baje la sonda hasta que esté en contacto con el gel ultrasónico. Para imaginar la aorta torácica, incline la plataforma hacia el lado izquierdo del ratón y coloque la sonda en el borde derecho del esternón del ratón.
Orientar el marcador de referencia en la sonda caudalmente. Cambie al doppler de color en la aorta torácica para confirmar el flujo sanguíneo. Y ajuste el ángulo de la etapa y la sonda para visualizar la aorta claramente.
Usando las perillas para la profundidad y anchura de la imagen, recorte la imagen de ultrasonido para aumentar la velocidad de fotogramas y cambiar la profundidad focal en el lado dorsal de la aorta ascendente, utilizando la perilla para la profundidad focal. Verifique los parámetros de ultrasonido como se indica en la tabla y utilice la perilla de etapa de los ejes X e Y para mover suavemente la sonda, para capturar la imagen aórtica longitudinal con el diámetro más grande posible. Para crear una imagen de la aorta abdominal, coloque la sonda transversalmente justo debajo del proceso de esternón y xyfoideo con el marcador de referencia en la sonda mirando hacia el lado derecho del ratón.
La aorta abdominal debe estar situada junto a la vena cava inferior, y o vena porta. Visualice la aorta abdominal con doper de color para confirmar el flujo pulsátil y recortar la imagen de ultrasonido para aumentar la velocidad de fotogramas. Cambie la profundidad focal a la pared posterior de la aorta abdominal y mueva la sonda caudalmente para visualizar los puntos de rama de las arterias celíacas y mesentéricas superiores.
Luego usa la arteria renal derecha como punto de referencia y captura un bucle sinusto de la región de interés, mostrando la máxima dilatación en la aorta abdominal. Después de que todas las imágenes han sido capturadas, eliminado el gel ultrasónico, enjuague el área de imágenes con agua tibia, y limpie suavemente el ratón seco. Devuelva el ratón a su jaula en la almohadilla de calentamiento, y limpie la máquina de ultrasonido, sonda y plataforma con un paño suave y toallitas desinfectantes.
A continuación, descargue todos los archivos recopilados durante la exploración y apague la máquina de ultrasonido. En esta imagen de ultrasonido representativa de una aorta torácica proximal no aneurisma, se puede observar la aorta ascendente situada junto a la arteria pulmonar, y forma un tubo curvo con tres ramas en la región del arco. La arteria innominada, la arteria carótida común izquierda y la arteria subclavia izquierda.
En esta imagen de ultrasonido representativa de la aorta abdominal no aneurisma, la aorta abdominal se detecta dorsalmente a la vena cava inferior. Aquí se muestran imágenes representativas de aneurismas de la aorta torácica y abdominal. Para la medición del seno aórtico y los diámetros aórticos ascendentes, la línea verde se utiliza para estandarizar el seno aórtico y el diámetro aórtico ascendente, respectivamente.
Las líneas se pueden dibujar perpendicularmente a la línea verde entre los dos bordes internos del lumen en el seno aórtico y el diámetro aórtico ascendente máximo. Para la medición de la aorta abdominal, dibuje una línea a través del diámetro luminal más grande, desde el borde interior hasta el borde interior del lumen del vaso, y trace el borde interno del lumen aórtico para el área luminal. Los diámetros luminales de los ororeas torácicas y abdominales son diferentes entre la sístole y la diástole.
El ciclo cardíaco también debe considerarse para mediciones precisas. En este estudio piloto representativo, no hubo ninguna diferencia importante en los diámetros medidos de la aorta ascendente entre el ultrasonido y las imágenes ex vivo. Esta técnica de ultrasonido permite la adquisición de resultados reproducibles y precisos ya que no se observaron variabilidades entre observadores o intracomunicaciones en este experimento entre las mediciones aórticas realizadas por dos observadores independientes y sesiones de medición.
El ajuste de la sonda y la configuración del escenario son pasos importantes para obtener imágenes aórticas fiables y reproducibles. Los pasos de análisis de datos también son importantes para una medición aórtica precisa.
