Évaluation de la sensibilisation comportementale induite par la cocaïne et de préférence de place conditionnée chez la souris

Résumé

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Résumé

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence². In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

Introduction

Research aimed at understanding drug addiction using animal models must take a variety of approaches to address each of the assorted components that obstruct treatment success, including reward/reinforcement/motivation and withdrawal and relapse, as well as the general persistence that further complicates these issues in addiction. Since rewarding experiences associated with taking a drug of abuse are thought to motivate subsequent use, studies focusing on drug-context associations may be particularly useful for understanding brain mechanisms that contribute to drug taking and seeking. One such assay, conditioned place preference (CPP) is a high-throughput method for comparing group differences in reward sensitivity. The traditional interpretation of the task involves classical, or Pavlovian, conditioning, where a conditioned stimulus (CS) is paired with an unconditioned stimulus (UCS), and after multiple pairings, the CS elicits the same behavior as the UCS (however, see^39,40). Theoretically, animals learn to associate an interoceptive state (reward or aversion) with contextual cues. The relative aversive or appetitive intensity of the interoceptive state is then assessed by then determining the animal's preference for the contextual cues. The use of place conditioning to measure drug-reward associations dates back to at least 1957, to a study using morphine on rats in a Y-maze^3,4. Over the past several decades, variations on this method have been widely used to study place preference and aversion in rodents to various stimuli, and it remains particularly useful in the study of associations induced by drugs of abuse. In drug-addiction research, the assay has been used to assess the rewarding properties of a number of drugs and the contribution of different brain systems and proteins to drug reward (for reviews, see^5-7,44). While there are superior methods of assessing factors that contribute to drug addiction, namely drug self-administration, CPP is a simple and much more accessible approach to measuring reward function.

Most current protocols for conditioned place preference and aversion (CPA) use an apparatus that allows rodents to have access to two distinct chambers, either via a doorway or smaller connecting chamber. Distinctions between the two chambers are often based, at a minimum, on visual and tactile cues, including wall color and floor texture, but sometimes include other elements, such as olfactory cues. "Biased" designs typically attempt to reverse a pre-existing, innate preference for one chamber over the other, such as the one that rodents generally show for a black chamber over white. "Unbiased" designs aim to create a preference to one of two chambers that were initially equally appealing by randomly counterbalancing assignment to either chamber within a group. A "balanced" design is used when animals show small preferences, but do not, as a group, favor the same chamber. Goals of this latter design are to produce 1) pre-test preference scores for the (eventual) cocaine-paired chamber that are not significantly different between experimental groups and 2) negligible preference for the cocaine-paired chamber at pre-test, either positive or negative⁸. The balanced design is ideal for use with the described chambers, which utilize contradicting biases for wall color (black over white) and flooring (wire over bar), resulting in a roughly equal distribution of small preferences for both the black and white sides in different animals. Balancing calculations are described in further detail below.

During conditioning, animals are exposed to a drug and quickly placed into one of these two environments for a limited time period. Exposure is typically via intraperitoneal (i.p.) or sometimes subcutaneous (s.c.) injection, although paradigms for intravenous (i.v.) self-administration⁹, and intracranial infusions³⁸ in a place preference apparatus have also been developed. These pairings are complemented by non-drug (vehicle) pairings of the same length conducted in the opposite chamber, which can take place on the same day as drug pairings or on separate days. In general, when allowed to explore the apparatus after conditioning, animals will spend more time where they received a rewarding drug (i.e., one that humans and animals will voluntarily self-administer), while they will avoid a place where they were given a drug that induced illness (e.g., lithium chloride). Several studies have been dedicated to optimizing the conditions for place preference to different drugs of abuse (for review, see⁷). Cocaine doses (i.p.) for mice generally range from 1 to 20 mg/kg, with doses less than 5 mg/kg often used to parse high sensitivity in one group. Two or more drug pairings are typically required for adult mice¹⁰, and the length of these pairings is an important consideration. Very low doses of cocaine require an immediate and brief conditioning, likely because this method captures the most rewarding period of the exposure. Delayed or very long conditioning periods can result in no preference, or may even induce aversion^11,12. Here is presented a basic method for obtaining conditioned place preference to cocaine in adult mice.

