El Dr. Darren Freed creó este dispositivo ESLP, y utiliza tecnología y software patentados de ventilación con presión negativa, que no se pueden ver en ningún otro lugar en el campo de la investigación de ESLP. Nuestro laboratorio ha demostrado previamente que la ventilación con presión negativa causa menos lesión pulmonar durante la ESLP en comparación con la ventilación con presión positiva. Esto es probablemente debido al mecanismo más fisiológico de la ventilación con presión negativa.
Este dispositivo y protocolo están diseñados para extender el tiempo de preservación segura de los pulmones de los donantes y para reacondicionar los pulmones marginales a estándares aceptables de trasplante. El dispositivo en sí es muy simple de operar. El mayor desafío es extirpar quirúrgicamente los pulmones de los cerdos juveniles sin causar ninguna lesión.
Son extremadamente frágiles en comparación con los pulmones humanos adultos. Comience por mantener el volumen corriente espiratorio de 10 mililitros por kilogramo aumentando las presiones máximas para el reclutamiento alveolar máximo. Realizar una esternotomía de línea media.
Use electrocauterio para incidir la piel y el tejido subcutáneo. Diseccionar sin rodeos las uniones de tejidos blandos de la tabla posterior del esternón inferior. Use una sierra esternal para dividir el esternón.
Inserte un retractor esternal y ábralo de par en par. Después de realizar la cardiectomía, abra y retire la pleura mediastínica bilateralmente para exponer los pulmones. Luego divida las uniones pleurales del diafragma hacia el lóbulo pulmonar inferior izquierdo, usando un retractor Deaver para sostener el diafragma hacia arriba.
Ahora, divide el ligamento pulmonar inferior a la izquierda y continúa hacia el hilio. A continuación, divida la vena cava inferior y las uniones pleurales del diafragma, y luego retraiga el diafragma hacia arriba usando el retractor Deaver. Divida el ligamento pulmonar inferior en el lado derecho y continúe hacia el hilio.
Luego divida la vena innominada y arquee los vasos para exponer la tráquea. Después de diseccionar sin rodeos el tejido que rodea la tráquea, sujete la tráquea con una abrazadera de tubo en la inhalación máxima, asegurándose de que el volumen corriente espiratorio sea de 10 mililitros por kilogramo. Transecto la tráquea y levante la porción de la pinza hacia arriba para proporcionar tracción quirúrgica.
Luego disecciona la tráquea posterior del esófago usando una disección roma con tijeras pesadas de Metzenbaum y una mano libre. Divida cualquier accesorio pleural restante. Transectar la aorta por encima y por debajo del bronquio izquierdo y extraer los pulmones del tórax con un segmento de aorta descendente.
Después de pesar los pulmones con la pinza, guárdelos rápidamente en un refrigerador lleno de hielo. Comience agregando 500 mililitros de glóbulos rojos empaquetados al circuito de perfusión para alcanzar un volumen final de 1.5 litros de perfusión. Tome fotografías de los pulmones para registros de datos.
Para la biopsia pulmonar, rodee una porción de un centímetro cúbico con cero sutura de seda y átela. Luego extirpe esta porción atada, usando tijeras para el análisis de tejidos como se describe en el manuscrito de texto, y divida el segmento de biopsia. Luego, para asegurar el adaptador de tubo de media pulgada de 3/8 a la arteria pulmonar principal, agarre los lados opuestos de la arteria pulmonar principal con fórceps o broches.
Luego, inserte el adaptador con la porción de media pulgada en la arteria pulmonar principal y manténgalo en su lugar mientras asegura simultáneamente el adaptador en su posición usando lazos de seda cero o Ethibond. Ahora coloque los pulmones en posición supina sobre la membrana de soporte de silicona y conéctelos al dispositivo ESLP. Coloque una segunda pinza de tubo en la tráquea cerca de la ubicación del bronquio traqueal.
Después de retirar la pinza más distal, intubar la tráquea con el tubo endotraqueal y asegurarla en posición con dos bridas. Luego sujete la línea de ventilación con una abrazadera de tubo antes de liberar la pinza proximal de la tráquea. Conecte el adaptador de la arteria pulmonar a la línea de la arteria pulmonar.
Una vez que la arteria pulmonar principal esté desaireada, comience el tiempo de perfusión. En la página de configuración, haga clic en iniciar calentador y establezca la temperatura en 38 grados centígrados. Ingrese el peso del cerdo para calcular el flujo de gasto cardíaco.
