Este método de validação e avaliação da precisão da injeção fornece uma importante etapa de controle de qualidade e um estágio crucial em estudos em animais para facilitar injeções consistentes e reprodutíveis da veia traseira. Avaliar a injeção via fluorescência de imagem imediatamente após sua realização oferece a vantagem de determinar se seu agente entrou na circulação sanguínea em sua quantidade pretendida. A injeção da veia da cauda é uma manipulação prática que se beneficia da demonstração visual e que pode ser aprimorada observando a liberação do agente injetado do local da injeção.
Demonstrando o procedimento com Muzamil Saleem será Brooke Deal, uma estudante de doutorado do meu laboratório. Antes da injeção da veia da cauda, posicione um animal anestesiado lateralmente em um imager de fluorescência quase infravermelho com o local de injeção na cauda exposto para estabelecer uma linha de base de fluorescência. Após a aquisição da imagem, transfira o animal para o banco cirúrgico na posição propensa e dilatar a vasculatura da cauda submergindo-o em água morna.
Após aproximadamente um minuto, oriente a cauda para que o lado lateral esteja à vista. A veia lateral da cauda deve parecer de cor escura. Esterilize o comprimento da veia com almofadas de álcool.
Posicione a cauda lateralmente e insira um lado de 25 a 27 medidores de agulha para cima e paralelamente à cauda levantada na veia traseira lateral selecionada, começando na região das vértebras do cóccigeal distal da cauda e movendo-se mais proximal se a colocação adequada da agulha falhar conforme necessário. Em uma inserção bem sucedida da agulha, o flashback de sangue deve ser observado na borda da agulha. Se nenhum flashback for aparente, mova lentamente a ponta da agulha sem removê-la da cauda para encontrar a inserção da veia.
Quando a agulha estiver bem colocada, insira uma seringa com o material injetável na borda da agulha e pressione o êmbolo para entregar o conteúdo na veia. Alternativamente, pode-se usar um cateter com um indicador de fluxo sanguíneo. Um flashback imediato no segmento indicador do cateter será observado após a colocação correta.
Uma leve pressão nas costas pode então ser usada para puxar sangue para dentro da seringa para confirmar a colocação adequada no vaso antes de injetar. Novamente, nenhuma resistência será sentida. Uma vez que todo o material tenha sido entregue, remova a agulha e aplique pressão com uma gaze estéril por pelo menos um minuto para garantir a coagulação.
Marque o local da injeção com uma caneta para garantir que o local da injeção será visível no canal de luz branca da imagem adquirida. Para avaliar o sinal de fluorescência pós-injeção no local da injeção, devolva o animal ao estágio de imagem quase infravermelha e oriente o animal em seu lado lateral para expor o local de injeção na cauda lateral para imagens como demonstrado. Para analisar a fluorescência do local de injeção de base e pós-injeção, regiões de interesse podem ser desenhadas no software de imager quase infravermelho na cauda perto do local de injeção antes e ao redor da área de fluorescência após a injeção da veia da cauda.
Injeções entregues com sucesso demonstrarão níveis quase igualmente baixos de sinal fluorescente antes e depois da injeção. Imagens em que a fluorescência é visível ao longo do comprimento da cauda não são aceitáveis e devem ser removidas da análise. Qualquer técnica molecular comportamental, cirúrgica ou ex vivo pode ser realizada normalmente após este procedimento.
Esta técnica fornece controle de qualidade para uma injeção de veia da cauda, revelando a liberação rápida pelo fluxo sanguíneo venoso do agente devidamente injetado, ou agrupando-se no local da injeção se a veia for perdida. O reagente utilizado neste método não é perigoso, no entanto, as precauções apropriadas devem ser tomadas se o agente baseado em fluorescência for incorporado com um material perigoso.
