Este protocolo describe un modelo experimental único de los desordenes tic presentando el método para inducir tics del motor en una rata libremente-que se comporta, de una manera transitoria o crónica. La principal ventaja de este método es que describe el único modelo disponible de expresión de tics, que es ampliamente utilizado para estudiar el síndrome de Tourette y otros trastornos tic. La demostración visual aclara el complejo proceso de preparación de dispositivos a medida y la cirugía de implantación.
Demostrando el procedimiento estarán Esther Vinner, una estudiante graduada de mi laboratorio, y Katya Belelovsky, la gerente del laboratorio. Para comenzar, prepare una cánula de implante cortando un hipotubo de acero inoxidable calibre 25 y un cable interno extraíble ficticio de 0.013 pulgadas. Inserte este cable ficticio en la cánula del implante hasta que llegue al extremo y doble el exceso de alambre.
A continuación, corte un tubo de microbordo de polímero flexible de 70 centímetros para preparar el inyector. Prepare una cánula de inyección cortando un hipotubo de acero inoxidable calibre 30 con una herramienta rotativa. Inserte tres milímetros de esta cánula de inyección en un tubo flexible y pegue la articulación entre ellos para obtener un inyector.
Al realizar la cirugía, deslice el implante cannular sobre el soporte de la cánula y báblelo hasta el objetivo de implantación en el cerebro de la rata. Coloque la cánula implantada en el cráneo de la rata aplicando cemento dental. Inserte el maniquí preparado en esta cánula de implante y cubra todos los implantes aplicando cemento dental al resto del área del cráneo.
Para realizar la microinyección, conecte el inyector al microsyringe de vidrio de precisión lleno de bicucullina y configure los ajustes a una velocidad de 0,35 microlitros por minuto y un volumen total de 0,35 microlitros. Coloque la rata en la jaula experimental. Retire el maniquí e inserte el inyector en la cánula implantada a través del extremo.
Enciéndase la máquina de la bomba de infusión y realice un seguimiento de los tiempos de iniciación y terminación de los tics utilizando un cronómetro. Después de un minuto de la inyección, retire el inyector y vuelva a insertar lentamente el maniquí. Prepare una guía de cánula cortando un hipotubo de acero inoxidable calibre 25 de 12 milímetros y una cánula de infusión cortando un hipotubo de acero inoxidable de calibre 30.
Inserte un cable de 0,005 pulgadas de diámetro en la cánula de infusión y dóblalo en forma de L en la ubicación deseada. A continuación, prepare un tubo de catéter flexible cortando un tubo de pe10 de polietileno de ocho centímetros. Retire el cable interno de la cánula de infusión, pegue la guía de la cánula en la superposición de tres milímetros cerca de la parte doblada de la cánula de infusión con pegamento de cianocrilato y acelerador.
Luego inserte la parte horizontal de la cánula de infusión en el tubo del catéter. Expulse la tapa translúcida del moderador de flujo de la bomba. Sumerja el adaptador de tubería en alcohol al 70% y adjúntelo a la parte corta de la cánula del moderador de flujo hasta que toque la brida blanca.
Inserte el tubo flexible del catéter en el adaptador del tubo y sostenga su parte larga de la cánula usando un soporte de la clip mientras que pega todas las conexiones. Envuelva la mini bomba osmótica con una toallita de papel y fíjela verticalmente con la abertura hacia arriba usando un soporte de soporte para clip. Llene la bomba con aCSF usando una jeringa con una aguja roma calibre 27, teniendo cuidado de evitar la entrada de aire.
Llene la parte larga de la cánula del tubo de infusión con aCSF usando una jeringa con una aguja roma de calibre 27. E insértelo en la bomba. Coloque la bomba en un casto salina durante al menos cuatro a seis horas a 37 grados Centígrados.
Cree un bolsillo subcutáneo en la espalda de la rata abriendo y cerrando alternativamente un hemóstato esterilizado con alcohol debajo de la piel a través de la línea escapular media. Retire la bomba del baño de agua y colóquela en la parte posterior de las ratas cubierta con una toallita de papel. Deslice esa guía de cánula del tubo de infusión en el soporte de la cánula.
Sostenga la bomba con el hemóstato e insértela suavemente en el bolsillo subcutáneo. Implante la cánula de infusión en el objetivo y péguela al cráneo usando pegamento de gel. Fije la cánula de infusión, asegúrese de que el catéter esté libre de torceduras para permitir el movimiento del cuello y cubra todos los implantes con cemento dental.
Para realizar la cirugía de reemplazo de la bomba, comience a inyectar bicucullina en la bomba usando una jeringa con una aguja roma de calibre 27. Continúe inyectándose bicucullina mientras retira la jeringa para evitar que entre aire. Inserte el moderador de flujo dentro de la bomba y colóquela en un casto salina durante al menos cuatro a seis horas en un baño de agua de 37 grados Celsius.
Haga una incisión en la piel por encima de la bomba implantada. Lavar el bolsillo con aCSF a temperatura ambiente y secarlo con gasas. Suelte la bomba llena de aCSF del moderador de flujo usando un hemóstato y deséchelo.
Del mismo modo, desconecte y deseche el moderador de flujo de la bomba llena de bicucullina. Coloque suavemente la bomba llena de bicucullina al moderador de flujo implantado y pegue la línea de incisión con un adhesivo de tejido. En el modelo agudo, los tics comienzan a aparecer varios minutos después de la microinyección de la bicucullina y duran docenas de minutos, luego eventualmente decaen y cesan.
En el modelo crónico, los tics comienzan típicamente a aparecer en el primer día después de la implantación de la bomba bicuculline-llenada, que fluctúa durante el día y es más claramente observable durante el estado de vigilia reservado. Los tics motores tienen una firma cinemática estereotípica que se puede detectar en las señales del acelerómetro y del giroscopio. Semejantemente, la sincronización tic se puede también evaluar usando la señal potencial de los campos locales a través del camino cortico-básicos de los ganglios debido a el aspecto de los puntos transitorios de la amplitud grande LFP.
Estos modelos permitieron el estudio de la expresión de tics siguiendo diferentes intervenciones conductuales, ambientales y farmacológicas durante períodos prolongados de tiempo.
