私たちのプロトコルは、マウスの視力検査です。堅牢で簡単に複製できます。多くのマウス視力検査が利用可能ですが、迫り来る実験は、視覚的な反射経路ではない画像形成経路をテストするためのいくつかの方法の1つです。
他の多くの視覚行動アッセイは動物の手術における広範な訓練を必要とするが、迫り来る技術はほとんど実験的訓練を必要としません。迫り来る視覚刺激のプレゼンテーションの間にマウスを収容するためにアルミニウムのフレーミングおよびPVCパネルを使用して長方形の開いたふたのエンクロージャを構築することから始める。試験間のクリーンアップを容易にするために、エンクロージャの床全体を覆う紙を置きます。
次に、アリーナの中央に面した入り口を持つ囲いの隅に不透明な避難所を追加して、簡単に入り口と出口を出ます。マウスの動作をキャプチャするために、エンクロージャに隣接するテーブルに取り付けられたスタンドに広角レンズを使用してカメラを固定します。次に、エンクロージャの上部にコンピュータ モニタを設置します。
拡大する黒い円をコード化する実験ソフトウェアを使用して迫り来るパターンを準備します。刺激を2度の視角から始め、250ミリ秒にわたって50度に拡大し、1秒間隔で刺激を10回繰り返すようにコードを設定します。迫り来る刺激に対する反応が本当に視覚的に導かれた行動であることを確実にするために、実験のためのマウスと3つの盲目のマウスを選択することから始めます。
健康なマウスを囲いに置き、刺激の発症前に7〜15分間自由にその周囲を探索させます。刺激の10秒前に、カメラでビデオキャプチャを開始します。マウスが避難所から離れ、オープンアリーナで自由に移動したら、迫り来る視覚刺激を開始します。
最後に、マウスを元のケージに戻します。壁と避難に70%エタノールを吹き付け、それを拭き取り、汚れた場合は紙の床ライナーを交換して、次のマウスのエンクロージャを清掃します。動物の移送とエンクロージャのクリーニング中に移動した場合は、避難所を同じ初期位置に再配置します。
コンピュータで、解析ソフトウェアへの転送中にデータ損失が発生しないように、ファイル圧縮なしで各マウスのビデオクリップをAVI形式で保存します。次に、解析ソフトウェアを使用して、刺激提示の前、中、および後のアリーナ周辺の動物の動きを追跡します。避難所からのマウスの速度と距離を計算します。
ビデオの角度によってアリーナの画像が歪んでいる場合は、計算の前にxとyのコーディネーションを修正します。最後に、迫り来る刺激開始の前後のパラメータを比較して、マウスが刺激にどのように反応するかを決定します。凍結、逃亡、または行動に変化がないことを実証するかどうか。
キャプチャされたビデオクリップは、手動追跡機能を備えた商用分析ソフトウェアを使用して分析されました。追跡機能を使用して、迫り来る刺激の前後に、ビデオの各フレームでマウスの位置を特定しました。飛行が起こったとき、速度は急激に増加し、それに応じて避難所までの距離が減少しました。
対照的に、マウスが凍結したとき、速度は毎秒0ミリメートル近くでした。迫り来る前のコントロールに比べて速度が低下し、ドームまでの距離はこの期間中に変化しなかった。刺激の発症前に動きのベースラインを得るか、刺激に対する定量的反応を決定できないことを覚えておくことが重要です。
正確な視力評価のために、複数のテストを実施することが重要です。瞳孔光反射は、マウスが健康な目を持っていることを保証する一般的に使用される方法の1つです。迫り来る応答のメカニズムは完全には理解されていません。
この技術は、神経科学者のための物体認識および恐怖応答を動かすメカニズムを探求する機会を提供するかもしれない。
