Avaliação da sensibilização comportamental induzida por cocaína e preferência por lugar condicionado em Ratos

Resumo

This protocol is intended to enable researchers to conduct experiments designed to test these aspects of addiction using the conditioned place preference and locomotor behavioral sensitization assays.

Resumo

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to drugs of abuse make lasting alterations in the brain function of vulnerable individuals, and these persistent alterations likely serve to maintain the maladaptive drug seeking and taking behaviors characteristic of addiction/dependence². In rodents, reward experience and contextual associations are frequently measured using the conditioned place preference assay, or CPP, wherein preference for a previously drug-paired context is measured. Behavioral sensitization, on the other hand, is an increase in a drug-induced behavior that develops progressively over repeated exposures. Since sensitized behaviors can often be measured after several months of drug abstinence, depending on the dose and length of initial exposure, they are considered observable correlates of lasting drug-induced plasticity. Researchers have found these assays useful in determining the neurobiological substrates mediating aspects of addiction as well as assessing the potential of different interventions in disrupting these behaviors. This manuscript describes basic, effective protocols for mouse CPP and locomotor behavioral sensitization to cocaine.

Introdução

Research aimed at understanding drug addiction using animal models must take a variety of approaches to address each of the assorted components that obstruct treatment success, including reward/reinforcement/motivation and withdrawal and relapse, as well as the general persistence that further complicates these issues in addiction. Since rewarding experiences associated with taking a drug of abuse are thought to motivate subsequent use, studies focusing on drug-context associations may be particularly useful for understanding brain mechanisms that contribute to drug taking and seeking. One such assay, conditioned place preference (CPP) is a high-throughput method for comparing group differences in reward sensitivity. The traditional interpretation of the task involves classical, or Pavlovian, conditioning, where a conditioned stimulus (CS) is paired with an unconditioned stimulus (UCS), and after multiple pairings, the CS elicits the same behavior as the UCS (however, see^39,40). Theoretically, animals learn to associate an interoceptive state (reward or aversion) with contextual cues. The relative aversive or appetitive intensity of the interoceptive state is then assessed by then determining the animal's preference for the contextual cues. The use of place conditioning to measure drug-reward associations dates back to at least 1957, to a study using morphine on rats in a Y-maze^3,4. Over the past several decades, variations on this method have been widely used to study place preference and aversion in rodents to various stimuli, and it remains particularly useful in the study of associations induced by drugs of abuse. In drug-addiction research, the assay has been used to assess the rewarding properties of a number of drugs and the contribution of different brain systems and proteins to drug reward (for reviews, see^5-7,44). While there are superior methods of assessing factors that contribute to drug addiction, namely drug self-administration, CPP is a simple and much more accessible approach to measuring reward function.

Most current protocols for conditioned place preference and aversion (CPA) use an apparatus that allows rodents to have access to two distinct chambers, either via a doorway or smaller connecting chamber. Distinctions between the two chambers are often based, at a minimum, on visual and tactile cues, including wall color and floor texture, but sometimes include other elements, such as olfactory cues. "Biased" designs typically attempt to reverse a pre-existing, innate preference for one chamber over the other, such as the one that rodents generally show for a black chamber over white. "Unbiased" designs aim to create a preference to one of two chambers that were initially equally appealing by randomly counterbalancing assignment to either chamber within a group. A "balanced" design is used when animals show small preferences, but do not, as a group, favor the same chamber. Goals of this latter design are to produce 1) pre-test preference scores for the (eventual) cocaine-paired chamber that are not significantly different between experimental groups and 2) negligible preference for the cocaine-paired chamber at pre-test, either positive or negative⁸. The balanced design is ideal for use with the described chambers, which utilize contradicting biases for wall color (black over white) and flooring (wire over bar), resulting in a roughly equal distribution of small preferences for both the black and white sides in different animals. Balancing calculations are described in further detail below.

