Ligation and Decrosslinking of Scarce Cell DNA

Pour commencer, prenez l’ADN de la cellule rare digérée et placez-le sur de la glace. Préparer un mélange maître en utilisant les réactifs nécessaires pour remplir et biotinyler les surplombs de fragments de restriction. Incuber l’échantillon à 37 degrés Celsius pendant 75 minutes, en mélangeant par inversion toutes les 15 minutes.

Refroidir l’échantillon sur de la glace et ligaturer les extrémités d’ADN remplies en préparant un mélange maître en utilisant les réactifs nécessaires à la ligature. Enfin, incuber l’échantillon pendant quatre à six heures à 16 degrés Celsius, puis pendant 30 minutes à température ambiante. Ajouter 30 microlitres de 10 milligrammes par millilitre de protéinase K pour dissocier la chromatine.

Mélanger la solution et incuber toute la nuit à 65 degrés Celsius.