En la página principal, establezca la presión positiva continua en las vías respiratorias en 20 centímetros de agua y haga clic en iniciar presión positiva continua en las vías respiratorias. Cuando comience la ventilación, desenganche la línea de ventilación. Después de poner a cero el sensor de presión arterial, sujete la línea de la arteria pulmonar por encima del sensor de presión con la abrazadera de tubo.
Abra el sensor, haga clic en cero presión arterial pulmonar y cero flujo sanguíneo en la página de configuración y confirme que las lecturas están a cero en la página principal. Cierre la llave de paso del sensor de presión para leer la presión de la línea. Abra la línea a la cánula de la arteria pulmonar.
Seleccione 10% de gasto cardíaco en la página principal. Haga clic en volver al manual de PA y desenganche la línea pulmonar. Cambie la solución de perfusión en la tapa superior antes de asegurarla a la máquina para evitar la formación de condensación durante el ESLP.
Extraiga 10 mililitros de perfusato para el análisis centrífugo y extraiga una gasometría arterial de tiempo cero. Coloque la muestra en hielo antes de la centrifugación. Una vez que los pulmones se han perfundido durante 10 minutos, aumentar el flujo al 20% del gasto cardíaco.
Cuando la temperatura de perfusión alcance los 32 grados centígrados, asegure la tapa de la cámara en su lugar con abrazaderas para crear un sello hermético. Asegúrese de que los pulmones estén posicionados de manera óptima y que se reparan las fugas de aire. Con la tapa asegurada, sujete el tubo de ventilación antes de apagar la presión positiva continua en las vías respiratorias.
En la página de configuración, seleccione presión intratorácica cero, presión de las vías respiratorias y flujo de aire. Luego, confirme que las lecturas están a cero en la página principal. Haga clic en iniciar CPAP antes de dessujetar el tubo de ventilación.
Establezca los parámetros de ventilación mencionados en el texto manuscrito y haga clic en presionar para iniciar la ventilación para activar la ventilación con presión negativa. Conecte el tubo de ventilación del puerto lateral a la cámara. Durante las siguientes respiraciones, mantenga los parámetros de ventilación como se menciona en el texto manuscrito.
Después de 10 minutos de perfusión, aumente el flujo al 20% y después de 20 minutos de perfusión, aumente el flujo al 30% de gasto cardíaco. Agregue dextrosa e insulina al sistema. Evaluar la función pulmonar, utilizando un gasto cardíaco del 50% y un gas de barrido mixto desoxigenante durante una duración de cinco minutos, según las instrucciones del manuscrito.
En cada hora impar durante el modo de conservación, extraiga una muestra de 10 mililitros de perfusado para análisis futuros. Extraiga un mililitro de muestra de gas arterial predesoxigenadora cada hora y de los puertos previos y posteriores al desoxigenador después de cinco minutos del modo de evaluación. Las tendencias en la presión arterial pulmonar media, la distensibilidad dinámica y la resistencia vascular pulmonar durante 12 horas de perfusión y ventilación pueden verse afectadas por el protocolo experimental específico de ESLP empleado.
Aquí se demuestra una tendencia típica para la relación de presión parcial de oxígeno arterial y fracción de oxígeno inspirado en los puntos de tiempo de evaluación de cinco y 11 horas durante la perfusión pulmonar ex situ de ventilación con presión negativa. La formación de edema es otro índice importante de inflamación asociado con la permeabilidad endotelial, demostrando un aumento de peso típico del 30% al final de 12 horas de ventilación con presión negativa de perfusión pulmonar ex situ. El perfusato actúa como un indicador sustituto del estado pulmonar general.
Por lo tanto, el análisis de gases en sangre del perfusión proporciona amplia información sobre el estado metabólico de los pulmones. Durante el modelo de evaluación de ESLP, que ocurre a las tres, cinco, siete, nueve y 11 horas durante una carrera de 12 horas, se observa una tendencia al alza en la presión parcial izquierda de oxígeno. Es muy importante ser lo más suave posible al extirpar quirúrgicamente los pulmones y también moverse rápida y eficientemente.
El establecimiento de este dispositivo, protocolo y laboratorio ha llevado a un ensayo clínico exitoso y varios descubrimientos que prolongan la preservación y el reacondicionamiento de los pulmones de los donantes.