During conditioning, animals are exposed to a drug and quickly placed into one of these two environments for a limited time period. Exposure is typically via intraperitoneal (i.p.) or sometimes subcutaneous (s.c.) injection, although paradigms for intravenous (i.v.) self-administration⁹, and intracranial infusions³⁸ in a place preference apparatus have also been developed. These pairings are complemented by non-drug (vehicle) pairings of the same length conducted in the opposite chamber, which can take place on the same day as drug pairings or on separate days. In general, when allowed to explore the apparatus after conditioning, animals will spend more time where they received a rewarding drug (i.e., one that humans and animals will voluntarily self-administer), while they will avoid a place where they were given a drug that induced illness (e.g., lithium chloride). Several studies have been dedicated to optimizing the conditions for place preference to different drugs of abuse (for review, see⁷). Cocaine doses (i.p.) for mice generally range from 1 to 20 mg/kg, with doses less than 5 mg/kg often used to parse high sensitivity in one group. Two or more drug pairings are typically required for adult mice¹⁰, and the length of these pairings is an important consideration. Very low doses of cocaine require an immediate and brief conditioning, likely because this method captures the most rewarding period of the exposure. Delayed or very long conditioning periods can result in no preference, or may even induce aversion^11,12. Here is presented a basic method for obtaining conditioned place preference to cocaine in adult mice.

While the CPP assay is an ideal method for assessing reward-related learning and memory of drug-context associations, behavioral sensitization is arguably easier to perform and allows the assessment of changes that develop over repeated treatment. Also known as reverse-tolerance, behaviors undergoing sensitization are incrementally enhanced over repeated exposures to a particular drug of abuse, especially psychostimulants, and cross-sensitization is known to occur between some, but not all, of these drugs. One of the first assessments of cocaine-induced locomotor sensitization, in particular, in rodents was published in 1976¹³. A number of labs have shown that sensitized locomotion is detectable long after drug cessation, depending on the original length, location and dose of exposure^14-17, and the current protocol has been used to detect sensitization as long as 10 months following seven days (30 mg/kg) of cocaine treatment in mice¹⁸. The test can be performed using either photobeam or video-tracking technologies, in apparatuses of differing sizes and shapes, making it simple for many labs to perform. The robust nature, simplicity and persistence of locomotor sensitization makes its assessment an ideal part of examining basic mechanisms of long-lasting changes in drug-induced behavior.

As is expanded upon in the discussion, an important consideration when performing the locomotor sensitization assay is whether drug is given in the home- or test-cage environment. To take advantage of the robust sensitization that occurs when drug administration occurs outside of the home cage, this protocol employs this method. However, it has been observed that when animals are not adequately habituated to a new environment before drug exposure, a novelty-induced ceiling effect occurs on Day 1, which can partially or fully mask the progressive nature of sensitization. It is likely that this represents synergistic locomotor-activating effects of the drug together with novelty, and while the mechanisms underlying such effects may be interesting, the method described is designed to reduce the role of novelty and allow the effects of the drug to be measured more independently. While it is expected this method will be useful in the assessment of other locomotor-sensitizing drugs, it has primarily evaluated its effectiveness with cocaine in C57BL/6 mice.

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Animal Care Institucional e Use o McLean Hospital. NOTA: O protocolo a seguir descreve uma única abordagem para a CPP e sensibilização locomotora, muitos detalhes dos quais diferem de outros protocolos de sucesso (testes de fase escura por exemplo, luz- vs., consecutiva vs. dosagem intermitente, etc.). Noviços podem querer começar com estes protocolos, ou simplesmente usá-los como guias, adaptando alterações a partir da literatura com base na pergunta experimental (s) em questão. métodos automáticos de medição são descritos; No entanto, é possível utilizar meios não automatizados para cada ensaio (isto é, a gravação vídeo, mão-de pontuação).

