Anteriormente, el principal método para examinar el efecto de las sustancias químicas sobre la contractilidad arterial era mediante miografía con alambre ex vivo en baños de órganos. La importancia de esta técnica es que se pueden examinar in vivo los efectos de los productos químicos y la manipulación génica en el segmento de un vaso. La principal ventaja de esta técnica es que se puede realizar una exposición crónica y una evaluación a largo plazo del efecto de los fármacos sobre la contractilidad arterial y el flujo sanguíneo.
Esto no es posible en vasos aislados en baños de órganos. Para comenzar a exteriorizar al feto, asegúrese de que la anestesia tenga una profundidad adecuada en la oveja. Realice una incisión de laparotomía estándar de 10 centímetros con una hoja de bisturí número 20 sobre el alba lineal desde el ombligo hasta la porción craneal de la ubre.
A continuación, haga una pequeña incisión a través de la línea media de la pared del cuerpo debajo de la incisión en la piel y abra la cavidad abdominal con unas tijeras Metzenbaum. Exteriorizar el útero que contiene al feto a través de la pared abdominal, mientras se colocan toallas quirúrgicas estériles debajo entre el abdomen materno y el útero. A continuación, palpar el útero para determinar la posición fetal y las introducciones caudales.
Con una cauterización, haga una incisión de 10 centímetros a través de la pared uterina con una gran curvatura sobre el dorso de la cabeza, evitando los vasos sanguíneos y los placentomías visibles. A continuación, con cuatro pinzas de Babcock, asegure el útero y las membranas placentarias, y tire de las pinzas de Babcock en las cuatro esquinas opuestas para que la cabeza del feto sea visible. Exteriorice la mitad craneal del feto a través de esta incisión y cubra la cabeza con un guante estéril sin látex lleno de solución salina estéril tibia a una temperatura de 37 grados centígrados para evitar el inicio de la respiración.
Para realizar la instrumentación del catéter perivascular de la arteria carótida, con el cuello del feto expuesto, realice una incisión cutánea oblicua de tres a 3,5 centímetros a lo largo del borde anterior del músculo esternocleidomastoideo o SCM en un lado del cuello en la región media. A continuación, separe la fascia con unas pinzas para mosquitos. Divida el platisma y diseccione a lo largo del borde medial del músculo SCM desde su tendón superiormente y hasta el nivel del músculo omohioideo inferiormente.
Retraiga la piel con las pinzas Babcock. Realice una disección roma para liberar la arteria carótida del tejido circundante y de la lámina carótida. A continuación, tome una sonda de flujo de tres milímetros del paquete estéril, desenrosque la placa de respaldo y deslícela para abrirla para exponer el soporte en L.
Con unas pinzas, cierre el soporte de la sonda de flujo deslizando suavemente la placa de respaldo hasta una posición cerrada. A continuación, fije el soporte de la sonda de flujo apretando el tornillo de respaldo de la sonda de flujo. Coloque un catéter perivascular previamente lavado cerca de la arteria carótida proximal a la sonda de flujo con una sutura de seda no absorbible 3.0.
Asegure las longitudes proximal y distal del sistema perivascular y la sonda de flujo al tejido intersticial cercano. Con un punto de sutura continuo, cierre el sitio de la incisión y la piel fetal con una sutura 3.0 no absorbible. Asegure los catéteres a la piel envolviendo la sutura alrededor del catéter tres veces.
Después de quitarse el guante, vuelva a colocar la cabeza del feto en el útero. Para realizar el cateterismo de la extremidad fetal, exteriorice la pata trasera del feto, sostenga la pierna y gírela hacia los lados para visualizar el área interna del muslo. Después de limpiar la zona con una gasa estéril, realizar una incisión de dos centímetros y exponer la arteria femoral.
Coloque y asegure la sonda de flujo como se demostró anteriormente para la carótida, y cierre la incisión. A continuación, haz una incisión de dos centímetros a lo largo de la cara medial de la tibia, aproximadamente 0,5 centímetros distal a la rodilla. Exponga la arteria tibial posterior de paredes gruesas y la vena safena de paredes delgadas.
Para insertar catéteres de polivinilo, utilizando una técnica de corte estándar, libere el vaso de interés con disección roma. A continuación, ligar la porción distal del vaso con una sutura de seda 3.0, y sin aguja, utilizando un nudo cuadrado con tres lanzamientos. Coloque un segundo lazo libre de seda en la cara proximal del vaso, pero deje la ligadura desatada.
Con unas tijeras Castroviejo, realizar un pequeño corte transversal en el vaso de dos milímetros proximales a la ligadura distal. Restrinja el flujo sanguíneo de los vasos tirando suavemente hacia arriba de la sutura proximal desatada. A continuación, llene el catéter con solución salina heparinizada estéril.