While the CPP assay is an ideal method for assessing reward-related learning and memory of drug-context associations, behavioral sensitization is arguably easier to perform and allows the assessment of changes that develop over repeated treatment. Also known as reverse-tolerance, behaviors undergoing sensitization are incrementally enhanced over repeated exposures to a particular drug of abuse, especially psychostimulants, and cross-sensitization is known to occur between some, but not all, of these drugs. One of the first assessments of cocaine-induced locomotor sensitization, in particular, in rodents was published in 1976¹³. A number of labs have shown that sensitized locomotion is detectable long after drug cessation, depending on the original length, location and dose of exposure^14-17, and the current protocol has been used to detect sensitization as long as 10 months following seven days (30 mg/kg) of cocaine treatment in mice¹⁸. The test can be performed using either photobeam or video-tracking technologies, in apparatuses of differing sizes and shapes, making it simple for many labs to perform. The robust nature, simplicity and persistence of locomotor sensitization makes its assessment an ideal part of examining basic mechanisms of long-lasting changes in drug-induced behavior.

As is expanded upon in the discussion, an important consideration when performing the locomotor sensitization assay is whether drug is given in the home- or test-cage environment. To take advantage of the robust sensitization that occurs when drug administration occurs outside of the home cage, this protocol employs this method. However, it has been observed that when animals are not adequately habituated to a new environment before drug exposure, a novelty-induced ceiling effect occurs on Day 1, which can partially or fully mask the progressive nature of sensitization. It is likely that this represents synergistic locomotor-activating effects of the drug together with novelty, and while the mechanisms underlying such effects may be interesting, the method described is designed to reduce the role of novelty and allow the effects of the drug to be measured more independently. While it is expected this method will be useful in the assessment of other locomotor-sensitizing drugs, it has primarily evaluated its effectiveness with cocaine in C57BL/6 mice.

Protocole

Toutes les procédures expérimentales ont été approuvés par la Commission institutionnelle soin et l'utilisation des animaux Hôpital McLean. NOTE: Le protocole suivant décrit une approche unique pour le RPC et locomotrice sensibilisation, de nombreux détails qui diffèrent des autres protocoles efficaces (par exemple tests, éclairage vs sombre phase, vs. administration intermittente consécutive, etc.). Novices peuvent souhaiter commencer par ces protocoles, ou tout simplement les utiliser comme guides, l'adaptation des altérations de la littérature sur la base de la question expérimentale (s) à portée de main. méthodes de mesure automatisés sont décrits; Cependant, il est possible d'utiliser des moyens non automatisés pour chaque test (ie, l'enregistrement vidéo, la main-scoring).