1. preferência por lugar condicionado

1. Equipamentos e Room Set-Up:
   1. Pega ratinhos experimental para 1-3 min cada dia, durante pelo menos 3-5 dias antes do teste.
      Nota: Nunca-tratada camundongos pode achar remoção da câmara de stressful, o que pode interferir ou alterar condicionado.
   2. Obter quatro ou mais aparelhos CPP três câmaras, de preferência, equipados com photobeams para coleta automatizada de dados ^18. Certifique-se que cada câmara tem duas câmaras maiores, visually- e tactilely-distintas na conexão com uma câmara menor, neutro através de portas que podem ser levantado / descido para controlar o acesso. Tampas em cada câmara deve abrir para a inserção / remoção de ratos e ser montado com luzes pequenas, individualmente controláveis ​​(reguláveis) (um por câmara).
      Nota: Os projetos de câmara CPP variam e podem ser adquiridos comercialmente ou construídos pelos pesquisadores. Para o projeto "equilibrado", um esquema recomendada é de uma maior câmara com paredes brancas e piso de grade de arame e outro com paredes pretas e piso bar. A câmara do meio deve ter paredes cinza e cinza piso Plexiglass sólida. Para fins de esclarecimento, estas câmaras vai ser referido como "branco", "preto" e "meio".As tampas devem ser claras Plexiglass. configurações do compartimento alternados (uma ou duas câmaras) também são possíveis e discutido em outro lugar (ver discussão).
   3. Configuração da sala como será durante o teste: desligar ou definir luzes do teto para a configuração mais obtuso e feche a porta. Use um medidor de luz dentro de cada câmara e definir as luzes da tampa de modo que as câmaras de coração são ligeiramente mais brilhante (15-20 lux) do que as câmaras a preto e branco (6-10 lux) a fim de desencorajar os ratos de passar o tempo lá.
      NOTA: Se o tempo médio gasto no meio é tanto ou mais do que nas câmaras pretas ou brancas, aumentar ainda mais o contraste de iluminação descrito no Passo 1.1.3. Como alternativa, use piso menos atraente para o meio. (Por exemplo, ~ 220 furos de 0,5 cm de diâmetro, uniformemente espaçados em 6 x 3,5 x ¼ "Plexiglas), mas evitar fazer essa câmara aversivo. Pilot quaisquer alterações para garantir que diminui com o tempo médio não são devido a reduções na exploração totais (cruzamentos) .
   4. Programa coleta automática de dados ( "procedimento" Figura 1A) ou coletar dados manualmente de acordo com os seguintes parâmetros. Definir ensaios para começar após o primeiro intervalo feixe em qualquer câmara de condicionamento. Definir as sessões de "teste" para ser 20 min de comprimento e para controlar o tempo gasto e feixe breaks em cada câmara. Definir as sessões de "condicionamento" para ser 30 min longa e (opcionalmente) para medir intervalos de viga em cada câmara. Defina todas as luzes da câmara para iluminar durante o julgamento.
   5. Prepare volume completo de solução de cocaína necessária para o experimento em questão. Dissolver o cloridrato de cocaína em 0,9% de NaCl (salina), baseando-se a concentração final num volume de injecção de 0,1 ml / 10 g de peso corporal (por exemplo, para uma dose de 5 mg / kg, a concentração da solução é de 0,5 mg / ml). mistura Vortex por 30-45 seg, filtro estéril (0,2 mm filtros de seringa) e armazenar a RT.
2. Teste:
   NOTA: O cronograma geral para a CPP é pré-teste, condicionamento eem seguida, pós-teste. O pré-teste pode ser separado a partir condicionado por 1-3 dias; no entanto, condicionado e no dia pós-teste deverá ocorrer em dias consecutivos (Figura 2A). Este tempo deve ser mantida a mesma para todos os grupos na mesma experiência.
