O comportamento de aninhamento é uma maneira útil de avaliar atividades de vida diária em camundongos selvagens e transgênicos. É especialmente útil em documentar o declínio cognitivo da neurodegeneração ao longo da vida. Esta técnica é uma avaliação econômica simples e elegante das atividades diárias em camundongos.
Também pode ser realizado em um curto período de tempo com treinamento mínimo. Em nosso laboratório recomendamos papel picado, pois o papel produz resultados mais consistentes. No entanto, estudos piloto podem ser realizados para determinar qual material melhor suíte seus objetivos e seu orçamento.
Em uma sala de testes separada, defina as condições ambientais para que sejam consistentes em todos os ensaios e sejam idênticas à sala de alojamento, e forneçam comida e água para as gaiolas. Atribua a cada mouse um número de identificação ou letra aleatória. E registos da identidade original do animal e outras identificações necessárias em um registro de colônia para garantir que os assistentes e a equipe de pecuária permaneçam cegos às condições.
Peça aleatoriamente a colocação da gaiola na sala de testes, de tal forma que o tipo selvagem e os camundongos transgênicos não sejam inapropriadamente separados. E cubra o fundo de cada gaiola com 100 gramas de peso seco de roupa de cama corncob para os ensaios de papel quadrado, torção e papel picado. E 100 gramas de cama macia para os ensaios de espigas macias.
Em seguida, pouco antes de introduzir um rato em uma gaiola, coloque um único quadrado de algodão prensado, uma única torção de papel, nenhum material adicional adicionado à cama de espiga macia, ou 2,5 gramas de papel de impressora branca desfiado limpo cortado em tiras de cinco a sete centímetros. Ao mesmo tempo do dia, no início do ciclo de luz, leve a gaiola caseira contendo os ratos para a sala de testes. E transfira cada rato para sua gaiola de aninhamento atribuída com o material já na gaiola.
Quando todos os ratos tiverem sido colocados, devolva as gaiolas para a sala de alojamento e permita que os ratos completem o ensaio por 24 horas, sem serem perturbados. No final do ensaio, remova cuidadosamente a tampa de cada gaiola. E quando cada rato se mudar do ninho, fotografe cada ninho capturando a Áldia atribuída na fotografia, e minimizando o aparecimento de qualquer material fora da gaiola.
Quando cada ninho for fotografado, transfira suavemente cada rato para gaiolas temporárias individuais. E escolte a cama e qualquer material de aninhamento de cada gaiola. Em seguida, substitua a cama, forneça o próximo material de aninhamento na sequência.
E devolva o rato para a gaiola de aninhamento. Quando todos os ensaios tiverem sido concluídos, devolva os ratos para suas gaiolas domésticas e observe os ratos para qualquer comportamento agressivo potencial. Para manter a confiabilidade inter-relacionar, forneça imagens de base para cada material de aninhamento para pelo menos dois indivíduos cegos para o estudo.
E fornecer uma série de ninhos de amostras para familiarizar os pontuadores com cada tipo de material. Ao marcar os ninhos, uma pontuação de um deve ser atribuída quando o papel picado ou pequenos quadrados permanecem espalhados por toda a gaiola, ou o quadrado de algodão ou torção permanece intocado. Uma pontuação de dois é atribuída quando parte do material é construído em um ninho, mas mais de 50% do material não foi usado para a construção do ninho.
Uma pontuação de três é atribuída quando um ninho perceptível é construído, mas várias peças ainda estão espalhadas. Uma pontuação de quatro é atribuída quando quase todo o material é usado para o ninho, mas alguns pedaços de material permanecem espalhados ou estão perto do ninho. Uma pontuação de cinco é atribuída quando quase todo o material é usado para fazer um ninho não identificável.
Peça ao marcador para fazer uma pausa e revisitar fotos da linha de base para evitar fadiga e viés durante o procedimento de pontuação, conforme necessário. Quando todas as gaiolas forem pontuadas, insira as pontuações e formava o arquivo de dados para estar em formato longo, de tal forma que as pontuações dos animais estejam em colunas separadas. Nesta análise representativa em todos os quatro materiais fornecidos, os ratos de tipo selvagem obtiveram maior pontuação na qualidade do ninho em comparação com os camundongos APOE e4.
Com papel picado avaliado significativamente mais em qualidade do que o quadrado, roupa de cama ou materiais de torção. Sem diferenças observadas entre o quadrado, a cama e os materiais de torção. Além disso, neste experimento com camundongos htau, os animais mutantes de 5,5 meses de idade constroem um ninho a partir de papel triturado que eram significativamente piores do que aqueles construídos por sua idade combinavam com contrapartes do tipo selvagem.
As pontuações devem permanecer cegas às condições experimentais e rever os critérios de pontuação. Com as conclusões a serem sólidas e válidas, as confiabilidades inter e intra-rater também devem ser avaliadas. A escavação e a corrida de rodas circadianas são duas outras formas comuns de avaliar as atividades da vida diária.
E eles podem servir para elogiar o comportamento de aninhamento. O aninhamento pode ser usado como uma avaliação acessória para prever um possível declínio na cognição, ampliando o sopro de avaliações comportamentais em conjunto com o labirinto de água morris e a corrida de rodas circadianas.
