Hemos desarrollado un modelo para reducir las complicaciones asociadas con la perfusión normotérmica ex situ y aumentar el tiempo de conservación segura de los corazones de los donantes. En comparación con los modelos animales alternativos, este modelo es simple y rentable, y puede ser ejecutado por un solo experimentador. Este modelo puede ser útil para probar la efectividad a largo plazo de las intervenciones farmacológicas y genéticas en los corazones de los donantes después de los trasplantes.
El procedimiento quirúrgico requiere habilidad microquirúrgica. El factor clave para lograr el éxito en este modelo es practicar y centrarse en los pasos críticos descritos en el manuscrito. Para comenzar, ensamble el aparato de Langendorff, incluidas las líneas de oxigenación, bomba y perfusión.
Llene el circuito de perfusión con 20 mililitros de solución salina y hágalo circular hasta que se cebe con sangre autóloga. En la rata donante anestesiada, realizar una incisión abdominal de 7 centímetros en la línea media y, a continuación, incisiones bilaterales de 3 centímetros desde la apófisis xifoides hasta la mitad de la clavícula. Retire la piel de la región torácica.
Inyecte 1.000 unidades internacionales de heparina disuelta en 0,3 mililitros de solución salina isotónica a través de la vena cava inferior con una jeringa de 1 mililitro Detenga cualquier sangrado del orificio de la aguja comprimiéndolo suavemente con un hisopo de algodón. Inserte un catéter femoral de 5 French en la aorta abdominal. Asegúrese de que la punta del catéter llegue al arco aórtico y confirme la ubicación del catéter evaluando la longitud aproximada de la parte insertada del catéter.
Recolectar alrededor de 10 mililitros de sangre a través del catéter insertado en la aorta abdominal. Conecte la línea de perfusión de la solución cardiopléjica al catéter abdominal e inicie la administración de la solución cardiopléjica con la bomba de jeringa a una velocidad de 800 mililitros por hora. Abra la cavidad torácica desde el diafragma y corte la vena cava inferior cerca del diafragma para evitar la distensión ventricular.
Corta las costillas bilateralmente a lo largo de la columna torácica hasta la entrada torácica. Reflejar la pared torácica ventral movilizada de forma superior con pinzas antimosquitos. Después de administrar toda la solución cardiopléjica, aísle el arco aórtico de los tejidos circundantes y diseccione cuidadosamente justo debajo de la arteria subclavia izquierda.
Transecte las arterias braquiocefálicas y carótidas comunes izquierdas en una posición distante, dejando los muñones más largos del arco aórtico para facilitar su manipulación durante la canulación de la aorta. A continuación, realice un transecto de la arteria pulmonar principal lo más cerca posible de la bifurcación. Ligar cuidadosamente la vena cava superior y la vena cava inferior con suturas de seda 5-0, evitando la obstrucción de la aurícula derecha y el seno coronario.
Cubra los márgenes izquierdos del tórax con una gasa húmeda, coloque el corazón sobre ella y retraiga suavemente las ligaduras de la vena cava superior y la vena cava inferior para exponer el hilio. Ligar las venas pulmonar y ácigos junto con una sutura de seda 5-0. Cortar el tejido dorsal a la ligadura y extraer el corazón.
Pesar el corazón después de examinarlo en busca de cualquier lesión. Reemplace el circuito cebado con solución salina con cebado de sangre e inicie la perfusión a un caudal de dos a tres mililitros por minuto, permitiendo que la perfusión se filtre del sitio de canulación para eliminar las burbujas de aire. Después de colocar la ligadura permanente, asegúrese de que el corazón comience a contraerse en unos pocos segundos y alcance un ritmo normal en 60 segundos.
Una presión media de perfusión de 55 a 65 milímetros de mercurio con un flujo coronario de tres a cuatro mililitros a 37 grados centígrados indica una perfusión adecuada. Recoja 0,15 mililitros de sangre del depósito y verifique el análisis de gases en sangre al comienzo de la perfusión y cada 20 minutos a partir de entonces. Después de 120 minutos de perfusión, administre tres mililitros de Custodiol a través de la bomba de jeringa a una velocidad de 250 mililitros por hora para detener el corazón.