1. préférence de place conditionnée

1. Équipement et pièce d'installation:
   1. Poignée souris expérimentales pour 1-3 minutes chaque jour, pendant au moins 3-5 jours avant le test.
      NOTE: souris Jamais manche peuvent trouver retrait du stre de chambressful, qui peut interférer avec ou de modifier conditionné.
   2. Obtenir quatre ou plusieurs appareils du RPC à trois chambres, de préférence équipés de faisceaux lumineux pour la collecte automatique de données ^18. Veiller à ce que chaque chambre dispose de deux chambres, malvoyants et tactilement-distinctes grandes connectez, une chambre plus petite neutre par des portes qui peut être soulevé / abaissé pour contrôler l'accès. Couvercles sur chaque chambre devraient ouvrir pour l'insertion / retrait de la souris et être monté avec de petites lumières réglables individuellement (à gradation) (un par chambre).
      NOTE: RPC conceptions de chambre varient et peuvent être achetés dans le commerce ou construits par les chercheurs. Pour la conception «équilibrée», un système recommandée est d'une grande chambre avec des murs blancs et un sol en grille métallique et l'autre avec des murs noirs et les planchers de bar. La chambre du milieu devrait avoir murs gris et solide plancher gris Plexiglas. À des fins d'explication, ces chambres seront désignés comme «blanc», «noir» et «milieu».Couvercles doivent être clairs Plexiglas. configurations de compartiment de remplacement (une ou deux chambre) sont également possibles et discuté ailleurs (voir Discussion).
   3. Configuration de la salle car il sera pendant le test: éteindre ou mettre en plafonniers au réglage le plus sombre et fermer la porte. Utilisez un mètre lumière à l'intérieur de chaque chambre et définir les feux de couvercle de sorte que les chambres moyennes sont légèrement plus lumineux (15-20 lux) de chambres noires et blanches (6-10 lux) afin de décourager les souris de passer du temps là-bas.
      NOTE: Si le temps moyen passé dans le milieu est autant ou plus que dans les chambres noires ou blanches, peut encore augmenter le contraste d'éclairage décrit à l'étape 1.1.3. Vous pouvez également utiliser un sol moins attrayant pour le milieu. (Par exemple, ~ 220 trous de 0,5 cm de diamètre, espacés uniformément dans 6 x 3,5 x ¼ "en plexiglas), mais éviter de faire cette chambre aversif. Pilote des modifications afin d'assurer que les diminutions dans le temps du milieu ne sont pas dus à une diminution des explorations totales (croisements) .
   4. Programme collecte automatisée de données ( «procédure», figure 1A) ou de collecter manuellement les données en fonction des paramètres suivants. essais configuré pour démarrer sur la première pause du faisceau dans l'une des chambres de conditionnement. Définir sessions "test" d'être 20 minutes de longueur et de suivre le temps passé et faisceau ruptures dans chaque chambre. Définir sessions "conditionné" à 30 min de temps et (éventuellement) pour mesurer les pauses de faisceau dans chaque chambre. Régler toutes les lumières de la chambre pour éclairer pendant le procès.
   5. Préparer plein volume de la solution de cocaïne nécessaire pour l'expérience à portée de main. Dissoudre le chlorhydrate de cocaïne dans 0,9% de NaCl (saline), en se basant à la concentration finale dans un volume d'injection de 0,1 ml / 10 g de poids corporel (par exemple, pour une dose de 5 mg / kg, la concentration de la solution est de 0,5 mg / ml). mélange Vortex pendant 30-45 secondes, filtre stérile (0,2 um filtres seringues) et stocker à température ambiante.
2. Essai:
   NOTE: Le calendrier général pour le RPC est PRE-TEST, le conditionnement, etpuis post-test. Le pré-test peut être séparé de conditionnement par 1-3 jours; Cependant, le conditionnement et le jour post-test devraient avoir lieu sur plusieurs jours consécutifs (figure 2A). Cette temporisation doit être conservé les mêmes pour toutes les cohortes de la même expérience.
   1. Test pendant la phase de lumière de l'animal en utilisant le même appareil pour chaque animal au fil des jours.
   2. Chaque jour d'essai (à savoir, les tests et les jours de conditionnement), déplacer la souris dans l'antichambre du comportement et de leur permettre de s'asseoir tranquillement dans leurs cages à domicile pendant 1-1,5 heures avant le procès. Choisissez un endroit où les souris peuvent être déplacés rapidement de leur cage de l'appareil, avec une perturbation minimale, lorsque le début du procès. Mettre tous les appareils de telle sorte que les bruits associés à l'essai (par exemple, les ventilateurs d'équipement) sont présents.
   3. Nettoyer soigneusement chaque appareil (murs intérieurs, les planchers et les plateaux) avec léger, l'alcool, la désinfection glycol-éther-ou à base d'ammoniac lingettes avant et après chaque souris (utilisez le same type de produit de nettoyage pendant toute l'expérience). Ne négligez pas le dessous de plancher.
   4. Vérifier que les lumières de la pièce sont réglés de façon appropriée (à pied ou en gris) au début de chaque journée.
   5. Procéder à la suivante selon qu'il est un "test" ou "conditionné" jour:
      1. Days Trial 1 et 6 (à savoir le pré et post-tests), placent les portes inter-chambre dans la position ouverte (figure 2B).
      2. Chargez le programme informatique "test" et entrez ID animaux (figure 1A), puis émettre commande de démarrage (figure 1B), le cas échéant.
      3. Doucement inférieure chaque souris dans la chambre du milieu de son appareil assigné, face à la paroi arrière, et fermer doucement le couvercle. Une fois que toutes les chambres sont chargés, quitter la salle d'examen et de minimiser le bruit.