   1. Teste durante a fase de luz dos animais utilizando o mesmo aparelho para cada animal ao longo dos dias.
   2. Cada dia de teste (ou seja, testes e dias de condicionamento), mova ratos à antecâmara comportamental e permitir-lhes para se sentar sem ser perturbado em suas gaiolas para 1-1,5 horas antes do julgamento. Escolha um local onde os ratos podem ser movidos rapidamente de sua gaiola para o aparelho, com o mínimo de interrupção, quando o julgamento começa. Ligue todos os equipamentos de modo que quaisquer ruídos associados com o teste (por exemplo, ventiladores equipamentos) estão presentes.
   3. Limpe cuidadosamente cada aparelho (paredes internas, pisos e bandejas) com leve, álcool, glicol-ETHER- ou à base de amônia desinfecção limpa antes e depois de cada rato (use o same tipo de produto de limpeza durante todo o experimento). Não negligencie inferiores pavimentação.
   4. Verifique se as luzes da sala são definidas de forma adequada (desligado ou desactivado) no início de cada dia.
   5. Prosseguir com o seguinte de acordo com se é um "teste" ou o dia de "condicionamento":
      1. Em julgamento Dias 1 e 6 (ou seja, o pré e pós-testes), coloque as portas inter-câmara na posição aberta (Figura 2B).
      2. Carregar o programa de computador "teste" e digite IDs de origem animal (Figura 1A), em seguida, emitir comando de arranque (Figura 1B), se aplicável.
      3. Suavemente inferior cada rato na câmara meio do seu aparato atribuído, de frente para a parede de trás, e suavemente feche a tampa. Uma vez que todas as câmaras são carregados, deixar a sala de testes e minimizar o ruído.
      4. Deixar ratos dentro de cada aparelho até que ensaios para todos os ratos têm fechado / terminado (Figura 1C). dados de ensaios de exportação.
   6. Pouco antes ou após o pré-teste, pesar os animais. Use estes pesos para cálculos de dose durante o condicionamento.
   7. A fim de se preparar para ensaios condicionado, calcule pré-teste "preferência" de cada rato para as câmaras de preto e branco, subtraindo o tempo gasto em cada uma delas a partir do outro (isto é, "black menos branco" e "menos branco preto"; veja A Figura 3, colunas 9 e 10).
   8. Desde camundongos com fortes preferências iniciais tornar equilíbrio difícil, estabelecer um limite aceitável para os escores de preferência (por exemplo, <33% do tempo de ensaio total) e não incluem ratos que ultrapassá-lo a partir de cálculos. Use um limite liberal (<66% do tempo de ensaio total) para maximizar a inclusão, quando a redução é provável após a conclusão do teste (por exemplo, devido a fora do alvo manipulações cirúrgicas).
      NOTA: Os ratos que excedam o limite ainda pode ser testado, com uma tentativa de manter as suas preferências pré-teste equilibrada. Mais tarde, tratinhos stas podem ser excluídos da análise, se necessário, para equilibrar a pontuação do pré-teste. Se extremas preconceitos pré-teste (isto é,> 800 seg) afetam desproporcionalmente um grupo, considerar alterar os ambientes de condicionamento e / ou utilizar outros ensaios.
   9. Escolha a câmara de preto ou branco como a câmara de fármaco-emparelhamento para cada rato, enquanto isso soma dos correspondentes pontuações de preferência pré-teste dentro de cada grupo com as seguintes prioridades em mente:
      NOTA: Tenha cuidado para equilibrar contas entre grupos dentro de cada coorte, bem como através de qualquer coortes anteriores.
      1. Faça as somas de todos os grupos como equivalentes possível.
