マウス子牛に対する一貫したマッサージ様摂動の適用と、結果として生じる筋肉内圧変化のモニタリング

私たちのプロトコルは、システムとメカニズムに役立ちます。そして、正しい情報は、物理的なストレスやマッサージの効果を示しています。私たちのローカル環状完成システムははるかに簡単です。

従来のメソッドは、ローカル挿入には必要ありません。膝関節を伸ばし、足底を屈曲させた膝関節の位置の両側後肢に外科テープを塗布する。L4-5脊椎レベルでトランクにアルミ線を設置し、後肢の周りに渦巻き状の構成でワイヤを巻き付け、スパイラルの各ターン間に5ミリメートルの隙間を持ちます。

配線からの脱出の可能性を最小限に抑えるために、手動で配線構成を調整して、90度の位置の外転部で股関節を固定化します。その後、完全な回復まで監視して、ホームケージにマウスを戻します。筋肉内胃頭筋圧を測定するために、麻酔をかけられるマウスを起こしやすい位置に置き、脱皮し、後ふくらはぎの皮膚を半滅菌する。

メスを使って、2ミリの切開を行います。そして、皮膚表面に150〜170度の角度で胃食道筋に20ゲージの留置針を挿入する。次に、針のプラスチック鞘をガイドとして用い、胃節筋の中腹に血圧テレメーターセンサーを配置する。

4-Oナイロン縫合糸で肌を囲みます。次に、いくつかの異なる円筒単位重量を使用して、1分間、ふくらはぎの筋肉に局所的な円筒形の圧縮を適用します。そして、生物学的シグナル解析のための適切なソフトウェアを使用して筋肉内圧を監視します。

局所的な周期的圧縮処理のために後肢の配線から麻酔付きマウスを外す。そして、動物を起こしやすい位置に置きます。後肢を調整して、膝関節が伸び、足首関節がふくらはぎを上向きにして足底を曲げる。

そして、クッションパッドで覆われた円筒形の重量単位を、1つのヘルツでふくらはぎの筋肉の上に1日30分間垂直に動かします。圧縮の各毎日の吹き出物の後、その家のケージに動物を返す前に、マウスの後肢を再配線します。実験の終わりには、後ふくらはぎの表面を剥離し、脛骨骨から胃頭筋の分離を可能にする皮膚切開を行う。

収穫した筋肉組織を最適な切断温度化合物溶液で素早く凍結します。そして、ガラススライド上の胃頭筋のセクションを取得するために凍結スタットを使用してください。免疫組織化学的標識のために融解し、各スライドの組織切片の周りにリングを描くために疎水性ペンを使用する前に室温で空気乾燥によってセクションを脱水する。

次に、スライドを湿度チャンバーに入れます。そして、各側にブロッキングバッファの100マイクロリットルを追加します。室温で30分後、PBS-Tで2回の5分間の洗剤でスライドをリンスし、室温で一晩対象となる一次抗体の100マイクロリットルで切片を標識する。

翌朝、PBS-Tでスライドを1回5分間洗浄します。そして、光から保護された室温で1時間、適切な二次抗体でサンプルを標識します。インキュベーションの終わりに、スライドを実演したように新鮮なPBS-Tで3回洗浄する。

そして、暗闇の中で室温で3分間、DAPIの100マイクロリットルで核を染色します。その後、スライドをさらに3回洗います。そして、互換性のある取り付け媒体とカバースリップでサンプルを取り付けます。

ヒストモルフォメトリック分析のために、スライドを蛍光顕微鏡のステージに置き、適切なフィルターで20-X主観下でサンプルを見ます。そして、画像解析ソフトウェアでは、各ミオファイバーの断面面積を測定し、目的とする実験マーカーを発現する細胞数をカウントする。胃切除筋の断面領域は後肢固定化により有意に減少する。

さらに、免疫蛍光染色解析は、MCP-1およびTNF-αを発現する細胞が固定化後肢の胃内筋肉組織において有意に増加していることを明らかにした。一緒に、F4/80で陽性染色された細胞の増加に伴い、後肢固定化は、マクロファージ蓄積を含む局所的な炎症反応を伴う子牛の筋肉萎縮を誘発するように見える。円筒単位の重量を変化させることによって試験されたいくつかの異なる局所周期的圧縮の大きさの中で、水銀間圧力波の50ミリリットルに相当する圧縮は、最も効率的に筋膜断面領域の筋繊維断面積の減少を誘導する固定化を緩和し、胃頭間筋のマクロファージ蓄積の増加に見える。

66グラムの局所周期的圧縮は、1ヘルツで1日30分間7日間適用され、胃頭筋の筋膜断面積における観察された固定化誘導減少を有意に軽減する。さらに、局所周期的圧縮は、部分的に気性固定化誘導性、三頭筋スラエ筋の収縮力の低下を誘発する。さらに、局所周期的圧縮はF4/80陽性、TNF-α陽性、およびMCP-1固定化後肢の胃内筋肉組織における1つの陽性細胞の増加を和らげる。

私たちのアプローチは、患者の筋肉の上昇と予防処置のための私たちの潜在的な戦略のための科学的根拠を提供します。ラットは身体的不活動の限られたを発見した。私たちのシステムを使用して、私たちは筋肉が患者の力学を欠いている最も患者を評価し始めました。

それを行うための適度な局所的な産業的方法は、完全な固定化誘発筋萎縮を行う。