Наш протокол может быть полезен в системах и механизме. А правильная информация показывает эффект физического стресса и массажа. Наша локавная циклическая система завершения гораздо проще.
Обычные методы не требуются для локальной вставки. Нанесите хирургическую ленту на двусторонние задние конечности в положении на спине с расширенными коленными суставами и сгибаниями голеностопных суставов. Поместите алюминиевую проволоку на ствол на уровне позвоночника L4-5 и обвяжаете провод в спиральной конфигурации вокруг задних конечностей с пятимиллиметровыми зазорами между каждым поворотом спирали.
Чтобы свести к минимуму возможность выхода из проводки, вручную отрегулируйте конфигурацию провода, чтобы обездвижить тазобедренные суставы в положении похищения на 90 градусов. Затем верните мышь в домашнюю клетку с наблюдением до полного выздоровления. Для измерения внутримышечного желудочно-кишечного давления поместите анестезированную мышь в положение склонного и бритья, депилата и полустерилизации кожи задней икры.
Используйте скальпель, чтобы сделать двухмиллиметровый разрез в дезинфицированной коже. И вставьте 20 калибровочных иглы в мышцу гастрокнейма под углом от 150 до 170 градусов к поверхности кожи. Далее, используя пластиковую оболочку иглы в качестве руководства, поместите датчик телеметра артериального давления в среднем животе мышцы гастроконемиуса.
Заключите кожу 4-O нейлоновым швом. Затем используйте несколько различных цилиндрических весов единицы, чтобы применить местное цилиндрическое сжатие к икроножной мышце в течение одной минуты. И контролировать внутримышечное давление с помощью соответствующего программного обеспечения для биологического анализа сигнала.
Для локального циклического сжатия отсоедините анестезировалую мышь от проводки задних конечностей. И поместите животное в положение склонного. Отрегулируйте задние конечности так, чтобы коленные суставы были расширены, а голеностопные суставы сгибались вместе с телятами вверх.
И вертикально переместить цилиндрический блок веса, покрытый мягкой площадкой, над икроножной мышцей на одном герце в течение 30 минут в день в течение семи дней. После каждого ежедневного боя сжатия rewire мыши задние конечности, прежде чем вернуть животное в свою домашнюю клетку. В конце эксперимента депилировать заднюю поверхность теленка и сделать разрез кожи, чтобы разделение мышц гастрокнейма от tibiofibular кости.
Быстро заморозить собранную мышечную ткань в оптимальном растворе соединения температуры резки. И использовать криостат для получения разделов мышц гастрочнемия на стеклянных слайдах. Для иммуногистохимической маркировки оттепели и обезвоживания секций путем сушки воздуха при комнатной температуре, прежде чем использовать гидрофобную ручку, чтобы нарисовать кольцо вокруг секций тканей на каждом слайде.
Далее поместите горки в камеру влажности. И добавить 100 микролитров блокирующего буфера с каждой стороны. Через 30 минут при комнатной температуре промыть горки с двумя 5 минут моет в PBS-T, прежде чем маркировки разделов с 100 микролитров первичного антитела интерес на ночь при комнатной температуре.
На следующее утро мыть горки 3 раза в PBS-T в течение 5 минут за стирку. И маркировать образцы соответствующим вторичным антителом в течение 1 часа при комнатной температуре, защищенной от света. В конце инкубации, мыть слайды 3 раза в свежем PBS-T, как попродемонстрировано.
И окрашивать ядра 100 микролитров DAPI в течение трех минут при комнатной температуре в темноте. Затем промойте слайд еще три раза. И смонтировать образцы с совместимым монтажа среды и крышки скользит.
Для гистоморфометрического анализа поместите слайды на сцену флуоресцентного микроскопа и просмотрите образцы под 20-X субъективным в соответствующих фильтрах. Затем в программном обеспечении для анализа изображений измеряется поперечная секционная область каждого миофибера и подсчитывается количество ячеек, выражаюющих экспериментальные маркеры интереса. Поперечная секционная область гастрокнемиуса миофибера значительно снижается задней иммобилизацией конечностей.
Кроме того, иммунофлуоресцентный анализ окрашивания показывает, что клетки, выражаюющие MCP-1 и TNF-альфа, значительно увеличены в мышечных тканях желудочно-кишечного тракта обездвиженно задних конечностей. Вместе с увеличением клеток, положительно окрашенных F4/80, иммобилизация задних конечностей, как представляется, провоцирует атрофию икроножной мышцы, включая местные воспалительные реакции, включая накопление макрофага. Среди нескольких различных локальных циклических величин сжатия, проверенных путем изменения веса цилиндрического блока, сжатие, соответствующее 50 миллилитров волн межмышечного давления ртути, как представляется, наиболее эффективно облегчить иммобилизацию индуцированного снижения в миофибере поперечной секционной области и увеличить накопление макрофагов в мышцах гастроконемиуса.
66-граммовое локальное циклическое сжатие, применяемое при 1 герце в течение 30 минут в день в течение 7 дней, значительно облегчает наблюдаемую иммобилизацию, вызванную уменьшением миофиберной поперечной секционной области мышц гастрокнеймиуса. Более того, локальное циклическое сжатие частично закаляет иммобилизацию, индуцированную уменьшением контрактной силы мышц трицепса суры. Кроме того, локальные циклические температуры сжатия закалки увеличение F4/80 положительный, TNF-альфа положительный, и MCP-1 один положительные клетки в желудочно-мышечной ткани обездвиженной задних конечностей.
Наш подход обеспечит научную основу для роста мышечной массы пациента и нашу потенциальную стратегию профилактической процедуры. Крыса обнаружила ограниченность физической бездеятельности. Используя нашу систему, мы начали оценивать большинство пациентов, которые мышцы не хватает механики у пациента.
Умеренный местный промышленный способ сделать это делает идеальный иммобилизации индуцированной атрофии мышц.