      2. Adicione as somas mais próximo de zero quanto possível (isto é, escolher o lado preferido para alguns ratinhos e o lado não-preferida para os outros). Se um quase zero soma é impossível para qualquer grupo, re-ajustar todos os outros para igualar a melhor pontuação obtida para o grupo limitante, favorecendo grupo ligeiramente negativo resume maispositivo.
      3. Tanto quanto possível, manter as atribuições de negro contra branco e preferenciais em relação câmaras não preferidos para emparelhamentos de drogas, mesmo dentro de cada grupo.
      4. Como nem sempre é possível cumprir os objetivos acima, corrigir eventuais desvios, fazendo opostas considerações de equilíbrio em coortes posteriores; no entanto, tentar evitar a produção de coortes com descontroladamente diferentes preferências médias pré-teste.
   10. No condicionamento Dias 2-5, coloque portas inter-câmara na posição fechada (Figura 2C).
   11. Preparar seringas individuais com cocaína (Dias 2 e 4) ou solução salina (dias 3 e 5) de solução, conforme descrito no passo 1.1.5 e com base nos pesos corporais medidos no pré-teste.
       NOTA: A dose deve ser escolhido com relação às expectativas experimentais, as considerações mencionadas na introdução, e os efeitos potenciais piso e teto. Muitas vezes, é melhor para conduzir experimentos independentes, utilizando pelo menos duas doses diferentes.
   12. Load "conditioning programa "computador e entrar IDs de origem animal (Figura 1A), em seguida, emitir comando de arranque (Figura 1B), se aplicável.
   13. Nuca e injectar cada ratinho (IP), reduzindo-os imediatamente para a câmara de preto ou branco apropriada de atribuído o seu aparelho de frente para a parede traseira, então suavemente fechar a tampa. Uma vez que todas as câmaras são carregados, deixar a sala de testes e minimizar o ruído.
   14. Remover os ratinhos a partir da sua câmara para o mais próximo exactamente 30 min quanto possível (isto é, o primeiro ratos são removidos das suas câmaras, enquanto outros ainda são ratinhos condicionado). Retirar os animais o mais silenciosamente possível, sem introduzir ruído.
3. Análise estatística:
   1. Escolha um método de análise. De qualquer tempo subtrair gasto no lado emparelhado com soro fisiológico durante o pós-teste do tempo gasto no lado emparelhado ao uso de cocaína durante o pós-teste (cocaína - salina, sec) ou usar o tempo gasto na câmara emparelhado com a droga pós-testemenos o tempo de pré-teste gasto na câmara emparelhado com a droga.
      NOTA: se estiver usando o primeiro método, também os gráficos de linhas lote de tempo médio gasto no meio, câmaras saline- e emparelhado com a droga durante o pré e pós-testes para cada grupo. Em comparação com o pré-teste, pós-teste deve mostrar o aumento do tempo no lado emparelhado com a droga e diminuição do tempo gasto no lado emparelhado com solução salina (ver Figura 6, inferior e de discussão para explicação).
   2. Dependendo da natureza e o número de grupos a ser comparados, usar um t-teste, com uma ou ANOVA de duas vias, como apropriado, possivelmente com a análise post-hoc, para analisar qualquer das pontuações subtração acima apresentada.
      NOTA: pontuação de preferência de cocaína tendem a ser variável, e, além disso, pode ser negativo (ou seja, indicar aversão ao lado do emparelhado com a droga). Os ratos que mostram aversão não deve ser removido (a menos que estejam de outliers estatísticos), uma vez que este resultado é normal e provavelmente importante para determinar diferenças entre groups. Esperar a necessidade tamanhos de amostra de 12 a 30 animais por grupo, dependendo do tamanho do efeito do tratamento.

