Cuantificación de genomas virales adenoasociados en muestras de vectores purificadas mediante reacción en cadena de la polimerasa por gotas digitales

La DD PCR es una técnica ampliamente utilizada para determinar el título del genoma AAV, pero actualmente no existe un protocolo consensuado. Nuestro protocolo es una guía paso a paso validada sobre cómo preparar muestras y realizar DD PCR para una valoración precisa del genoma. En comparación con QPCR, DD PCR ofrece varias ventajas, incluida una mayor precisión, mayor robustez y una cuantificación más absoluta y directa de secuencias objetivo sin la necesidad de curvas estándar.

Además, con un conjunto de sondas de cebador bien diseñado, la DD PCR permite una tragedia específica en la detección, a diferencia de otras técnicas que detectan todo el ADN. El desarrollo de un protocolo de consenso estandarizado para la cuantificación del genoma del vector mejorará la fiabilidad y la uniformidad en el control de calidad del AAV recombinante en diferentes laboratorios. Esto facilitará tanto la investigación como las aplicaciones clínicas de los vectores recombinantes de AAV para la comunidad en general.