Estamos interesados en comprender los procesos fisiológicos que ocurren en toda la célula, particularmente en la interfaz de la membrana. Utilizamos Cryo-EM como técnica principal y trabajamos en varios problemas biológicos interesantes y desafiantes estudiando múltiples complejos macromoleculares. Determinar las estructuras de las proteínas de membrana y otros complejos lábiles era un desafío hace un par de décadas.
Sin embargo, los avances técnicos en Cryo-EM, un nuevo detergente y mimético lipídico y con dotaciones, allanaron el camino para la determinación rápida de la estructura de estos complejos. Estas estructuras ahora se pueden obtener a alta resolución y potencialmente usar en el descubrimiento de fármacos. En Cryo-EM de una sola partícula, los desafíos incluyen la adquisición de muestras estables y homogéneas, la inclusión de la muestra en orientación aleatoria en hielo delgado, el procesamiento de una gran cantidad de imágenes con una baja relación señal-ruido y la determinación precisa de la orientación angular y la clasificación durante la reconstrucción 3D.
La identificación y el modelado de moléculas pequeñas en mapas crio-EM de complejos de proteínas ligandos es un desafío debido al ruido inherente en los datos y la baja resolución del mapa isotrópico, la heterogeneidad de la muestra y la flexibilidad del ligando. Este protocolo es una guía paso a paso para identificar y modelar ligandos y moléculas de solvente en Cryo-EM de baja a media resolución.
