Ensayo de sangre total con coestimulación dual para el análisis específico de antígenos de la inmunidad del huésped a patógenos fúngicos y virales

Nuestra investigación se centra en la monitorización inmunitaria de pacientes en la unidad de cuidados intensivos. Algunos pacientes desarrollan neumonía viral grave durante la ventilación mecánica. Aislamos la causa de los virus, pero también caracterizamos la respuesta inmune local y sistémica utilizando el protocolo presentado en este video para identificar factores de riesgo inmunológico.

Los ensayos tradicionales de células T específicas de antígeno que se basan en células mononucleares aisladas son muy susceptibles a los factores de confusión preanalíticos, requieren mucho tiempo y recursos, y requieren grandes cantidades de sangre. Esto plantea graves limitaciones para la implementación de ensayos de células T específicas de antígeno en la investigación clínica o el uso de rutina clínica como biomarcadores pronósticos o diagnósticos. Presentamos un protocolo de inmunoensayo versátil, que se adapta a varias lecturas posteriores de tan solo 250 micros de sangre por estímulo.

Esto permite aplicaciones, incluso cuando ese volumen es limitado o es necesario cribar varios antígenos. Además, nuestro ensayo es fácil de realizar y susceptible a varios patógenos. Además de su versatilidad y el bajo volumen sanguíneo requerido, nuestro protocolo utilizó como entorno de estimulación un entorno de optimización completa y específico para las respuestas de células T auxiliares inducidas por antígenos.

Esto se logró a través de la estimulación de doble núcleo, lo que también hace que el protocolo sea más robusto frente a factores de confusión, como la farmacoterapia inmunosupresora o los retrasos preanalíticos. Estamos utilizando este protocolo para la monitorización inmunitaria de pacientes con neumonía viral asociada a la ventilación. Nuestros colaboradores en Würzburg y Houston están trabajando en una traducción clínica de inmunoensayos específicos de citomegalovirus.

Además, están utilizando este protocolo para estudios sobre inmunopatogenia fúngica y estudios preclínicos de inmunoterapia en modelos de ratón para infecciones oportunistas.