      4. Laisser la souris à l'intérieur de chaque appareil jusqu'à ce que des essais pour toutes les souris ont fermé / terminée (figure 1C). données de l'essai à l'exportation.
   6. Juste avant ou après le pré-test, peser les animaux. Utiliser ces poids pour les calculs de dose pendant le conditionnement.
   7. Afin de se préparer pour les essais de conditionnement, le calcul pré-test "de préférence" de chaque souris pour les chambres en noir et blanc selon le temps passé dans chacun de ces de l'autre (par exemple, "noir, moins blanc" et "blanc moins noir" soustraction; voir Figure 3, colonnes 9 et 10).
   8. Depuis souris avec les préférences initiales fortes font équilibre difficile, fixer une limite acceptable pour les scores de préférence (par exemple, <33% du temps d'essai total) et exclure les souris qui dépasse à partir de calculs. Utilisez une limite libérale (<66% du temps d'essai totale) pour maximiser l'inclusion lorsque attrition est probable après le test est terminé (par exemple, en raison de manipulations chirurgicales hors-cible).
      NOTE: Les souris dépassant la limite peuvent encore être testées, avec une tentative de garder leurs préférences pré-test équilibrée. Par la suite, tsouris es peuvent être exclus de l'analyse, si nécessaire, pour équilibrer les scores pré-test. Si biais pré-essai extrêmes (ie,> 800 s) affectent de manière disproportionnée un groupe, envisager de modifier les environnements de conditionnement et / ou en utilisant d'autres essais.
   9. Choisissez la chambre noire ou blanche comme la chambre drogue appariement pour chaque souris, résumant attendant les pré-test préférence scores correspondant au sein de chaque groupe avec les priorités suivantes:
      NOTE: Prenez soin d'équilibrer les scores entre les groupes au sein de chaque cohorte ainsi que dans toutes les cohortes précédentes.
      1. Faire les sommes pour tous les groupes comme équivalent que possible.
      2. Faire des sommes aussi proches que possible de zéro (à savoir, choisir le côté pratique pour certaines souris et le côté non préféré pour les autres). Si une somme proche de zéro est impossible pour un groupe donné, réajuster tous les autres pour se rapprocher le meilleur score obtenu pour le groupe de limitation, favorisant groupe légèrement négative résume pluspositif.
      3. Autant que possible, garder les affectations de noir contre blanc et plus pratique par rapport chambres non-privilégiées pour les appariements de drogue, même au sein de chaque groupe.
      4. Comme il est pas toujours possible d'atteindre les objectifs ci-dessus, de corriger les écarts en faisant opposées considérations d'équilibre dans les générations suivantes; Cependant, essayez d'éviter la production de cohortes avec très différentes préférences moyennes pré-test.
   10. Sur le conditionnement Jours 2-5, placer les portes inter-chambre dans la position fermée (figure 2C).
   11. Préparer seringues individuelles avec de la cocaïne (Jours 2 & 4) ou une solution saline (jours 3 et 5) solution, comme décrit dans l'étape 1.1.5 et sur la base du poids corporel mesurées au pré-test.
       NOTE: Dose doit être choisi en fonction des attentes expérimentales, les considérations mentionnées dans l'introduction, et les effets potentiels de plancher et de plafond. Il est souvent préférable de mener des expériences indépendantes en utilisant au moins deux doses différentes.
   12. Load "cID animales onditioning du programme "ordinateur et entrez (figure 1A), puis émettent commande de démarrage (figure 1B), le cas échéant.
   13. Scruff et injecter chaque souris (ip), les abaisser immédiatement dans la chambre noire ou blanche appropriée de leur appareil attribué face à la paroi arrière, puis fermez doucement le couvercle. Une fois que toutes les chambres sont chargés, quitter la salle d'examen et de minimiser le bruit.
   14. Retirer les souris à partir de leur chambre au plus près exactement 30 minutes que possible (à savoir, la première souris sont retirées de leurs chambres tandis que les autres souris sont encore conditionné). Retirer les animaux le plus discrètement possible, sans introduire de bruit.
3. Analyses statistiques:
   1. Choisissez une méthode d'analyse. Soit le temps soustraction passé du côté de la solution saline apparié au cours de la post-test de temps passé sur le côté de la cocaïne jumelé au cours du post-test (cocaïne - une solution saline, sec) ou utiliser le temps passé dans la chambre de la drogue jumelé post-testmoins le temps pré-test consacré à la chambre de drogue jumelé.
      NOTE: si vous utilisez la première méthode, aussi des graphiques linéaires de parcelle de temps moyen passé dans le milieu, chambres solution saline et la drogue jumelé au cours des pré- et post-tests pour chaque groupe. Par rapport à la pré-test, post-test devrait montrer l'augmentation du temps dans le côté de la drogue appariées et réduit le temps passé dans le côté saline appariées (voir Figure 6, en bas, et de discussion pour l'explication).
   2. Selon la nature et le nombre de groupes comparés, utiliser un test t, à une ou deux voies ANOVA, selon le cas, peut-être avec une analyse post-hoc, pour analyser l'un des scores de soustraction présenté ci-dessus.
      NOTE: Cocaine scores de préférence ont tendance à être variable, et, en outre, peut être négatif (c.-à indiquer aversion pour le côté de la drogue appariées). Les souris qui montrent l'aversion doivent pas être supprimés (sauf si elles sont aberrantes statistiques), puisque ce résultat est normal et probablement important de déterminer des différences entre groups. Attendez-vous à besoin la taille des échantillons de 12 à 30 animaux par groupe, en fonction de la taille de l'effet du traitement.

