Lysis and Digestion of Scarce Cells

Pour commencer, prenez une partie aliquote de cellules rares congelées et ajoutez 1 millilitre de tampon de lyse froide pour perturber la membrane cellulaire. Incuber les cellules sur la glace pendant 30 minutes, en mélangeant par inversion toutes les cinq minutes. Centrifuger les noyaux pendant 10 minutes à 1 000 G.Retirer le surnageant et remettre les noyaux en suspension dans 500 microlitres de tampon de restriction froid 1,25X 2.

Ajoutez ensuite 5,5 microlitres de dodécylsulfate de sodium à 10%, mélangez par vortex et incuber dans un bloc thermique. Ensuite, éteignez le SDS en ajoutant 37,5 microlitres de 10% Triton X-100. Mélanger et incuber l’échantillon comme démontré précédemment.

Ajouter 7,5 microlitres de Hind III pour digérer la chromatine, mélanger la solution et incuber pendant la nuit à 37 degrés Celsius.