El comportamiento de anidación es una forma útil de evaluar las actividades de la vida diaria en ratones salvajes y transgénicos. Es especialmente útil en la documentación del deterioro cognitivo en la neurodegeneración a lo largo de la vida útil. Esta técnica es una evaluación económica simple y elegante de las actividades de la vida diaria en ratones.
También se puede realizar en un corto período de tiempo con un entrenamiento mínimo. En nuestro laboratorio recomendamos papel rallado, ya que el papel produce resultados más consistentes. Sin embargo, se pueden realizar estudios piloto para determinar qué material se adapte mejor a sus objetivos y a su presupuesto.
En una sala de pruebas separada, establezca las condiciones ambientales para que sean consistentes en todos los ensayos y sean idénticas a la sala de vivienda, y proporcione alimentos y agua a las jaulas addlibitum. Asigne a cada ratón un número de identificación o una letra aleatorios. Y registre la identificación original del animal y otra identificación necesaria en un registro de colonia para asegurarse de que los asistentes y el personal de cría de animales permanezcan ciegos a las condiciones.
Ordene aleatoriamente la colocación de la jaula en la sala de pruebas, de modo que los ratones transgénicos y de tipo salvaje no estén separados inapropiadamente. Y cubra la parte inferior de cada jaula con 100 gramos de peso seco de la ropa de cama de mazorca para los ensayos de papel cuadrado, torcido y desmenuzado. Y 100 gramos de ropa de cama de mazorca suave para los ensayos de mazorcas blandas.
A continuación, justo antes de introducir un ratón en una jaula, coloque un único cuadrado de algodón prensado, un solo giro de papel, sin material adicional añadido a la ropa de cama de mazorca suave, o 2,5 gramos de papel de impresora blanco rallado limpio cortado en tiras de cinco a siete centímetros. A la misma hora del día, al comienzo del ciclo de luz, lleve la jaula a casa que contiene los ratones a la sala de pruebas. Y transfiera cada ratón a su jaula de anidación asignada con el material que ya está en la jaula.
Cuando todos los ratones hayan sido colocados, devuelva las jaulas a la sala de estar y permita que los ratones completen el ensayo durante 24 horas, sin perturbaciones. Al final del ensayo, retire cuidadosamente la tapa de cada jaula. Y cuando cada ratón se haya movido fuera del nido, fotografíe cada nido capturando la identificación asignada en la fotografía y minimizando la apariencia de cualquier material fuera de la jaula.
Cuando cada nido haya sido fotografiado, transfiera suavemente cada ratón a jaulas de retención temporales individuales. Y escolta la ropa de cama y cualquier material de anidación de cada jaula. A continuación, reemplace la ropa de cama, proporcione el siguiente material de anidamiento en la secuencia.
Y devuelve el ratón a la jaula de anidación. Cuando se hayan completado todos los ensayos, devuelva a los ratones a sus jaulas domésticas y observe a los ratones en busca de cualquier comportamiento agresivo potencial. Para mantener la fiabilidad entre relator, proporcione imágenes de referencia para cada material de anidamiento a al menos dos individuos ciegos al estudio.
Y proporcionar una serie de nidos de muestra para familiarizar a los anotadores con cada tipo de material. Al anotar los nidos, se debe asignar una puntuación de uno cuando el papel rallado o pequeños cuadrados permanecen esparcidos por toda la jaula, o el cuadrado o giro de algodón permanece intacto. Una puntuación de dos se asigna cuando parte del material se construye en un nido, pero más del 50% del material no se ha utilizado para la construcción del nido.
Se asigna una puntuación de tres cuando se construye un nido notable, pero varias piezas siguen dispersas. Una puntuación de cuatro se asigna cuando casi todo el material se utiliza para el nido, pero algunas piezas de material permanecen dispersas o están cerca del nido. Se asigna una puntuación de cinco cuando casi todo el material se utiliza para hacer un nido no identificado.
Pida al anotador que tome un descanso y vuelva a visitar las fotos de referencia para evitar fatiga y sesgo durante el procedimiento de puntuación según sea necesario. Cuando se hayan puntuado todas las jaulas, introduzca las puntuaciones y formatee el archivo de datos para que tenga un formato largo, de forma que las puntuaciones de animales estén en columnas separadas. En este análisis representativo en los cuatro materiales proporcionados, los ratones wildtype obtuvieron una puntuación más alta en calidad de nido en comparación con los ratones APOE e4.
Con papel rallado clasificado significativamente más alto en calidad que el cuadrado, ropa de cama, o retorcer materiales. Sin diferencias observadas entre los materiales cuadrados, de ropa de cama y de torsión. Además, en este experimento con ratones htau, los animales mutantes de 5,5 meses de edad construyen nidos de papel triturado que eran significativamente peores que los construidos por sus contrapartes de tipo salvaje coincidentes con su edad.
Las puntuaciones deben permanecer ciegas a las condiciones experimentales y revisar los criterios de puntuación. Dado que las conclusiones son sólidas y válidas, también deben evaluarse las reliabilidades entre e intra-rater. La madriguera y la carrera de ruedas circadianas son otras dos formas comunes de evaluar las actividades de la vida diaria.
Y pueden servir para complementar el comportamiento de anidación. La anidación se puede utilizar como una evaluación auxiliar para predecir una posible disminución de la cognición, ampliando el aliento de las evaluaciones conductuales junto con el laberinto de agua de Morris y la carrera de la rueda circadiana.
