Nuestro protocolo es una prueba de visión para ratones. Es robusto y fácil de replicar. Si bien hay muchas pruebas de visión del ratón disponibles, el experimento que se avecina es uno de los pocos métodos para probar la ruta de formación de la imagen, que no es una vía de reflejo visual.
Mientras que muchos otros ensayos de comportamiento visual requieren un entrenamiento extenso en cirugía animal, la técnica que se avecina requiere poco entrenamiento experimental. Comience por construir un cerramiento rectangular de la tapa abierta utilizando marcos de aluminio y paneles de PVC para albergar el ratón durante la presentación de estímulos visuales que se avecinan. Poner una hoja de papel para cubrir todo el piso de la carcasa para asegurar una fácil limpieza entre las pruebas.
A continuación, añadir un refugio opaco en una esquina del recinto con una entrada orientada al centro de la arena para facilitar la entrada y salida. Asegure una cámara con una lente gran angular a un soporte montado en la mesa adyacente al gabinete para capturar el comportamiento del ratón. A continuación, configure un monitor de ordenador en la parte superior del gabinete.
Prepare un patrón que se avecina utilizando un software experimental para codificar para un círculo negro en expansión. Establezca el estímulo para que comience en el ángulo visual de dos grados y se expanda a 50 grados durante 250 milisegundos y establezca el código para repetir el estímulo 10 veces con un intervalo de un segundo. Comience seleccionando un ratón para el experimento, así como tres ratones ciegos para asegurar que la respuesta al estímulo que se avecina fuera realmente un comportamiento guiado visualmente.
Coloque el ratón sano en el recinto y déjelo explorar libremente su entorno durante siete a 15 minutos antes del inicio del estímulo. 10 segundos antes de la estimulación, inicie la captura de vídeo en la cámara. Una vez que el ratón esté lejos del refugio y se mueva libremente en la arena abierta, comience los estímulos visuales que se avecinan.
Finalmente, transfiera el ratón de vuelta a su jaula original. Limpie el cerramiento para el ratón siguiente rociando las paredes y refugiarse con 70% de etanol y limpiándolo hacia abajo y reemplace el revestimiento del piso de papel, si está sucio. Vuelva a colocar el refugio en el mismo lugar inicial si se mueve durante el traslado de animales y la limpieza del recinto.
En el ordenador, guarde el clip de vídeo para cada ratón en formato AVI sin compresión de archivos con el fin de garantizar que no se pierdan datos durante la transferencia al software de análisis. A continuación, utilice un software de análisis para realizar un seguimiento del movimiento del animal por la arena antes, durante y después de la presentación del estímulo. Calcular la velocidad y la distancia del ratón desde el refugio.
Si la imagen de la arena está distorsionada debido al ángulo de vídeo, corrija la coordinación x e y antes del cálculo. Por último, compare los parámetros antes y después del inicio del estímulo que se avecina para determinar cómo respondió el ratón a los estímulos. Ya sea congelando, huyendo o demostrando ningún cambio en el comportamiento.
Los clips de vídeo capturados se analizaron utilizando un software de análisis comercial con una función de seguimiento manual. Usando la función de seguimiento, la posición del ratón se identificó en cada fotograma del video antes, durante y después de los estímulos que se avecinan. Cuando se produjo el vuelo, la velocidad aumentó bruscamente y la distancia al refugio se redujo en consecuencia.
Por el contrario, la velocidad era de casi cero milímetros por segundo cuando los ratones se congelaron. La velocidad se redujo en comparación con el control antes de que se avecinara y la distancia a la cúpula no cambió durante este período. Es importante recordar obtener una línea de base de movimiento antes del inicio del estímulo o no se puede determinar una reacción cuantitativa al estímulo.
Es importante realizar múltiples pruebas para una evaluación precisa de la visión. El reflejo de la luz de la pupila es un método comúnmente utilizado, que asegura que el ratón tenga ojos sanos. El mecanismo de respuesta inminente no se entiende completamente.
Esta técnica puede proporcionar oportunidades para explorar mecanismos de reconocimiento de objetos en movimiento y respuestas de miedo para los neurocientíficos.