Realizar la laparotomía de línea media e insertar un retractor para ensanchar la cavidad abdominal. Movilice los órganos abdominales hacia el lado izquierdo del receptor con hisopos de algodón para hacer espacio para el procedimiento. Utilizando un microscopio quirúrgico con un aumento de 10x, movilice el duodeno y el yeyuno proximal mediante disección roma con hisopos de algodón.
para exponer la aorta abdominal y la vena cava inferior. Coloque ligaduras de seda 5-0 en las ramas mesentéricas de los lados craneal y caudal de los vasos principales. Elevar los vasos abdominales y coagular o ligar las ramas lumbares con suturas de seda 5-0.
Recuerde preservar las arterias y venas testiculares, y no pinzarlas. Use ligaduras para levantar los vasos y coloque las micropinzas en las ramas mesentéricas, los lados caudal y craneal de los vasos principales para detener el flujo sanguíneo en el sitio de la anastomosis. Punción de la aorta con una aguja de calibre 27 y alargar la incisión con microtijeras hasta una longitud igual o ligeramente mayor que la abertura de la aorta ascendente del donante.
Realice una incisión longitudinal de la vena cava inferior de la misma manera que la aortotomía, pero hágala tres milímetros más cerca del lado caudal en comparación con la incisión de la aorta. Al comenzar las anastomosis, coloque el corazón del donante en el lado derecho del abdomen del receptor y fije la aorta ascendente del donante a la aorta abdominal del receptor con un punto simple interrumpido en la esquina craneal de la incisión longitudinal. Mueva el corazón hacia el lado izquierdo del abdomen del receptor y realice una anastomosis de la aorta ascendente del donante con la aorta abdominal del receptor, utilizando una sutura de polipropileno 9-0 corrida.
Fijar la arteria pulmonar donante a la vena cava inferior con dos suturas interrumpidas en las esquinas caudal y craneal de la incisión longitudinal. Una vez finalizada la anastomosis, retire la pinza caudal y la pinza craneal. Asegurando una hemostasia adecuada, reemplace los órganos abdominales en forma de meandro y cierre las capas de la incisión abdominal con suturas continuas de polipropileno 5-0.
En esta figura se muestran los parámetros utilizados para evaluar la viabilidad del corazón durante la perfusión ex situ, como el lactato, el potasio y la presión aórtica media. En este caso, el uso de la preservación normotérmica ex situ disminuyó el tiempo isquémico total de seis casos exitosos a 46,2 más-menos 4,7 minutos, mientras que el tiempo total fuera del cuerpo fue de 166,2 más-menos 4,7 minutos. La extracción del corazón del donante y la preparación para la perfusión ex situ y el trasplante heterotópico requerido fue de 5,8 más-menos 1,3 minutos.
La tasa de éxito global de la cirugía fue del 70% y el tiempo medio de anastomosis de los seis casos exitosos fue de 38,4 más-menos 3,4 minutos. En esta figura se presenta el rendimiento electrofisiológico del corazón del donante antes de la obtención y después de la implantación. En todos los experimentos, la frecuencia cardíaca disminuyó significativamente inmediatamente después de la implantación, pero finalmente se recuperó con el tiempo.
Aquí se muestra el aspecto macroscópico y microscópico del corazón del donante antes de la preservación normotérmica ex situ, después de la preservación normotérmica ex situ y después de dos horas de implantación heterotópica. Al realizar este procedimiento, es importante extraer suficiente sangre para la perfusión, cortar cuidadosamente la aorta sin dañar la parte ascendente y vigilar de cerca los parámetros fisiológicos durante la preservación. Siguiendo este procedimiento, podemos probar la eficacia de las nuevas soluciones de conservación y la respuesta inmunitaria del receptor a los métodos de conservación recientemente introducidos.
Con la combinación de la perfusión ex situ y el trasplante heterotópico, podemos investigar técnicas novedosas a través de un tiempo de conservación prolongado y observar el impacto a largo plazo en la respuesta inmunitaria del receptor.
