Commencez par post-fixer le tissu DRG disséqué de la moelle épinière de la souris anesthésiée dans du formaldéhyde à 4 % pendant trois heures à température ambiante. Ensuite, incubez le tissu dans du saccharose à 30 % dans du PBS à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Ensuite, préparez l’OCT de base en ajoutant le composé OCT et en recouvrant la surface supérieure du bloc d’aluminium.
Congelez le bloc d’aluminium recouvert à moins 20 degrés Celsius pendant cinq à 10 minutes. Coupez le haut de l’OCT à 30 micromètres d’épaisseur à l’aide du cryostat, jusqu’à ce que sa surface soit aussi plane que l’OCT de base. Marquez le bas de l’OCT de base à la position 6 :00, avant de retirer le bloc d’aluminium du cryostat.
Pour effectuer l’enrobage OCT des DRG, séchez le tissu DRG en le plaçant sur une boîte de Pétri sèche et en le déplaçant d’un endroit à un autre deux ou trois fois avec la pince à épiler sèche. Ensuite, placez le DRG sec sur la base OCT à la position 12 :00, à l’aide d’une pince à épiler sèche. Assurez-vous de garder une distance d’au moins cinq millimètres entre le bord supérieur du DRG et le bord supérieur de l’OCT de base, avec la partie dorsale à la position 12h00 et la partie ventrale à la position 6h00.
Ensuite, ajoutez l’OCT dans une forme ronde ou ovale pour enfoncer l’ensemble du tissu DRG avec le DRG au centre. Congeler l’échantillon OCT et DRG de couverture à moins 20 degrés Celsius pendant cinq minutes. Une fois cela fait, coupez le haut de la couverture OCT à une épaisseur de 30 micromètres jusqu’à ce que le DRG soit visible.