Inserte el extremo biselado del catéter y avance la punta 20 centímetros en el vaso fetal. Sostenga el catéter en su lugar con fórceps mientras un asistente ata la sutura proximal sin seda para asegurar el vaso al catéter. Libar el vaso completamente alrededor del catéter insertado usando nudos cuadrados a dos milímetros del sitio de inserción con tres lanzamientos.
A continuación, ate la ligadura distal proximal a la ligadura proximal, asegurando el vaso al catéter. Cierre la incisión en la piel con una sutura no absorbible 3.0, utilizando un patrón continuo. Asegúrese de que las suturas estén atadas alrededor de los catéteres para evitar restringir el flujo sanguíneo si se tira.
Coloque un catéter previamente lavado en el útero y asegúrelo al feto mediante una sutura con una sutura 3.0 no absorbible. Vuelva a colocar el feto en el útero. Suturar las membranas fetales con suturas 3.0 no absorbibles con un patrón de bloqueo continuo, y luego cerrar la capa muscular uterina con una sutura 3.0 no absorbible.
Inserte una varilla quirúrgica de acero inoxidable de 18 pulgadas por vía subcutánea a lo largo de la pared abdominal hasta la región paracostal. Conecte los catéteres al extremo distal de la varilla quirúrgica, haciendo que un asistente alimente los catéteres y el cable de la sonda de flujo a través del sitio de salida paracostal empujando la varilla completamente a través de la abertura paracostal. A continuación, asegure todos los catéteres y los cables de la sonda de flujo en el sitio de la incisión paracostal.
Después de colocar la cinta impermeable, sutura los catéteres a la piel de la oveja. Suturar una bolsa de malla de plástico en el exterior de la oveja sobre los catéteres y la sonda para almacenar los catéteres. Usando un material de sutura absorbible sintético monofilamento 1.0, asegure la línea alba con un patrón continuo y asegure la capa de piel con grapas quirúrgicas.
Para medir el flujo sanguíneo, conecte las sondas de flujo insertadas en el feto con el módulo de flujo perivascular a PowerLab y a una computadora conectada. Conecte los catéteres arteriales y amnióticos al amplificador de puente conectado a un convertidor de analógico a digital. Administrar un bolo de un mililitro de fenilefrina de 10 micromolares al feto por vía intravenosa y medir el flujo carotídeo y femoral durante 15 minutos.
Luego espere 30 minutos o hasta que el flujo sanguíneo vuelva a la línea de base. A continuación, infunda un mililitro de 10 micromolares de fenilefrina en el catéter perivascular y mide el flujo sanguíneo durante 15 minutos. Lavar la fenilefrina administrando cinco mililitros de solución salina tibia a través del catéter perivascular.
Luego espere 30 minutos o hasta que el flujo sanguíneo vuelva a la línea de base. Este estudio examinó los efectos localizados de la manipulación del flujo sanguíneo en fetos y ovejas a corto plazo y prematuros. Al administrar un mililitro de 10 micromolares de fenilefrina, un agonista alfa-1 de AR, en el espacio perivascular de la arteria carótida, se observó una reducción significativa en el flujo sanguíneo carotídeo tanto en las ovejas fetales a término como en el feto prematuro sin ningún efecto sobre la presión arterial sistémica.
Por el contrario, la administración de fenilefrina por vía intravenosa causó un aumento significativo en el flujo sanguíneo sistémico tanto en ovejas fetales a término como en fetos prematuros sin afectar el flujo sanguíneo carotídeo. Los resultados revelaron que los fetos prematuros no responden a la regulación del flujo sanguíneo carotídeo mediada por fenilefrina, sin embargo, la respuesta es madura en los fetos a corto plazo. En particular, la administración intravenosa de fenilefrina aumentó el flujo sanguíneo carotídeo solo en fetos prematuros, sin un efecto significativo en fetos a corto plazo.
Sin embargo, la administración intravenosa de fenilefrina elevó la presión arterial sistémica tanto en fetos prematuros como a término. Los resultados también demuestran que la instalación perivascular de fenilefrina no afectó la presión arterial sistémica. Se debe tener sumo cuidado al realizar una disección roma para identificar los vasos y cortarlos para insertar el extremo biselado del catéter.
La muesca debe ser pequeña y evitar cortar todo el recipiente. Este método puede medir la contractilidad de los vasos sanguíneos y el flujo sanguíneo de cualquier vaso. También se puede utilizar para administrar productos químicos y vectores cerca de las proximidades del órgano o tejido al que se va a dirigir.
Esta técnica se puede utilizar para determinar los cambios en la autorregulación del flujo sanguíneo cerebral en el útero en un feto en desarrollo, y dirigirse a cualquier gen para regular o silenciar la transcripción.