2. Locomotor Sensibilização

1. Equipamentos e Room Set-Up
   1. Obter um photobeam matriz 4 x 8 (X x Y) (dimensões externas 11.5 "x 20"). Construir uma câmara de topo aberto feito de plexiglas preto (dimensões internas 22 1/6 "X 13 ¾" x 9 3/8 ") para alojar a matriz (Figura 4A).
   2. Preparar a sala de teste a fim de que uma luz vermelha (ceiling- ou montado na parede) pode ser usado durante o teste.
   3. Prepare sessões de programa separado para ensaios de habituação e injeção diárias.
      1. Jogo ensaios de habituação ser entre 30-60 min e ensaios de injecção para ser entre 60-120 minutos (Figura 5B). O comprimento recomendado para cada um é de 60 min. Mantenha comprimento julgamento consistente em vários grupos dentro da mesma experiência.
      2. Definir ensaios para começar recording após a primeira pausa feixe que ocorre após o sinal de partida foi iniciado (Figura 5B). Para o ensaio da injeção, defina o sinal de partida para que as caixas podem ser iniciado individualmente (não em uníssono), se possível.
      3. Definir quebras de feixe a ser registrado nas definidos pelo usuário "caixas", de preferência, 5 min cada (Figura 5B).
   4. Prepare volume completo de solução de cocaína necessária para o experimento em questão. Dissolver o cloridrato de cocaína em 0,9% de NaCl (salina), baseando-se a concentração final num volume de injecção de 0,1 ml / 10 g de peso corporal (por exemplo, para uma dose de 5 mg / kg, a concentração da solução é de 0,5 mg / ml). mistura Vortex por 30-45 seg, filtro estéril (0,2 mm filtros de seringa) e armazenar a RT.
2. ensaio
   NOTA: A fase inicial de testes é executado por 10-11 dias consecutivos. Ratos receber dois ensaios por dia: habituação (sem injecção) e injeção. Administrar solução salina durante os primeiros três a fnossos dias (ver discussão para importância de habituação solução salina), e cocaína para o próximo sete utilizando a mesma dose (por ex., 15 mg / kg / dia).
   1. Cada dia, aclimatar os ratos nas suas gaiolas para a antecâmara comportamental durante 30 min a 1 h.
   2. Prepare limpas gaiolas de habitação de tamanho padrão do rato acrílico transparente com uma camada extremamente fina de roupas de cama (por exemplo, chips de pinheiros), de modo a não photobeams obscuras, se for o caso (Figura 4C & D).
   3. Coloque gaiolas contra o eixo Y da matriz photobeam perto de uma extremidade, de modo que cinco feixes são espaçados uniformemente ao longo do seu comprimento. Feixes de eixo-X não são usados ​​neste ensaio (Figura 4C e D).
   4. Tome ratos de sua gaiola, no aleatório ordem, nuca e pesar. Remova cada rato do barco pesar pela base de sua cauda (com suporte) e coloque diretamente em sua gaiola locomotor atribuído. Cubra cada gaiola com uma tampa de filtro-top padrão.
   5. Prepare seringas individuais wom solução salina ou solução de cocaína, tal como descrito no passo 2.1.7, com base nos pesos corporais do dia atual. Começar com uma dose de 15 ou 20 mg / kg, e considerar uma segunda experiência utilizando uma dose mais elevada ou mais baixa (ver a discussão para factores relevantes).
   6. Uma vez que os ensaios de habituação ter terminado para todas as gaiolas, carregar o programa de injeção.
   7. Um de cada vez, remover os ratos de sua gaiola teste, nuca e dar sua injeção (ip). Antes de devolver o mouse para sua gaiola teste, rapidamente iniciar o sinal de partida para essa gaiola (Figura 5C, em baixo).
   8. Depois de todos os ensaios de injecção ter terminado, retorne ratos para suas gaiolas e sua sala de habitação.
   9. Se desejado, permitir que os ratos a sofrer uma série de intervalos de segurança e os desafios de drogas, tais como as seguintes: a mesma dose, a metade da dose original, dose dupla, em seguida, solução salina, permitindo que sete dias antes do desafio mesma dose e 3-7 dias antes de cada desafio adicional. Seja qual for a escolha de desafios, manutenn períodos de abstinência semelhantes em coortes dentro de um experimento.
      NOTA: Se a dose inicial é elevada (por exemplo, 30 mg / kg ou acima), o dobro da dose deve ser ignorado ou substituído com uma dose mais baixa. O desafio salina revela qualquer activação locomotora condicionada pelo ambiente emparelhado-cocaína sozinho, e no processo, a quantidade de locomoção sensibilizada que é dependente de cocaína (ver discussão).
3. Análise estatística
   1. Escolha da porção (s) de cada ensaio que vai ser utilizado para a análise. A maioria locomoção induzida por cocaína em roedores ocorre dentro da primeira injeção de drogas ~ 15-30 min depois. Dependendo de variáveis ​​envolvidas, considere a análise locomoção cumulativa para múltiplas janelas de tempo (por exemplo, os primeiros 15, 30, 60 e / ou 120 min) ou se concentrar em segmentos independentes do julgamento.
   2. Usando o tempo de estrutura escolhida, resumir as quebras de feixe para cada animal por dia, durante os ensaios de habituação e de injecção separadamente e depois umverage os montantes para cada grupo. Plot médias e erros padrão da média (SEM) em um gráfico de linha sobre todos os dias. Como tratamentos podem alterar a forma como os ratinhos responderam à droga no início e / ou no final de cada estudo diário, também traçar médios quebras feixe grupo de 5-min escaninho ao longo de cada ensaio diária.
      NOTA: Traçando médias de atividade diária para ensaios de habituação e de injecção (por exemplo, em primeiro lugar 15 min) faz com que seja artificialmente parecer que a locomoção é atenuada pela injeção de solução salina, mas lembre-se que a atividade tem (mais provável) recusou-se a este nível até o final de habituação a cada dia .
   3. Analisar salinas e tratamento da toxicodependência dias consecutivos separadamente usando medidas repetidas (RM) ANOVAs tendo o fator intra-sujeitos do dia / hora e incluindo todos os fatores entre-indivíduos no projeto, conforme o caso. Use um teste t ou One-Way ANOVA para investigar diferenças entre os grupos no dia 1 de cocaína (exposição aguda), e uma análise de variância multivariada para os desafios. Quando for o caso, siga significance com testes post-hoc ou univariada ANOVAs.