2. Sensibilisation locomoteur

1. Équipement et pièce d'installation
   1. Obtenir un 4 x 8 (X x Y) Photocellule tableau (de dimensions extérieures 11.5 "x 20"). Construire une chambre ouverte sur le dessus en plexiglas noir (dimensions intérieures 22 1/6 "x 13 ¾" x 9 3/8 ") pour abriter le tableau (figure 4A).
   2. Préparer la salle d'examen de sorte qu'une lumière rouge (plafond- ou mural) peut être utilisé au cours des essais.
   3. Préparer les sessions de programme distinct pour habituation et d'injection épreuves quotidiennes.
      1. Essais d'habituation réglée pour être entre 30-60 min et d'injection essais se situer entre 60-120 min (figure 5B). La durée recommandée pour chaque est de 60 min. Garder une longueur d'essai cohérente sur plusieurs cohortes au sein de la même expérience.
      2. essais configuré pour démarrer recording sur la première pause du faisceau qui se produit après le signal de départ a été lancé (figure 5B). Pour l'essai d'injection, régler le signal de départ, de sorte que les boîtes peuvent être démarrés individuellement (pas à l'unisson), si possible.
      3. Les pauses de faisceau à être enregistrées dans définies par l'utilisateur "bacs", de préférence de 5 minutes chacun (figure 5B).
   4. Préparer plein volume de la solution de cocaïne nécessaire pour l'expérience à portée de main. Dissoudre le chlorhydrate de cocaïne dans 0,9% de NaCl (saline), en se basant à la concentration finale dans un volume d'injection de 0,1 ml / 10 g de poids corporel (par exemple, pour une dose de 5 mg / kg, la concentration de la solution est de 0,5 mg / ml). mélange Vortex pendant 30-45 secondes, filtre stérile (0,2 um filtres seringues) et stocker à température ambiante.
2. Essai
   NOTE: La phase initiale de test dure 10-11 jours consécutifs. Souris reçoivent deux épreuves quotidiennes: l'habituation (sans injection) et l'injection. Administrer une solution saline pour les trois premiers à fnos jours (voir la discussion de l'importance d'une solution saline habituation), et de la cocaïne pour les sept prochaines utilisant la même dose (par ex., 15 mg / kg / jour).
   1. Chaque jour, acclimater souris dans leurs cages à domicile dans l'antichambre de comportement pendant 30 min à 1 h.
   2. Préparer propres cages de logement standards souris taille claires acryliques avec une très fine couche de litière fraîche (par exemple, des copeaux de pin), afin de ne pas obscures faisceaux lumineux, le cas échéant (figure 4C et D).
   3. La place des cages contre l'axe Y de la matrice de Photocellule près d'une extrémité, de sorte que les cinq faisceaux sont espacés uniformément le long de sa longueur. Poutres axe X ne sont pas utilisés dans ce test (figure 4C et D).
   4. Prenez souris de leur cage, dans un ordre aléatoire, nuque et les peser. Retirer chaque souris du bateau peser par la base de leur queue (avec support) et le lieu directement dans leur cage locomoteur affecté. Couvrir chaque cage avec un couvercle de filtre haut standard.
   5. Préparer seringues individuelles wune solution saline ou une solution i-ième de la cocaïne, de la manière décrite dans l'étape 2.1.7, sur la base des poids corporels de la journée en cours. Commencez avec une dose de 15 ou 20 mg / kg, et d'envisager une deuxième expérience en utilisant une dose supérieure ou inférieure (voir la discussion des facteurs pertinents).
   6. Une fois les essais d'accoutumance sont terminées pour toutes les cages, charger le programme d'injection.
   7. Un à la fois, retirez les souris de leur cage de test, nuque et de donner leur injection (IP). Avant de retourner la souris dans sa cage de test, de lancer rapidement le signal de départ de cette cage (Figure 5C, en bas).
   8. Après tous les essais d'injection ont terminé, retournez la souris dans leurs cages à domicile et leur chambre de logement.
   9. Si vous le souhaitez, laisser la souris de se soumettre à une série de délais d'attente et les défis de médicaments, tels que les suivants: même dose que, demi-dose d'origine, double-dose, solution saline, permettant sept jours avant le défi même dose et trois à sept jours avant chaque défi supplémentaire. Quel que soit le choix de défis, entretenir cetn périodes de sevrage similaires entre les cohortes dans une expérience.
      NOTE: Si la dose initiale est élevée (par exemple, 30 mg / kg ou plus), la double-dose doit être ignoré ou remplacé par une dose plus faible. Le défi saline révèle toute activation locomotrice conditionnée par l'environnement de cocaïne jumelé seul, et dans le processus, la quantité de locomotion sensibilisée qui est de la cocaïne-dépendante (voir la discussion).
3. Analyses statistiques
   1. Choisissez la partie (s) de chaque essai qui sera utilisé pour l'analyse. La plupart locomotion induite par la cocaïne chez les rongeurs se produit au sein de la ~ 15-30 min après la première injection de drogue. Selon les variables concernées, envisage d'analyser locomotion cumulative pour de multiples fenêtres de temps (par exemple, le premier 15, 30, 60 et / ou 120 min) ou de se concentrer sur des segments indépendants de l'essai.
   2. En utilisant le temps encadrement n'a été choisi, la somme des pauses de faisceau pour chaque animal par jour pour habituation et d'injection essais séparément, puis unemo yen des sommes pour chaque groupe. signifie intrigue et les erreurs types de la moyenne (SEM) dans une ligne graphique sur tous les jours. Comme traitements peuvent modifier la façon dont les souris réagissent à la drogue au début et / ou fin de chaque essai quotidienne, aussi tracer la moyenne des pauses de faisceau de groupe en 5 min bin au cours de chaque essai quotidienne.
      NOTE: Tracé des moyennes d'activité quotidienne pour habituation et d'injection des essais (par exemple, 15 premières minutes) fait apparaître artificiellement que la locomotion est amortie par injection d'une solution saline, mais rappelez-vous que l'activité a (probablement) baissé à ce niveau à la fin de l'accoutumance chaque jour .
   3. Analyser salines et traitement de la toxicomanie jours consécutifs séparément à l'aide des mesures répétées (RM) ANOVAs ayant le facteur de jour / heure intra-sujets et y compris les facteurs inter-sujets dans la conception, le cas échéant. Utilisez un test t ou One-Way ANOVA à étudier les différences de groupe le jour 1 de la cocaïne (exposition aiguë), et une analyse de la variance multivariée pour les défis. Le cas échéant, suivez significance avec des tests post-hoc ou univariée analyses de variance.

