Bu protokol, serbestçe davranan bir sıçanda motor tikleri teşvik etme yöntemini geçici veya kronik bir şekilde ortaya koyarak tik bozukluklarının benzersiz bir deneysel modelini açıklar. Bu yöntemin temel avantajı, Tourette sendromu ve diğer tik bozukluklarını incelemek için yaygın olarak kullanılan tek mevcut tik ekspresyon modelini tanımlamasıdır. Görsel gösterim, özel yapım cihaz hazırlama ve implantasyon cerrahisinin karmaşık sürecini netleştirmez.
Prosedürü gösterenler laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi Esther Vinner ve laboratuvar müdürü Katya Belelovsky olacak. Başlamak için, 25 kalibrelik paslanmaz çelik hipotüp ve 0.013 inç kukla çıkarılabilir iç tel keserek bir implant kanül hazırlayın. Bu sahte teli, sonuna ulaşana kadar implant kanüline yerleştirin ve fazla teli bükün.
Ardından enjektörü hazırlamak için 70 santimetre esnek polimer mikrobore tüpü kesin. 30 kalibrelik paslanmaz çelik hipotülü döner aletle keserek enjeksiyon kanülleri hazırlayın. Bu enjeksiyon kanının üç milimetresini esnek bir tüpe yerleştirin ve bir enjektör elde etmek için eklemi aralarında yapıştırın.
Ameliyatı yaparken, implant kannüler kanül tutucusuna kaydırın ve sıçanın beynindeki implantasyon hedefine kadar küçümseyin. İmplant edilen canülleri diş çimentosu uygulayarak sıçanın kafatasına takın. Hazırlanan mankeni bu implant canüle yerleştirin ve kafatası bölgesinin geri kalanına diş çimentosu uygulayarak tüm implantları örtün.
Mikroenjeksiyonun gerçekleştirilmesi için enjektörü biküküllinle dolu hassas cam mikrosiiringe takın ve ayarları dakikada 0,35 mikrolitre ve toplam 0,35 mikrolitre hacimde yapılandırın. Fareyi deneysel kafese yerleştirin. Mankeni çıkarın ve enjektörü implante edilmiş kanın ucuna yerleştirin.
İnfüzyon pompa makinesini çalıştırın ve kronometre kullanarak tic başlatma ve sonlandırma sürelerini takip edin. Bir dakikalık enjeksiyondan sonra enjektörü çıkarın ve kuklayı yavaşça yeniden takın. 12 milimetre 25 kalibre paslanmaz çelik hipotüp ve 30 kalibrelik paslanmaz çelik hipotüp keserek infüzyon kanül keserek bir kanül kılavuzu hazırlayın.
İnfüzyon kanüline 0.005 inç çapında bir tel yerleştirin ve hedeflenen yerde L şekline bükün. Daha sonra, sekiz santimetrelik bir polietilen PE10 tüpü keserek esnek kateter tüpü hazırlayın. İç teli infüzyon kanülünden çıkarın, kanül kılavuzunu siyanoakrilat tutkal ve hızlandırıcı kullanarak infüzyon kanüllerinin bükülmüş kısmının yakınında üç milimetre üst üste yapıştırın.
Daha sonra infüzyon kanülün yatay kısmını kateter tüpüne yerleştirin. Pompa akış moderatörünün yarı saydam kapağını dışarı fırlatın. Boru adaptörünü %70 alkole batırın ve beyaz flanşına dokunana kadar akış moderatörünün kısa ampul kısmına takın.
Esnek kateter borusunu boru adaptörüne yerleştirin ve tüm bağlantıları yapıştırırken bir klips standı kullanarak uzun cannula kısmını tutun. Mini ozmotik pompayı bir kağıt mendille sarın ve bir klips tutucu standı kullanarak açıklık yukarı bakacak şekilde dikey olarak sabitlayın. Pompayı 27 kalibrelik künt iğne ile şırınga kullanarak aCSF ile doldurun ve hava girişini önlemeye dikkat edin.
27 kalibrelik künt iğne ile şırınga kullanarak infüzyon tüpünün uzun kanül kısmını aCSF ile doldurun. Ve pompaya takın. Pompayı 37 santigrat derecede en az dört ila altı saat tuzlu bir kabın içine yerleştirin.
Alternatif olarak orta kürek kemiği çizgisinden cildin altında alkol sterilize edilmiş bir hemostat açıp kapatarak sıçanın sırtında deri altı bir cep oluşturun. Pompayı su banyosundan çıkarın ve kağıt mendille kaplı farelerin üzerine yerleştirin. Kanül tutucu üzerinde infüzyon tüpünün kanül kılavuzunu kaydırın.
Pompayı hemostatla tutun ve hafifçe deri altı cebine yerleştirin. İnfüzyon kanüllerini hedefe yerleştirin ve jel tutkal kullanarak kafatasına yapıştırın. İnfüzyon kanülünü sabitle, kateterin boyun hareketine izin vermek için bükülmez olduğundan emin olun ve tüm implantları diş çimentosu ile örtün.
Pompa değiştirme ameliyatı yapmak için, 27 kalibrelik künt iğneli bir şırınga kullanarak pompaya biküküllin enjekte etmeye başlayın. Havanın girmesini önlemek için şırınnayı çıkarırken bikükülin enjekte etmeye devam edin. Akış moderatörünü pompanın içine yerleştirin ve pompayı 37 santigrat derecelik bir su banyosunda en az dört ila altı saat boyunca tuzlu bir kabın içine yerleştirin.
İmplantlı pompanın üzerindeki deride bir kesi yapın. Cebi oda sıcaklığında aCSF ile yıkayın ve gazlı bez pedleri ile kurulayın. ACSF dolu pompayı bir hemostat kullanarak akış moderatöründen ayırın ve atın.
Benzer şekilde, akış moderatörünü ikikülli dolu pompadan ayırın ve atın. Biküküllin dolu pompayı implante akış moderatörüne hafifçe takın ve kesi hattını bir doku yapıştırıcısı ile yapıştırın. Akut modelde, tikler bikükülin mikroenjeksiyondan birkaç dakika sonra ortaya çıkmaya başlar ve düzinelerce dakika sürer, daha sonra sonunda çürür ve durur.
Kronik modelde, tikler tipik olarak gün boyunca dalgalanan ve sessiz uyanma durumu sırasında en net şekilde gözlemlenebilen bikükülin dolu pompa implantasyonunu izleyen ilk günde ortaya çıkmaya başlar. Motor tikleri, ivmeölçer ve jiroskop sinyallerinde tespit edilebilen stereotipik kinematik bir imzaya sahiptir. Benzer şekilde, tic zamanlaması, büyük genlik LFP geçici sivri uçlarının ortaya çıkması nedeniyle kortiko-bazal gangliyon yolu boyunca yerel alanlar potansiyel sinyali kullanılarak da değerlendirilebilir.
Bu modeller, uzun süre farklı davranışsal, çevresel ve farmakolojik müdahaleleri takiben tik ekspresyonun incelenmesini sağladı.
