Este modelo de interfaz hematoencefálica humana es útil para estudiar la transferencia de moléculas al sistema neurológico. Así como para el estudio de microbios alcanzar un tumor de dolor cerebral infectado. La adición del mini cerebro a esta barrera hematoencefálica o modelo BBB permite el estudio de nuestros patógenos y moléculas que hacen que el BBB se comporte en el cerebro.
Demostrando el procedimiento estarán Florian Bakao, los estudiantes de doctorado de mi laboratorio. Para configurar un dispositivo de inserción de cultivo de membrana de poliéster mini cerebro BBB, diluya las células a cinco veces 10 a las cuartas células por concentración de inserción medio de células endoteliales incompletas y agregue el volumen adecuado de células a cada inserción de cultivo de membrana de poliéster en una placa de 12 pozos. A continuación, coloque las inserciones y la incubadora de cultivo celular hasta que las células alcancen el 100% de confluencia.
Sostenga una placa de 12 pozos con un mililitro de poli-D-lisina bien durante cuatro horas a temperatura ambiente. Seguido de un mililitro de laminin por pozo durante la noche. Sustituya la laminiina por un mililitro de medio celular endotelial complementado con un suero bovino 5%fetal, o FBS.
Coloque el lugar en una incubadora durante una hora. Para preparar el mini grano probar suavemente las neuronas humanas astrocitos en CHME clonan cinco células. Asocie los pellets celulares con un medio de célula endotelial completo.
Después de contar a 3.6 veces 10 a las quintas neuronas y astrocitos a 0.4 veces 10 al quinto clon de CHME cinco células por pozo tienen una placa de 12 pozos. Y sembrar el plato de 12 pozos. Para construir el mini cerebro BBB 24 horas después de la siembra reemplace el medio utilizado con medio de célula endotelial completo fresco y transfiera las inserciones de cultivo de membrana de poliéster recubierto de células endoteliales micro vasculares cerebrales sobre las mini células cerebrales.
Luego, coloque el dispositivo cerebral BBB en la incubadora. Para validar la permeabilidad endotelial cerebral BBB añadir 1,5 mililitros de tampón de transporte por pozo a una nueva placa de 12 pozos. Y voltee cada filtro al revés para retirar cuidadosamente el medio sin afectar la barrera celular endotelial.
Coloque cada filtro en un pozo de la placa llena de búfer de transporte, y agregue 0,5 mililitros de amarillo Lucifer en cada pozo. A continuación, coloque la placa en la incubadora durante 10 minutos antes de transferir los filtros a un nuevo tampón de transporte lleno de 12 pozos. Después de configurar un BBB muchos dispositivos cerebrales como se demostró, añadir 3500 unidades de plataformas de la cepa del virus neurotrófico francés de virus de la fiebre amarilla diluido y 50 microlitros de 2%FPS medio celular endotelial, con mucho cuidado, en la parte superior del compartimiento luminal.
Inocular el mini cerebro BBB de control con 50 microlitros de 2%FBS medio celular endotelial sin virus. A continuación, coloque el virus exponer BBB muchos dispositivos cerebrales en la incubadora durante 24 horas. Al día siguiente, retire las inserciones para determinar la permeabilidad de la célula endotelial y un compañero, así como lo demuestra.
Ahorre un mililitro de muestra de cada pozo para determinar el título del virus en el compartimiento central. Debajo de la plaquita suavemente para evitar fugas del compartimiento luminoso en los compartimentos abluminal. Para estudiar el transporte de una neurona dirigida a biomolecular a través de la barrera hematoencefálica, agregue la molécula bio de interés a las inserciones y devuelva la placa a la incubadora de cultivo celular.
Después de 24 horas de inserción remota y determinar la permeabilidad endotelial. Luego mancha las muchas células cerebrales con el anticuerpo adecuado para detectar la presencia de la molécula bio de interés dentro del mini cerebro. Las células endoteliales microvasculares cerebrales humanas expresan todos los subconjuntos de rececptors, transportadores de Efflux o transportadores que son proteínas relevantes clave para sus funciones biológicas.
Algunas cepas del virus neurotrópico francés del virus de la fiebre amarilla pueden cruzar la barrera hematoencefálica a las 24 horas. Los virus entonces amplifican durante los próximos dos días por la multiplicación del virus dentro de las células cerebrales. Además, la expresión de biomarcadores virales específicos se estimula cuando esta población viral neuro invasiva se pasa en serie sobre las mini células cerebrales y se correlaciona estrictamente con la carga viral.
Después de ser añadido al límite de la molécula penetrante de células compartimentos Neuro-Tag Neurovita cruza la barrera hematoencefálica y es capaz de apuntar a las neuronas humanas. Molécula penetrante celular neuroetique Delta neurovita cruza la barrera celular endotelial, pero se dirige menos eficientemente a las neuronas humanas. Después de ser añadido al pequeño compartimiento medio, la molécula penetrante celular Neuro-Tag Neurovita cruza la barrera hematoencefálica y es capaz de regenerar los axones de las neuronas humanas, después de las heridas.
A diferencia de la molécula penetrante celular Neuro-Tag Neurovita Delta, la forma inactiva de Neurovita. Cuando se aplica después de la célula de rayado de axón molécula penetrante Neuro-Tag Neurovita desencadena la protección neuronal de las neuronas heridas y la regeneración zonal x. Estrictamente por el bien de las prácticas.
no sobreutilo los pasajes de las células I. Trate de mantener cierta semblanza de medios y regiones y compruebe la ausencia de micoplasma. Las interacciones entre el mini cerebro y los fármacos son microbios de interés pueden ser estudiados más a fondo por transcripción que químicamente esta o biología clásica llamada técnicas.
