Nuestro protocolo puede ser útil en los sistemas y mecanismos. Y la información correcta muestra el efecto del estrés físico y el masaje. Nuestro sistema local de finalización cíclica es mucho más simple.
Los métodos convencionales no son necesarios para la inserción local. Aplicar cinta quirúrgica a las extremidades traseras bilaterales en la posición supina con las articulaciones de la rodilla extendidas y las articulaciones del tobillo plantar flexionada. Coloque un alambre de aluminio en el tronco a nivel de la columna vertebral L4-5, y enrolle el alambre en una configuración espiral alrededor de las extremidades posteriores con espacios de cinco milímetros entre cada giro de la espiral.
Para minimizar la posibilidad de escapar del cableado, ajuste manualmente la configuración del cable para inmovilizar las articulaciones de la cadera en una posición de 90 grados de abducción. A continuación, devuelva el ratón a su jaula de casa con monitoreo hasta la recuperación completa. Para medir la presión muscular gastrocnemius intramuscular coloque el ratón anestesiado en la posición propensa y afeite, depilar y semi-esterilizar la piel de la pantorrilla posterior.
Use un bisturí para hacer una incisión de dos milímetros en la piel desinfectada. E inserte una aguja de indeslado de calibre 20 en el músculo gastrocnemius en un ángulo de 150 a 170 grados con respecto a la superficie de la piel. A continuación, utilizando la vaina de plástico de la aguja como guía, coloque un sensor de telemetro de presión arterial en el vientre medio del músculo gastrocnemius.
Encierra la piel con una sutura de nylon 4-O. A continuación, utilice varios pesos unitarios cilíndricos diferentes para aplicar compresión cilíndrica local al músculo de la pantorrilla durante un minuto. Y monitorear la presión intramuscular usando el software apropiado para el análisis de la señal biológica.
Para el tratamiento de compresión cíclico local desenganchen el ratón anestesiado del cableado de las extremidades posteriores. Y coloque al animal en la posición propensa. Ajuste las extremidades posteriores de modo que las articulaciones de la rodilla se extiendan y las articulaciones del tobillo se flexionan con las pantorrillas hacia arriba.
Y mueva verticalmente una unidad de peso cilíndrico, cubierta con una almohadilla acolchada, sobre el músculo de la pantorrilla a un hercio durante 30 minutos por día durante siete días. Después de cada episodio diario de compresión, vuelva a cablear las extremidades traseras del ratón antes de devolver al animal a su jaula de origen. Al final del experimento depilar la superficie posterior de la pantorrilla y hacer una incisión cutánea para permitir la separación de los músculos gastrocnemius del hueso tibiofibular.
Congele rápidamente el tejido muscular cosechado en una solución compuesta de temperatura de corte óptima. Y usa un criostato para obtener secciones de los músculos gastrocnemius en toboganes de vidrio. Para el etiquetado inmunohistoquímico descongelar y deshidratar las secciones por secado al aire a temperatura ambiente antes de usar una pluma hidrofóbica para dibujar un anillo alrededor de las secciones de tejido en cada diapositiva.
A continuación, coloque los portaobjetos en la cámara de humedad. Y añadir 100 microlitros de búfer de bloqueo a cada lado. Después de 30 minutos a temperatura ambiente enjuague los portaobjetos con dos lavados de 5 minutos en PBS-T, antes de etiquetar las secciones con 100 microlitros del anticuerpo primario de interés durante la noche a temperatura ambiente.
A la mañana siguiente, lave los portaobjetos 3 veces en PBS-T durante 5 minutos por lavado. Y etiquete las muestras con un anticuerpo secundario adecuado durante 1 hora a temperatura ambiente, protegido de la luz. Al final de la incubación, lave los portaobjetos 3 veces en PBS-T fresco como se ha demostrado.
Y mancha los núcleos con 100 microlitros de DAPI durante tres minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. Luego, lave el portaobjetos tres veces más. Y monte las muestras con un medio de montaje compatible y los resbalones de la cubierta.
Para el análisis histomorfométrico, coloque las diapositivas en el escenario de un microscopio de fluorescencia y vea las muestras bajo una subjetiva de 20 X en los filtros apropiados. A continuación, en el software de análisis de imágenes, mida el área de sección transversal de cada miofibra y cuente el número de celdas que expresan los marcadores experimentales de interés. El área transversal de la miofibra gastrocnemius se reduce significativamente por la inmovilización de las extremidades posteriores.
Además, el análisis de tinción inmunofluorescente revela que las células que expresan MCP-1 y TNF-alfa aumentan significativamente en los tejidos musculares gastrocnemius de las extremidades traseras inmovilizadas. Juntos, con el aumento de las células teñidas positivamente con F4/80, la inmovilización de las extremidades traseras parece instigar la atrofia muscular de la pantorrilla, que implica respuestas inflamatorias locales, incluida la acumulación de macrófagos. Entre las diferentes magnitudes de compresión cíclica local probadas al cambiar el peso de la unidad cilíndrica, la compresión correspondiente a 50 mililitros de ondas de presión intermusculares de mercurio, parece aliviar de manera más eficiente la disminución inducida por la inmovilización en el área seccional transversal de miofífibra y aumentar la acumulación de macrófagos en los músculos gastrocnemios.
Una compresión cíclica local de 66 gramos, aplicada a 1 hercio durante 30 minutos por día durante 7 días, alivia significativamente las disminuciones inducidas por inmovilización observada en el área transversal de miofibra de los músculos gastrocnemius. Más, la compresión cíclica local templa parcialmente la inmovilización inducida disminuye en la fuerza de conrcepción de los músculos del surae del tríceps. Además, la compresión cíclica local templa el aumento de F4/80 positivo, TNF-alfa positivo, y MCP-1 una célula positiva en el tejido muscular gastrocnemius de las extremidades traseras inmovilizadas.
Nuestro enfoque proporcionará una base científica para el aumento muscular en el paciente y nuestra estrategia potencial para el procedimiento preventivo. La rata ha encontrado la limitada inactividad física. Usando nuestro sistema, hemos comenzado a evaluar la mayoría de los pacientes que es músculos carecen de mecánica en el paciente.
La forma industrial local moderada para hacerlo hace una perfecta atrofia muscular inducida por inmovilización.