Résultats

Les résultats représentatifs de l'essai du RPC sont présentés dans la figure 6 en utilisant des souris C57BL / 6N de type sauvage à environ neuf semaines d'âge. La conception de l'étude était un factoriel mixte 2 x 3, avec une variable de test (avant et après) intra-sujets et inter-sujets variable de traitement (solution saline et de la cocaïne 5 et 10 mg / kg). Un RM ANOVA montrait une interaction significative entre le test et le traitement (F _2,20 = 3,68; p <0,05),...

Discussion

Ce protocole démontre les méthodes de préférence de place conditionnée et locomotrice sensibilisation, dont chacune peut être utilisée par le laboratoire moyen d'évaluer les aspects de la plasticité comportementale induite par le médicament. Comme avec la plupart des tests de comportement, il y a des considérations dignes supplémentaires au-delà du protocole de base. Tout d'abord, chacune de ces techniques peut être conçu comme ayant deux phases, l'induction et l'expression. "Inductio...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cocaine Hydrochloride USP	Mallinckrodt Pharmaceuticals	0406-1520	Purchase and use (Schedule II controlled substance) for research purposes requires compliance and licensure according to state and federal law.
Conditioned Place Preference,  Three Compartment Apparatus with Manual Doors and Lights for Mouse	Med-Associates Inc.	MED-CPP-MS & MED-CPP-3013	Our laboratory has used these boxes; however, many alternative boxes are available & acceptable.
PAS-Home Cage Activity Monitoring Photobeam Arrays	San Diego Instruments	2325-0223 & 7500-0221	Our lab houses these arrays inside of custom built chambers, as described in the text.  There are alternatives available.
Disposable Sani-Cloth disenfecting wipes	PDI	13872