Este método de validación y evaluación de la precisión de la inyección proporciona un paso de control de calidad importante y una etapa crucial en los estudios con animales para facilitar inyecciones de venas de cola consistentes y reproducibles. La evaluación de la inyección mediante imágenes por fluorescencia inmediatamente después de realizarla ofrece la ventaja de determinar si su agente ha entrado en la circulación sanguínea en la cantidad prevista. La inyección de vena de cola es una manipulación práctica que se beneficia de la demostración visual y que se puede mejorar observando el aclaramiento del agente inyectado desde el lugar de inyección.
Demostrando el procedimiento con Muzamil Saleem será Brooke Deal, una estudiante de doctorado de mi laboratorio. Antes de la inyección de la vena de cola, coloque un animal anestesiado lateralmente en un imager de fluorescencia casi infrarroja con el lugar de inyección en la cola expuesto para establecer una línea de base de fluorescencia. Una vez adquirida la imagen, transfiera al animal al banco quirúrgico en la posición propensa y dilate la vasculatura de la cola sumergiéndola en agua tibia.
Después de aproximadamente un minuto, orienta la cola para que el lado lateral esté a la vista. La vena lateral de la cola debe aparecer de color oscuro. Esterilice la longitud de la vena con almohadillas de alcohol.
Coloque la cola lateralmente e inserte un bisel de aguja de calibre 25 a 27 hacia arriba y paralelo a la cola levantada en la vena de cola lateral seleccionada comenzando en la región de las vértebras cocicgésales distales de la cola y moviéndose más proximal si la colocación adecuada de la aguja falla según sea necesario. En una inserción exitosa de la aguja, se debe observar el flashback de sangre en el borde de la aguja. Si no hay flashback aparente, mueva lentamente la punta de la aguja sin extraerla de la cola para encontrar la inserción de la vena.
Cuando la aguja se haya colocado correctamente, inserte una jeringa con el material inyectable en el borde de la aguja y presione el émbolo para entregar el contenido en la vena. Alternativamente, se puede utilizar un catéter con un indicador de flujo sanguíneo. Se observará un retroceso rápido en el segmento del indicador del catéter después de la colocación correcta.
A continuación, se puede utilizar una ligera contrapresión para introducir sangre en la jeringa para confirmar la colocación correcta en el vaso antes de inyectar. Una vez más, no se sentirá resistencia. Una vez entregado todo el material, retire la aguja y aplique presión con una gasa estéril durante al menos un minuto para garantizar la coagulación.
Marque el lugar de la inyección con una pluma para asegurarse de que el lugar de inyección será visible en el canal de luz blanca de la imagen adquirida. Para evaluar la señal de fluorescencia posterior a la inyección en el lugar de la inyección, devuelva al animal a la etapa de imágenes de infrarrojo cercano y oriente al animal en su lado lateral para exponer el lugar de inyección en la cola lateral para obtener imágenes como se ha demostrado. Para analizar la fluorescencia del lugar de inyección basal y posterior a la inyección, se pueden extraer regiones de interés en el software de imágenes de infrarrojo cercano en la cola cerca del lugar de inyección antes y alrededor del área de fluorescencia después de la inyección de la vena de cola.
Las inyecciones entregadas con éxito demostrarán niveles casi igualmente bajos de señal fluorescente antes y después de la inyección. Las imágenes en las que la fluorescencia es visible a lo largo de la longitud de la cola no son aceptables y deben eliminarse del análisis. Cualquier técnica molecular conductual, quirúrgica o ex vivo se puede realizar de forma normal después de este procedimiento.
Esta técnica proporciona control de calidad para una inyección de vena de cola, revelando el aclaramiento rápido por el flujo sanguíneo venoso del agente correctamente inyectado, o agrupando en el lugar de la inyección si se olvida la vena. El reactivo utilizado en este método no es peligroso, sin embargo, se deben tomar las precauciones adecuadas si el agente a base de fluorescencia se incorpora con un material peligroso.