Resultados

Os resultados representativos do ensaio de CPP são mostrados na Figura 6 do tipo selvagem utilizando ratinhos C57BL / 6N a cerca de nove semanas de idade. O desenho do estudo foi um factorial mista 2 x 3, com uma variável dentro-sujeitos de teste (pré e pós) e um entre-sujeitos variável de tratamento (solução salina e cocaína 5 e 10 mg / kg). A RM ANOVA mostrou uma interação significativa entre o teste eo tratamento (F _2,20 = 3,68, p <0,05), o que foi interpretad...

Discussão

Este protocolo demonstra métodos para a preferência local condicionado e sensibilização locomotora, cada um dos quais pode ser utilizado pelo laboratório de média para avaliar aspectos da plasticidade comportamental induzida por drogas. Tal como acontece com a maioria dos testes comportamentais, existem considerações dignos adicionais para além do protocolo básico. Em primeiro lugar, cada uma destas técnicas pode ser concebido como tendo duas fases, a indução e a expressão. "Indução" abrange o ...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cocaine Hydrochloride USP	Mallinckrodt Pharmaceuticals	0406-1520	Purchase and use (Schedule II controlled substance) for research purposes requires compliance and licensure according to state and federal law.
Conditioned Place Preference,  Three Compartment Apparatus with Manual Doors and Lights for Mouse	Med-Associates Inc.	MED-CPP-MS & MED-CPP-3013	Our laboratory has used these boxes; however, many alternative boxes are available & acceptable.
PAS-Home Cage Activity Monitoring Photobeam Arrays	San Diego Instruments	2325-0223 & 7500-0221	Our lab houses these arrays inside of custom built chambers, as described in the text.  There are alternatives available.
Disposable Sani-Cloth disenfecting wipes	PDI	13872